巴马小型猪对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的敏感性评价

为评价巴马小型猪对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的敏感性,本研究选择PRRSV抗体阴性的16头巴马小型猪和17头本地二元杂交猪作为研究对象,分别分为低剂量接毒组、高剂量接毒组、对照组1和对照组2,低剂量、高剂量接毒组肌肉注射接种PRRSV NVDC-JXA1强毒株,对照组1和接毒组混合饲养,对照组2分开饲养作为空白对照。接毒后每天测量体温,观察精神、食欲、死亡等情况,死亡动物剖检病变,攻毒后每隔7d采血用RT-PCR法检测病原,连续观察21d。结果绝大部分猪体温升高到41℃以上,且有3个以上温次,所有接种及混养动物都死亡,巴马小型猪死亡时间在8d~17d,二元杂交猪在7d~13d,死亡动物出现肺充血、出血、实变,扁桃体、淋巴结、肝脏、肾脏、皮下有出血等症状,病原RTPCR检测为阳性,说明攻毒动物死于HP-PRRS,表明巴马小型猪对PRRSV NVDC-JXA1强毒株非常敏感,可用于PRRS活疫苗的检验。     

猪感染类猪圆环病毒因子P1后血小板的变化

探讨类猪圆环病毒因子P1感染对广西巴马小型猪血小板参数的影响。将12头30日龄的广西巴马小型猪随机、平均分成两组．实验组经腹股沟淋巴结途径接种类猪圆环病毒因子P1的分子克隆。采用自动血液分析仪检测接种后3d、8d、17d、24d、31d及40d猪的外周血血小板参数。统计分析显示猪感染P1后,与对照组相比。实验组的血小板平均体积（MPV）无显著差异,而血小板计数（PLT）和血小板压积（PCT）在接种后8d明显降低,血小板体积分布宽度（PDW）在接种后17d显著降低。     

广西巴马小型猪GHR基因克隆及部分序列的PCR—SSCP分析

为了探讨广西巴马小型猪矮小的分子机理,以广西巴马小型猪肝脏RNA为模板,扩增巴马小型猪生长激素受体（GHR）基因的全序列,将该扩增片段连接到pMD18-T载体后经过转化测序。采用PCR—SSCP方法,对4个品种120头猪的第10外显子的部分序列进行多态性分析。结果表明,克隆的广西巴马小型猪GHR基因全长为1917bp（GenBank登录号为EF041823）,与GenBank（X54429）的序列同源性为99％,且第10外显子部分序列SSCP检测没有多态性。经序列比对后,发现广西巴马小型猪生长激素受体胞内域编码区发生7处突变,导致相应氨基酸发生置换,这有可能影响生长激素的胞内运输和生长激素受体的下游信号转导,但经SSCP检测发生突变的位点并没有引起单核苷酸构象的改变。该结论为进一步研究广西巴马小型猪的矮小机理与GHR基因的关系奠定了基础。     

广西巴马小型猪脂联素受体1和受体2 cDNA的克隆及序列分析(英文)

[Objective] To clone and analyze the sequence of Adiponectin receptor 1 (AdipoR1) and receptor 2 (AdipoR2) cDNA of Guangxi Bama mini-pig. [Method] The Adiponectin receptors cDNAs were amplified by RT-PCR using skeletal muscle total RNA as template and then ligated into pMD18-T vector after purification. The recombinant pMD18-T vector was transformed into the E.coli DH5α for identification and sequencing. And the results were compared with the cDNA sequence from other species. [Result] The fragments, 1 128 bp and 1 161 bp in size, were amplified by RT-PCR and respectively consistent with the coding sequence of AdipoR1 gene and AdipoR2 gene. The homology analysis showed that the sequences of AdipoR1 gene and AdipoR2 gene were respectively 99.8% and 99.7% homologous to the sequence of domestic pig reported in GenBank with one base and three base missense mutations correspondingly. [Conclusion] The AdipoR1 gene and AdipoR2 gene were successfully amplified from Guangxi Bama mini-pig, laying the foundation for the further study of the biological function of AdipoR genes and the design of novel drugs with AdipoR as target.     

Research Progress on Animal Models of Bama Miniature Pigs in the Field of Medicine

Bama miniature pigs, which are local high-quality species of China, have the advantages of genetic stability, ideal hair distribution, microsomatia, prolificacy, low fodder demand, strong disease resistance, and they are similar to human beings in aspects of physiology, anatomical structure, drug metabolism, biochemical indicators, disease mechanism, etc. Bama miniature pigs have been used in the wide fields of medical research, such as cardiovascular system, skin plastic, endocrine and metabolism, digestive system, oral medicine, heterograft, Chinese medicine, anesthesiology, nervous system, etc., and been applied to establish the animal models which are similar to human diseases, such as myocardial ischemia, coronary micro-embolization, atrial septal defect, atherosclerosis, skin injury, transdermal drug, metabolic syndrome, diabetes mellitus and complications, obstructive jaundice, chronic pancreatitis, liver cirrhosis, liver radiofrequency ablation, periodontal tissue inflammation, mandibular defect, heterogeneous organ/cell transplantation, syndrome of Chinese medicine, anesthesia, cerebral ischemia, stent implantation, shock, etc. Bama miniature pigs, as an ideal experimental animal, have broad application prospects in biomedical research.In this article,we mainly summarized the progress of Bama miniature pigs in the field of medicine, to understand the types, construction methods and pathological characteristics of Bama miniature pigs disease models, which contribute to further explore the specific etiology, pathogenesis, complications, prevention and control measures, etc., and laid the scientific foundation for expanding the research scope and improving the medical level.     

急性冷刺激后巴马猪背膘和腹股沟皮下脂肪组织的脂质组比较

本研究旨在获得巴马猪皮下脂肪组织（包括背膘（backfat）和腹股沟皮下脂肪组织（inguinal subcutaneous white adipose tissue，iWAT））在急性冷刺激（4 ℃、4 h）后其脂质组成应答的差异。正常饲喂的6月龄巴马公猪在急性冷刺激处理后进行屠宰，收集背膘和腹股沟皮下脂肪组织，利用液相二级质谱（LC-MS/MS）高通量脂质组学检测技术分析其脂质组成。结果表明，在巴马猪皮下脂肪组织中，中性脂类、游离脂肪酸、磷脂类和鞘脂类4大类脂质含量差异巨大，其中含量最高的为中性脂类，在腹股沟皮下脂肪组织和背膘中分别占4大脂类总和的97.43%和98.53%；含量最低的为鞘脂类，在腹股沟皮下脂肪组织和背膘中所占比例分别为0.10%和0.07%。在16亚类脂质组成中含量最高的脂质为甘油三酯，在腹股沟皮下脂肪组织和背膘分别占16亚类脂质总和的95.97%和97.33%；含量最低的脂质为磷脂酸，在腹股沟皮下脂肪组织和背膘中所占比例分别为3.98E-04%和1.13E-04%。主成分分析表明，背膘和腹股沟皮下脂肪组织在急性冷刺激后脂质组成存在差异。以∣差异倍数∣>1.5和P<0.05为标准筛选，共获得18种差异显著的脂类，其中16种脂类在背膘中含量显著低于腹股沟皮下脂肪组织，其中包括14种甘油三酯、DAG32：1（16：1/16：0）和PE40：6p；只有2种脂质（CL74：8（18：2）和TAG54：3（16：0））在背膘中的含量显著高于腹股沟皮下。巴马猪皮下脂肪主要脂质组成为甘油三酯；急性冷刺激后，背膘和腹股沟皮下脂肪组织对急性冷刺激存在不同的应答。     

电转染法电压优化与广西巴马小型猪转基因克隆胚胎的生产

本试验旨在优化电转染电压并构建转基因体细胞,为生产转基因广西巴马小型猪打下技术储备。以新生广西巴马小型猪肾脏成纤维细胞和pEGFP-N1为材料、以细胞存活率和转染率为电转染效率评价指标,筛选最佳电压,然后用优化电压进行电转染并经G418抗性筛选获得转基因体细胞系,通过体细胞核移植技术获得转基因克隆胚胎。本研究筛选出最佳电压为120 V,用优化电压进行电转染并成功构建表达GFP的转基因细胞,最后通过体细胞核移植成功获得表达GFP的转基因克隆胚胎。结果表明优化的电转染电压可以高效构建广西巴马小型猪转基因体细胞,并可通过体细胞核移植生产转基因克隆胚胎。     

巴马香猪产活仔数性状全基因组关联分析

为寻找与巴马香猪产活仔数相关的分子标记,试验利用全基因组关联分析（GWAS）定位并筛选了影响产活仔数性状的候选基因,采集297头具有多胎产仔记录的巴马香猪耳组织样品,提取DNA并利用猪50K SNP芯片进行基因分型,分型结果经质控与基因型填充后,使用Tassel软件对巴马香猪产活仔数性状进行全基因组关联分析。结果显示,巴马香猪平均窝产活仔数在1~9胎内随着胎次增加逐渐升高;经质控过滤后共获得32 816个SNPs位点,利用全基因组关联分析共筛选到8个与巴马香猪产活仔数相关的SNPs位点,分别在基因组或染色体水平达到显著;对关联显著SNP位点上下游500 kb内的编码基因进行富集分析,并依据猪繁殖性状相关QTL区域及基因功能,最终筛选到4个基因（CAPZB、MSH3、CITED2和HSD17B7）作为影响巴马香猪产活仔数的候选基因。     

巴马香猪精液冷冻保存研究

利用甘油和二甲基亚砜（DMSO）作为冷冻保护剂,以精子存活率为评价指标,研究了冷冻保护剂对香猪精液冷冻保存效果的影响。试验分工、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4个试验组和1个对照组。以解冻后的精子活力、活率为判断标准,比较了4种冷冻保护液对香猪精液冷冻保存的影响。结果表明,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ组精子活率显著高于Ⅲ组（含5％甘油）（P〈0．05）;试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ组之间差异不显著（P〉0．05）;Ⅰ组精子活率最高,达到53．10％。