头孢氨苄免疫层析表面增强拉曼光谱检测方法研究

【目的】 建立一种简便、快速、灵敏度高、特异性强的头孢氨苄免疫层析表面增强拉曼光谱(SERS)检测新方法。【方法】 制备金银复合核壳结构的纳米贵金属,用来标记头孢氨苄抗体和拉曼信号分子5,5’-二硫代双2-硝基苯甲酸 (DTNB),合成拉曼免疫探针,用透射电子显微镜和双光束紫外分光光度计对纳米金和修饰拉曼信号分子的金银复合核壳结构进行表征。将合成的拉曼免疫探针固定在微孔板上,待测样品中的头孢氨苄与包被在硝酸纤维素膜上的头孢氨苄抗原竞争结合拉曼免疫探针,通过免疫层析试纸条结合共聚焦拉曼光谱仪读取DTNB的信号值,建立头孢氨苄定量检测技术,并应用于实际牛奶样品的检测。【结果】 透射电子显微镜和双光束紫外分光光度计表征结果显示,纳米银成功包裹在金颗粒表面。用共聚焦拉曼光谱仪检测免疫层析试纸条上拉曼信号分子的特征峰,拉曼信号分子特征峰为1 062、1 154、1 334和1 558 cm^-1,其中1 334 cm^-1处特征峰信号最强,选取此处峰高定量测定头孢氨苄的含量。头孢氨苄免疫层析表面增强拉曼光谱检测的线性范围为0~1 ng/mL,检测限为0.001 ng/mL,头孢氨苄的半数抑制质量浓度为0.05 ng/mL。与头孢克洛交叉反应率为111.1%,与头孢曲松钠、头孢夫辛酯、头孢噻吩钠交叉反应率均低于0.1%。实际样品加标浓度为1、4和8 ng /mL,回收率分别为94.4%、103.3%和97.5%。【结论】 本研究建立的头孢氨苄免疫层析表面增强拉曼光谱检测方法操作简便、快速、灵敏,耗材成本低廉,可满足奶牛养殖农场和乳品加工企业进行大批量样品初筛检测需求。     

鸡毒支原体胶体金免疫层析试纸条的研制和初步应用

为研制一种用于快速检测鸡毒支原体(MG)的胶体金免疫层析试纸条,采用直径20nm的胶体金颗粒标记纯化的MG多克隆抗体,硝酸纤维素膜检测线和质检线分别喷加纯化的MG多克隆抗体和兔抗鸡IgG抗体,制作胶体金试纸条。试纸条检测MG阳性显示两条红色反应条带;阴性为一条红色反应带。本试纸条可检测到1∶1 280倍稀释的MG抗原,即颜色变化单位为8×104 CCU/mL,具有高度的灵敏性。用试纸条检测衣原体、滑液支原体、猪肺炎支原体、鸡大肠埃希菌和鸡白痢沙门菌等均呈阴性,表明该试纸条具有较好的特异性。对试纸条检测呈MG阳性的38只病鸡进行MG培养验证,所得结果一致;同时对MG培养检测的另外95份病鸡样品进行试纸条测试比对,符合率为96.84%,证明该试纸条具有很高的准确性。该胶体金免疫层析试纸条检测MG操作简单,灵敏度、准确度、特异性等均符合要求,可以用于养殖场批量MG的检测。     

动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇快速检测产品的稳健性评价

对市售瘦肉精三联快速检测卡进行了质量检测及稳定性评价,以期为评价和控制快速检测卡质量提供依据。根据国家规范,采用空白基质加标制备盲样,并验证盲样的均匀性和稳定性,对瘦肉精快检产品进行评价测试,系统性地研究产品评价过程中温湿度、前处理、贮存时间等条件对性能指标的影响。结果表明:瘦肉精快检产品在温度为0℃和35℃贮存时的检出率分别为84%和96%,湿度为42%和80%时的检出率分别为96%、82%,在7月和12月时的检出率分别为95%和96%,快检产品在模拟振动和不振动条件下的检出率分别为93%和96%,样品前处理加热温度为80℃和100℃时的阳性率分别为89%和98%,不同基质样品包括猪肉组织和猪尿液时的检出率分别为81%和96%,不同操作熟练程度时的检出率分别为82%和96%。由此可知,通过对快检产品设置不同温度水平、贮存条件和样品基质等变量因素,阐明了多种因素对快检产品稳定性的影响。     

卤虫卵化学成分的分离与分析

本试验对卤虫卵的化学成分进行分离和分析。卤虫卵的含油量为7．1％，油中不皂化物的含量为4．9％，主要为胆甾醇。脂肪酸中含有较大量的油酸、棕榈酸、棕榈油酸、花生四烯酸和二十碳五烯酸。卤虫卵含蛋白质为20．9％，还含有多种氨基酸。     

人C型溶菌酶发酵与分离纯化工艺的研究

[目的]研究毕赤酵母菌株(Pichia GS115)表达人C型溶菌酶(H-LYZ)的发酵与分离纯化的工艺.[方法]探讨酵母生长规律,研究不同菌体浓度、不同诱导时间对蛋白产量的影响,并且探讨不同pH条件对DEAE-SepharseFF和CM-Sepharose FF层析分离纯化目标蛋白的影响.[结果]毕赤酵母菌株表达H-LYZ的最佳发酵条件为:发酵24h用浓度1％甲醇诱导,以后每12 h用浓度1％甲醇诱导,共6次,在此条件下可获得高产量目标蛋白.DEAE-Sepharose FF和CM-Sepharose FF分离纯化目标蛋白的最佳pH分别为6.65和6.50.[结论]该研究可为人C型溶菌酶的工艺化生产提供理论指导.     

全细胞催化制备单糖酸及其鉴定

首次利用氧化葡萄糖酸杆菌全细胞催化方法,在液体振荡反应体系中分别制取葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、半乳糖和甘露糖这5种植物单糖对应的单糖酸钙溶液。以高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测器(HPAEC-PAD)对它们的纯度进行检测,并采用红外光谱(FT-IR)和电喷雾质谱(ESI-MS)进行了物质的结构解析与鉴定。结果显示,制备所得的5种单糖酸钙的离子色谱检测纯度均大于98%;它们的红外光谱在1600 cm-1处均有去质子化COO-基团的特征吸收;在电喷雾质谱中2种戊糖酸和3种己糖酸的特征离子峰[M-H]-分别为165.1和195.1,与理论值相符。     

离子交换吸附分离茶氨酸的研究

本实验以目前工业上生产茶多酚后的废茶水为原料，通过超滤、脱色等预处理后，通过离子交换树脂对茶氨酸进行吸附分离，探索从其中分离制备茶氨酸的工艺。     

胆泥在畜禽养殖中的应用

1胆泥成分及含量 胆泥是盐卤矿经离子交换生成。白色或乳白色晶体状粉末,主要由90%以上的硫酸钙和4%～8%的硫酸锶构成,杂质含量小于2.5%。其含硫≥20%,钙21%～22%,锶2%～4%,几乎不含重金属等有毒有害元素。胆泥的烘制工艺中,采用300℃高温特殊烘制,使胆泥中的二水硫酸钙（CaSO4O2H2O）生成有特定大小和形状的晶体结构半水化合物CaSO4·1/2H2O。     

离子交换树脂用于液体糖脱色工艺研究

蔗糖糖浆的应用领域日益广泛，为了优化液体糖浆生产工艺，采用离子交换树脂进行蔗糖糖浆脱色，从三种树脂中选择D730作为脱色树脂，并在单因素试验的基础上，通过响应面试验优化脱色工艺条件；确定最佳工艺参数为：进样锤度50—55，温度50—60℃，pH7．8～8．2。流速1．5—2．0BV／h，经该工艺处理后的糖浆脱色效果好，再经过脱盐浓缩处理后的液体糖。可以达到QB／T4093—2010标准要求。     

猪凝血酶的亲和层析纯化及其酶原的激活研究

采用柠檬酸钡作吸附剂，ＥＤＴＡ溶解的方法从猪血浆提取凝血酶原，建立了凝血酶原激活的简单方法。并以环氧氯丙烷活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ为载体。采用１－乙基－３－（３－二甲氨丙基）碳二亚胺进行肝素的固定化，将固定化肝素用于猪凝血酶的亲和层析纯化。结果表明，通过一步亲和层析将猪凝血酶粗品提纯了８．２倍，获得了比活超过１１００Ｕ／ｍｇ的凝血酶，收率为６０％。