金龟子绿僵菌对苜蓿生长的影响及对苜蓿抗蚜性的诱导作用

为明确金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae在促进植物生长和提高植物抗性方面的作用,以金龟子绿僵菌拌土种植紫花苜蓿Medicago sativa,于室内测定植株的生长参数、苜蓿斑蚜Therioaphis trifolii的取食选择性及其发育历期和繁殖力。结果表明,金龟子绿僵菌处理后7 d,植株株高比对照显著增加了0.87 cm;处理后14 d,植株分枝数为3.88个,根长为54.67 mm,均显著高于对照。株龄14 d的植株接入苜蓿斑蚜,至株龄28 d时,金龟子绿僵菌处理的植株株高、分枝数和根长均较对照显著增加;同时生物量、叶绿素含量和类胡萝卜素含量也有不同程度的升高。选择性试验结果显示,24 h内选择并驻留在金龟子绿僵菌处理植株叶片上的苜蓿斑蚜数量较对照显著减少28.57%。以金龟子绿僵菌处理的植株叶片饲喂苜蓿斑蚜,1～4龄若虫的发育均有所减缓,各龄若虫的发育历期均较对照叶片饲喂的各龄若虫有所延长,而成虫寿命较以对照叶片饲喂时显著缩短了30.09%,总生命历期显著缩短了18.83%。表明金龟子绿僵菌促进了紫花苜蓿植株的生长,同时增强了植株对苜蓿斑蚜的耐害性、排趋性与...     

深圳高尔夫球场草坪蛴螬发生及其生物防治效果研究

调查了深圳2个高尔夫球场春季草坪蛴螬发生情况,研究了昆虫病原真菌绿僵茵对球场不同龄期蛴螬的致病性。调查发现,不同草坪样地的虫口密度为0-16只／m^2,对草坪危害不严重,草坪质量为中等偏上;虫口密度与土壤含水量呈显著负相关,虫口密度与土壤温度显著正相关,草坪色泽、根系完整性都与虫口密度呈显著负相关;草坪密度随虫口密度的增加而减小,但二者间的相关性未达到显著水平。从球场采集到主要为害虫为红脚绿丽金龟成虫,经产卵和孵化饲养获得幼虫用于致病性试验,结果表明绿僵菌对各龄期幼虫均有较强致病力,其中对1龄幼虫作用最强。在土壤舍菌量66．7×10^8孢子／kg和33．3×10^8孢子条件下,1龄幼虫分别在6和9d内死亡率达到90％;在土壤含菌量16．7×10^8孢子／kg时,对1、2、3龄幼虫致死中时LT5。分别为7．3,14．3扣18．0d。增效剂能加速绿僵菌对蛴螬的作用。     

褐飞虱丝氨酸蛋白酶抑制剂基因Nlserpin2的克隆及其功能分析

【目的】 克隆鉴定褐飞虱（Nilaparvata lugens）丝氨酸蛋白酶抑制剂基因Nlserpin2,探明其表达模式和生物学功能。【方法】 基于褐飞虱转录组数据,利用PCR技术克隆Nlserpin2全长cDNA序列;利用生物信息学手段分析其核酸和蛋白序列特征;通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测其在褐飞虱不同发育时期（卵、1—5龄若虫和雌雄成虫）和初羽化雌成虫不同组织（脂肪体、肠道和卵巢）中的表达,以及病原真菌金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）侵染褐飞虱5龄若虫不同时间后的诱导表达模式;利用RNAi技术探明Nlserpin2基因沉默对褐飞虱5龄若虫存活率及抵御金龟子绿僵菌侵染能力的影响。【结果】 Nlserpin2 cDNA序列（GenBank登录号：KC355239）全长1 209 bp,编码402个氨基酸,含有serpin蛋白超家族所具有的典型serpin结构域和RCL区,且N端包含一段由27个氨基酸残基组成的信号肽。系统进化树分析表明,Nlserpin2与半翅目其他昆虫的serpin聚为一支,其中与白背飞虱（Sogatella furcifera）serpin亲缘关系最近。qRT-PCR分析表明,Nlserpin2表达具有明显的时空特异性,其在褐飞虱成虫中的表达量显著高于其他龄期,且在雄成虫中表达量最高;卵和低龄若虫（1—3龄）中Nlserpin2的表达量显著低于高龄若虫（4—5龄）,其中3龄若虫期最低;Nlserpin2在褐飞虱雌成虫肠道、脂肪体和卵巢中均有表达,且肠道中表达量显著高于脂肪体和卵巢。金龟子绿僵菌诱导2 d和3 d后Nlserpin2的表达量显著上调,但随着诱导时间的增加,Nlserpin2表达量呈回稳趋势。RNAi分析结果显示,显微注射dsNlserpin2可显著抑制Nlserpin2的表达水平。干扰Nlserpin2后褐飞虱5龄若虫的存活率以及对金龟子绿僵菌侵染的抵御能力均显著降低。与对照组相比,Nlserpin2干扰的褐飞虱在金龟子绿僵菌侵染5 d和8 d后的校正存活率分别下降了28.4%和31.0%,且均达到显著水平。【结论】 Nlserpin2在褐飞虱防御病原真菌侵染过程中发挥重要作用,可作为应用RNAi技术防控褐飞虱的潜在靶标和褐飞虱高毒力病原真菌遗传改良的资源基因。     

黄绿绿僵菌与反式茴香脑的相容性及其对菜青虫的联合毒力

为了明确植物次生代谢产物反式茴香脑与高毒力昆虫病原真菌黄绿绿僵菌Mf82菌株的相容性以及其对菜青虫的联合毒力，本文在室内评价了半致死浓度（LC₅₀）反式茴香脑与黄绿绿僵菌Mf82不同浓度孢子悬浮液以不同体积比混合后对菌株生长的影响，并测定了菌药联合使用对2龄菜青虫的毒杀效果。结果表明，黄绿绿僵菌与反式茴香脑对菜青虫均有良好的毒杀活性；反式茴香脑LC₅₀剂量与黄绿绿僵菌Mf82混合对菌株的菌落生长有一定促进作用，两者以体积比5:5、4:6和3:7处理后明显促进菌丝生长，且随着反式茴香脑在混剂中所占比例增大促进作用增强，孢子萌发率也比两者以2:8和1:9混合后的孢子萌发率高；混剂对菜青虫的致死率随二者混合比例的不同而变化，其中反式茴香脑LC₅₀分别与孢子悬浮液（1.5×10⁴～1.5×10⁸孢子/mL）以体积比5:5、4:6和3:7混合处理试虫的死亡率高于两者以2:8和1:9混合处理的死亡率，共毒系数分别为287、108和83，表明具增效与相加作用；以体积比5:5、4:6和3:7混合处理的致死中时（LT₅₀）也比单用黄绿绿僵菌的短。因此，在防治菜青虫时应选择相容性好、共毒系数高的混合比例，即5:5、4:6或3:7。黄绿绿僵菌和反式茴香脑联合应用对菜青虫的高毒力表明其具有开发成生物制剂用于对害虫进行高效安全绿色防控的潜力。     

基于响应面法优化莱氏绿僵菌SZCY200812的液相发酵条件

为提高莱氏绿僵菌菌株SZCY200812液相发酵时孢子萌发率和生物量，为固相发酵产孢提供高质发酵液，本研究采用单因素及Box-Behnken试验设计结合的方法对该菌液相发酵过程中培养液种类、装液量、pH、摇床转速及培养温度等条件进行优化，确定最佳的液相发酵培养条件。结果表明，通过单因素试验初步确定利用SDY培养液、装液量100/250mL、pH7、摇床转速180r/min及温度25℃，第120h每10mL液态发酵生物产量为0.8433g。通过响应面法建立了莱氏绿僵菌SZCY200812液体发酵培养菌丝生物量与自变量回归模型，根据模型所得结果得出装液量为100.82/250mL，摇床转速178.85r/min，温度24.80℃，pH6.73条件下为理论最佳液态发酵培养条件。为便于生产，得出该菌株SZCY200812在SDY培养液中最佳的培养条件为：装液量101/250mL、pH6.7、摇床转速179r/min以及温度25℃，第120h每10mL液相发酵生物产量达0.8637g。综合以上结果，影响莱氏绿僵菌SZCY200812液相发酵的因素由强至弱依次为pH（D）、温度（C）、摇床转速（B）和装液量（A）。     

我国部分地区土壤中绿僵菌的物种多样性

绿僵菌是一种广泛存在且具有较高经济、生态价值的极具发展前景的绿色安全生物防治材料。为了更好地了解我国绿僵菌资源的生物多样性，本研究从13个省份不同生境中采集土壤样品，采用选择培养的方法对绿僵菌菌株进行分离纯化，通过形态学、分子生物学获取其ITS1和ITS4序列等方法鉴定菌株。在用MEGA软件依据邻接法（NJ）构建基于绿僵菌菌株ITS1和ITS4序列的系统发育树并进行同源性分析的基础上，采用香农-威纳指数、优势度指数和均匀度指数评价其多样性。结果表明，在607份土壤样品中，分离出绿僵菌属真菌共计222株，其中优势菌种金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae 130株，优势度指数为0.586；另有马昆德绿僵菌Metarhizium marquandii 83株、黄绿绿僵菌Metarhizium flavoviride 7株、罗伯茨绿僵菌Metarhizium robertsii 2株。林地的香农-威纳指数最高，为0.983，说明其物种丰富度最高。林地的均匀度指数最高，为0.709，说明其不同种间分配最均匀。