家兔产气荚膜梭菌的分离、鉴定及致病性分析

为对疑似家兔产气荚膜梭菌病感染死亡的肉兔病例进行病原菌的分离鉴定,并分析其对家兔的致病性,试验采集死亡病例的肠道内容物,划线接种于兔鲜血平板和TSC选择鉴别培养基中,对病原菌进行分离纯化,利用细菌16SrDNA通用引物进行分子鉴定,分析其同源性,构建系统进化发育树,同时,对病原菌进行生化鉴定,并将病原菌腹腔接种30日龄肉兔,分析其致病性。结果表明,从病料中分离纯化到1株革兰氏阳性菌;通过对细菌16S rDNA基因测序分析及生化鉴定确定为产气荚膜梭菌,且在系统进化树中也与其聚为一簇;致病性分析发现,该菌对家兔具有较强的致死性,可使试验组肉兔在攻毒16h后全部死亡。综上所述,本研究成功获得1株具有较强毒性的兔源产气荚膜梭菌,为产气荚膜梭菌致病机制的研究奠定了基础,同时也为疫病诊断和防控提供了理论依据。     

山东省兔产业化经营状况调查与分析

利用实地调研所获得的数据,将山东省兔产业化经营与传统经营方式进行了对比,阐述了山东省兔产业化经营发展现状,分析了兔产业化经营的影响因素,为兔产业化经营的推广提出有效建议。     

SINGLE PORT LAPAROSCOPIC-ASSISTED OVARIOHYSTERECTOMY IN 3 RABBITS

Single incision laparoscopic surgery (SILS) involves only a single 2-3 cm incision in the ventral midline of the patient with entry of the port, particularly the foam SILS Port multiple access port. This type of minimally invasive surgery using only 1 port and a controlled Hasson approach provides decreased risk of iatrogenic abdominal viscera penetration. This SILS Port (Covidien, Medtronic, Minneapolis, MN) also allows easy transition of instruments, telescope, and bipolar electrocautery devices amongst the 3 built-in cannulae for ideal triangulation for each side of the patient. In these 3 cases, the body wall incision length was reduced as compared to an open technique, involved fewer incisions as compared to a multiple port access technique, and subjectively proposed less risk to the cecum with the foam port. The median surgery time was 50 minutes (45-55 minutes), and no intraoperative or immediate postoperative complications were encountered in this series. The purpose of this clinical technique article is to describe and illustrate the laparoscopic-assisted ovariohysterectomy procedure via SILS for the domestic rabbit.     

兔出血症病毒镇江株的分离鉴定及VP60蛋白活性表达

试验旨在分离兔出血症病毒（rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV）镇江株,分析其遗传进化变异,并表达具有良好活性的重组VP60蛋白。通过排除细菌感染、血凝（HA）和血凝抑制（HI）检测、动物攻毒试验与病毒传代、LD₅₀测定等方法,自江苏省镇江市某兔场发病死亡动物肝脏组织样品中分离病原并鉴定;RT-PCR方法获得VP60基因,通过分析VP60基因核苷酸及氨基酸序列研究其遗传进化;将VP60基因与pCold-Sumo载体连接,构建低温诱导、融合Sumo标签原核表达载体,15℃、IPTG诱导表达重组VP60蛋白并对表达产物进行反应原性鉴定。结果显示,分离鉴定获得RHDV ZJ2015毒株,该毒株能凝集人"O"型红血球,HA效价为11log2,其血凝性能被RHDV （AV33）抗血清抑制,该毒株的LD₅₀为10^-6.38/mL,具有较强的毒力;RT-PCR扩增得到大小约为1 740 bp的特异性条带,系统进化树分析显示,该毒株属于RHDV1抗原遗传变异株（RHDVa）,与RHDV1和RHDV2 VP60基因核苷酸序列同源性分别为89.4%~97.6%和81.1%~81.5%,氨基酸序列同源性分别为93.8%~98.3%和87.4%~87.6%。构建的低温原核融合表达质粒pCold-VP60在大肠杆菌Rosetta （DE3）中成功表达,通过SDS-PAGE及Western blotting分析,在分子质量74 ku处有特异性表达蛋白条带,且与抗血清发生特异性抗原抗体结合反应,说明重组蛋白具有良好的反应原性。本研究为开展兔病毒性出血症流行病学研究、开发新型重组疫苗与诊断试剂提供参考依据。     

透明质酸钠与软骨下钻孔对兔软骨损伤修复的对比试验

试验通过建立兔部分软骨损伤模型,采用外源性注射透明质酸钠和软骨下钻孔两种治疗方法,比较两种方法的修复效果及早期修复机制,为临床应用提供试验依据。试验选用36只哈白兔建立膝关节软骨损伤模型后随机均分为3组：自愈组（阴性对照）、用药组（透明质酸钠注射）、钻孔组（软骨下钻孔）。术后1、4、6、8周,采用RT-PCR方法检测修复物中Ⅱ型胶原（Col Ⅱ）、蛋白聚糖（Agg）、Ⅹ型胶原（Col Ⅹ）、Ⅰ型胶原（Col Ⅰ）及Runx2的mRNA表达量;术后8周,制作软骨切片进行HE染色、番红-固绿染色和甲苯胺蓝染色,分析3组的修复效果及修复机制。结果显示,两试验组软骨损伤都被明显修复,染色结果显示修复组织中软骨细胞增多,具有软骨典型的陷窝样结构,用药组阳性着色优于钻孔组。用药组软骨的特异性基因Agg和Col Ⅱ的mRNA表达量显著高于钻孔组（P < 0.05）,软骨细胞肥大相关基因Col Ⅹ和Runx2的表达量显著低于钻孔组（P < 0.05）。自愈组Col Ⅰ的mRNA表达量最高,钻孔组次之,用药组最低。试验结果表明,用药及钻孔对关节软骨损伤都有不同程度的治疗修复作用,自愈组修复物成分主要为纤维组织,透明质酸钠治疗后产生了较多的透明软骨成分,而钻孔修复后的表层覆盖薄层纤维软骨成分,在骨缺损短期修复中,透明质酸钠的修复效果优于钻孔疗法。     

水貂生长激素的原核表达及特异性抗血清制备

本研究旨在建立水貂生长激素（mink growth hormone,mGH）的原核高效表达体系,探索mGH蛋白规模化生产方法,利用获得的目的蛋白制备特异抗血清。将已构建的原核表达载体pET28b-mGH转化大肠杆菌Rosetta（DE3）^TM pLysS感受态细胞,经IPTG诱导表达,超声破碎菌体后离心获得包涵体蛋白,利用8 mol/L尿素对其进行溶解和复性,经Ni-NTA树脂亲和层析纯化获得重组蛋白。通过Western blotting检测及MALDI-TOF-MS质谱分析对获得的蛋白进行鉴定。用SDS-PAGE电泳法检测蛋白纯度,用BCA法测定其浓度。复性mGH蛋白与完全弗氏佐剂或不完全弗氏佐剂乳化制备免疫抗原,采用皮下多点注射法免疫3只新西兰大白兔,首次免疫剂量为600 μg/只,二免剂量为600 μg/只,三免剂量为400 μg/只。三免10 d后分离制备血清,Western blotting法检测其特异性,间接ELISA法检测其效价。结果表明,原核表达的包涵体经Ni-NTA柱纯化后所得蛋白鉴定为mGH融合蛋白;SDS-PAGE电泳鉴定复性mGH蛋白条带单一,纯度达90%以上,BCA法计算蛋白浓度为669 μg/mL,均达到了免疫动物的要求;制备的抗血清经Western blotting检测具有良好的结合特异性,间接ELISA法测定其抗体效价达1：256 000以上。上述结果表明,原核表达载体pET28b-mGH可在大肠杆菌Rosetta（DE3）^TM pLysS细胞中高效表达mGH融合蛋白,表达蛋白经变性、复性和纯化后免疫新西兰大白兔,可制备高效价特异性抗血清。     

猪细小病毒在兔体内的垂直传播

以猪细小病毒（ＰＰＶ）细胞复壮毒接种于妊娠后１１～１３ｄ的初妊母兔,接毒的初妊母兔均于妊娠后３０～３２ｄ分娩。分娩后立即扑杀接毒母兔及其死产仔兔、对照母兔及其仔兔,分别无菌采集其肝脏和肾脏,按常规方法处理后以银加强胶体金技术进行检测,结果试验兔样本均为阳性,而对照兔样本均为阴性,这表明ＰＰＶ也可在兔体内垂直传播,并引起繁殖障碍。初妊母兔可替代妊娠母猪作为ＰＰＶ人工感染试验的动物模型。     

兔圆小囊及肠道组织中抗菌肽的免疫组织化学和免疫电镜细胞化学定位

采用免疫组织化学和免疫电镜细胞化学技术观察了兔圆小囊及其他肠道组织中产抗菌肽细胞的分布定位。免疫组织化学观察发现,产抗菌肽细胞在兔圆小囊的黏膜上皮、圆顶上皮以及淋巴组织的滤泡生发中心、圆顶区和帽区均有分布;在兔感染多杀性巴氏杆菌后,圆小囊及其他肠道组织中的抗菌肽免疫组织化学阳性细胞数量明显增多,阳性反应增强。免疫电镜细胞化学观察结果显示,除肠道黏膜上皮细胞、异嗜性白细胞、巨噬细胞中存在抗菌肽免疫组织化学阳性反应信号外,在淋巴细胞内也发现阳性反应信号,尤其是在圆小囊淋巴组织中的DNES细胞内发现抗菌肽免疫组织化学阳性反应信号。表明圆小囊的DNES细胞和淋巴细胞均可产生抗菌肽。     

菊花粉和苜蓿草粉颗粒料饲喂肉兔对比试验

选择50日龄生长发育良好的塞北兔76只,随机分成2组,试验期60 d,通过饲喂苜蓿草粉和菊花粉各占日粮12%的颗粒料,时比分析两种颗粒料的饲喂效果.结果表明,整个试验期两组兔平均日增重分别为26.72g/(d·只)和28.37g/(d·只),菊花组高于苜蓿组,但差异不显著(P＞0.05),而41～60 d菊花粉组显著高于苜蓿组(P＜0.05).各测试期两组兔体长、胸围、皮张面积、胴体重、屠宰率等生产性能的差异均不显著.用菊花粉代替苜蓿草粉生产的颗粒料饲喂肉兔可行.