重点区域规模化牧场牛奶源大肠杆菌耐药性研究

本研究旨在调查牛奶源大肠杆菌的分离率和耐药性,以提高药物治疗效率,避免同种药物多次使用导致耐药性,为兽医临床合理有效地使用抗菌药物提供理论依据。在2017—2018年间,本研究从全国11个重点区域52个规模化奶牛养殖场采集2 309份牛奶样本,对奶样进行分离鉴定,并对大肠杆菌分离株进行18种抗菌药物的敏感性试验。分离鉴定结果显示,牛奶源大肠杆菌的总分离率为29.75%,其中贵阳地区分离率最高(52.99%),上海地区最低(9.29%)。药敏试验结果显示,2017年的大肠杆菌分离株对氨苄西林(40.98%)和多西环素(36.63%)的耐药率高,而多黏菌素(0.47%)和美罗培南(0%)的耐药率极低或无耐药性,2018年的大肠杆菌分离株对氨苄西林(25.74%)和链霉素(19.59%)的耐药率高,对亚胺培南和美罗培南未发现耐药;其中18种抗菌药物的耐药率均未超过50%。     

多重实时荧光定量PCR鉴别欧洲型、美洲型和高致病性PRRSV检测方法的建立

根据欧洲型N基因、美洲型M基因和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)nsp2基因的各自保守序列设计特异性的引物和不同荧光标记的TaqMan荧光探针,通过优化反应体系和扩增条件,建立了能够检测欧洲型、美洲型和高致病性PRRSV的多重实时荧光定量PCR方法。该方法的重复试验表明其批内和批间的变异系数最高值分别为1.84%和1.76%;灵敏性试验表明其检测下限为10copies/μL;特异性试验表明与其他一些猪源病毒无交叉反应,具有良好的特异性;临床试验表明,该方法能够快速准确地检测出临床组织样本中美洲型及高致病性PRRSV的核酸;此外,本研究用欧洲型PRRSV质粒进一步验证了该方法可以检测出欧洲型PRRSV的目的基因。该方法的建立为不同类型的PRRSV快速检测提供了有效手段,可用于猪繁殖与呼吸综合征疫情的监测及防控。     

19-去甲睾酮人工抗原及免疫学特性

合成19-去甲睾酮(19-NT)人工抗原,并进行免疫学特性鉴定.丁二酸酐法衍生化19-NT,制备17β-19-NT琥珀酸酯半抗原,其质谱和核磁共振NMR谱表明合成成功.分别用EDC法和混合酸酐法将半抗原与BSA(bovine serum albumin)和OVA(ovalbumin)偶联,制备免疫和检测抗原,并进行紫外扫描和红外光谱鉴定,NT与BSA偶联比为18:1.用NT-BSA免疫Balb/C小鼠(Mus muscalus)制备NT多克隆抗体,间接ELISA效价达到1:25 600.间接竞争ELISA的IC50为27.3 ng/mL,线性检测范围为3.3～225.0 ng/mL,最低检测限为1.6 ng/mL.纯化后的抗体与17α-去甲睾酮的交叉反应率为69%,与其它激素的交叉反应率均<0.05%.制备的抗体灵敏度高、特异性强,为试剂盒和试纸条的研制提供基础资料.     

渠井用水比对灌区降水响应及其环境效应分析

渠井结合灌区适宜渠井用水比例关系灌区地下水环境和区域农业可持续发展。该文以人民胜利渠灌区为例,集合了灌区1954-2014年农业用水量及降水量、研究区域2008-2014年渠井用水比、地下水埋深、地下水水化学特征数据,分析了降雨量、地下水动态特征与渠井用水比例的相关性,以期探明渠井结合灌区渠井用水比对降雨的响应及其对土壤和地下水环境的影响。结果表明,典型渠井结合灌区渠井用水比与年降水量呈线性正相关;渠系上游地下水水位变化较下游更为剧烈,在用水水平、用水方式一致条件下,渠井用水比例越大,地下水埋深超过11 m区域增幅越小,较大的渠井用水比例对于上游地下水位下降减缓效果明显;平水期、枯水期,由于渠井用水比例不合理,地下水无序开采且超采严重,区域地下水碱化趋势明显;受气候变化影响,近5 a渠灌水量仅为多年均值的75.52%,未来区域降水量具有减小趋势,这势必进一步加剧农业水资源紧缺的形式。为了满足农业的正常生产,增加灌区地下水开采成为唯一解决途径,这势必加剧地下水的碱化趋势及地下水超采区的扩大。因此,确定灌区适宜的渠井用水比例对于灌区水资源的科学利用与农业的可持续发展具有重要意义。     

阿莫西林纳米粒对沙门菌的体外抗菌后效应

为指导兽医临床中应用阿莫西林纳米粒治疗沙门菌病的给药方案,利用显微镜直接计数法测定了阿莫西林纳米粒对沙门菌的体外抗菌后效应(PAE)。结果表明:阿莫西林纳米粒在(0.5～4)×MIC的药物浓度范围内对沙门菌产生的PAE约在1.6～4 h,且PAE与药物浓度呈正相关,4×MIC时的PAE值较长,与1×MIC和0.5×MIC时均差异极显著(P<0.01),与2×MIC时差异显著(P<0.05)。结果说明,临床应用阿莫西林纳米粒治疗沙门菌病时,除了考虑药效学指标和药动学参数外,还应考虑PAE因素,可适当延长给药间隔时间。     

超声提取黄精总酚工艺的响应面法优化

基于超声提取黄精总酚的工艺体系,围绕料液比、乙醇体积分数、超声时间、提取温度和超声次数等5个因素对黄精总酚提取率的影响分别开展单因素试验,然后在单因素试验的基础上, 以黄精总酚提取率为响应值,选取提取温度、超声时间、超声次数这3个对黄精总酚提取影响较大的因素利用响应面法进行优化。结果显示,黄精总酚的的最佳提取工艺条件为料液比1∶50、乙醇体积分数70%、超声温度37 ℃、超声时间30 mins、超声次数3次。在此条件下,黄精总酚的提取率可达7.003 35 mg·g^-1。     

黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素的累加细胞毒性研究

由于饲料中多种霉菌毒素并存的几率比较高，本研究以仔猪肠上皮细胞（IPEC-J2）为模型，研究黄曲霉毒素B1（AFB1）、玉米赤霉烯酮（ZEA）和呕吐毒素（DON）的叠加细胞毒性。细胞毒性试验选用AFB1、ZEA和DON三种毒素作为响应面Box-Behnke设计的三个因素，以AFB1：10、20、30 μg/L，ZEA：150、300、450 μg/L，DON：500、1000、1500 μg/L作为Box-Behnke设计的三个编码水平。利用响应面设计构建得到17组复合霉菌毒素组合，以其对IPEC-J2细胞活力的影响作为参考指标，得到对细胞损伤程度最高和最低的霉菌毒素添加比例。结果表明：经方程预测后，得到细胞活力最低（霉菌毒素毒性最高）的AFB1、ZEA和DON组合为30、150 μg/L和1500 μg/L，经测定细胞活力为32.32%|得到细胞活力最高（霉菌毒素毒性最低）的AFB1、ZEA和DON组合为10、150 μg/L和600 μg/L，经测定细胞活力为53.01%。该结果为多种霉菌毒素叠加毒性的研究提供了依据。 [关键词] IPEC-J2细胞|黄曲霉毒素B1|玉米赤霉烯酮|呕吐毒素|细胞毒性     

5-氟脱氧尿核苷对SPF鸡胚最适浓度的测定及对禽痘病毒的抑制作用

用不同浓度的5-氟脱氧尿核苷(FUdR)接种10日龄SPF鸡胚,每个浓度分别接种5枚鸡胚,0.2 mL/枚,同时,设接种同剂量生理盐水的空白对照SPF鸡胚5枚,置37℃孵化培养。18日龄时全部打开鸡胚,观察鸡胚变化。将试验组鸡胚与对照组相比较,以接种鸡胚全部不出现任何异常变化的药物浓度确定为最适浓度。试验结果表明FUdR对10日龄鸡胚的最适浓度为250μg/mL,此浓度对禽痘病毒(属DNA病毒)的生长有明显的抑制作用。试验表明,以10日龄SPF鸡胚作为试验动物,可以用FUdR鉴定病毒的核酸类型。     

陕县店子乡中蜂资源及生态养蜂展望

为了摸清陕县中蜂和蜜源资源,发展当地中蜂生态养殖事业,为退耕还林的失地、失林农民找到一条生活之路,扶持全县残疾人养蜂致富,我们实地考察和走访了当地群众.结果发现店子乡现有中蜂近2 000群,多数箱养但无巢框,以生产蜂蜜和卖蜂为主.该乡蜜源丰富,有桃、梨、苹果、刺槐、椿树、大枣、荆条、芝麻、野菊花等30余种蜜源能被中蜂有效地利用.店子乡地处豫西大山深处,环境比较封闭,完全具备了中蜂原生态饲养、生产高档绿色中蜂蜜的自然条件,潜力巨大,前景广阔.当前,在退耕还林的大形势下,陕县店子乡政府和陕县残疾人联合会将发展中蜂产业列入工作计划中,下发文件,大力支持群众饲养中蜂.通过实地考察和访问,为政府决策发展中蜂原生态养殖业提供依据,对推动当地的中蜂饲养有指导意义.     

棉花秸秆纤维素降解菌的筛选鉴定 与降解棉秆效果研究

【目的】 利用微生物学和分子生物学手段筛选和鉴定棉秆表面附着的真菌,获得具有高效纤维素分解能力的真菌。【方法】 通过将棉花秸秆接种至不同选择性培养基中,分离挑选水解圈较大的菌株,进行镜检和分子生物学鉴定;并同时对菌株进行滤纸酶活性(FPA)和羧甲基纤维素钠(CMC-Na)糖化活力的测定,以及连续(25 d)观测棉秆纤维的失重率。【结果】 主要4株菌种水解圈直径大小排序为,SN-1＞SN-4＞SN-3＞SN-4(P=0.013)。对于CMC-Na糖化活力,24~96 h时SN-1菌种显著低于其它3个菌种(P＜0.05),120 h时,各菌种处理间差异不显著(P＞0.05)。对于FPA活性,第24和120 h时,SN-1和SN-4菌种显著高于SN-2和SN-3菌种(P＜0.05);其它时间点,各菌种按活性高低排序为:SN-1、SN-4＞SN-3＞SN-2(P＜0.05)。通过镜检和分子生物学鉴定,得到4株菌种分别为:SN-1为黑曲霉(Aspergillus niger),SN-2为赤霉(Gibberella moniliformis),SN-3为链格孢霉(Alternaria nees),SN-4为青霉菌(Penicillium italicum)。【结论】 黑曲霉降解棉花秸秆的效果最为显著。对于CMC-Na糖化酶活力、滤纸酶活性以及棉花秸秆的实际失重率(降解率),接种黑曲霉或青霉菌时表现均最佳。