利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联技术构建产肠毒素大肠杆菌LT敲除菌株

本研究旨在利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联的技术对产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）K88的热不稳定性肠毒素（heat-labile toxin，LT）基因进行无痕敲除并获得K88 LT^-缺陷菌株。通过序列比对获取LT两端同源序列，并构建包含LT边界、氯霉素筛选标记、sgRNA和LT同源臂的供体片段；将供体片段转化至ETEC K88，同时分别利用λ-Red同源重组系统和CRISPR/Cas9基因编辑系统，对LT基因进行敲除；通过PCR验证获得了K88 LT^-缺陷菌株，并通过试验测定了敲除菌株的溶血能力和生长曲线。结果显示，λ-Red同源重组系统可成功地将LT基因替换为相应的供体片段，CRISPR/Cas9基因编辑系统可高效地对筛选标记进行删除，最终通过λ-Red和CRISPR/Cas9结合的基因编辑系统可成功对ETEC K88的LT基因进行无痕敲除。体外试验结果表明，K88 LT^-缺陷菌株的溶血能力丧失，并且生长速度比野生型菌株减缓，LT可能和ETEC K88的致病能力和生长性能有关。表明λ-Red和CRISPR/Cas9级联的基因敲除方法可用于LT毒素基因及其他一些大肠杆菌基因的敲除。K88 LT^-缺陷菌株的构建为下一步研究LT毒素的致病机制奠定基础。     

高丹草种子萌发和幼苗生长对模拟盐碱互作胁迫的响应

为限制盐碱地高丹草种子萌发和幼苗生长的主导影响因素,将2种中性盐(NaCl、Na2SO4)和2种碱性盐(NaHCO3、Na2CO3)按照不同比例混合,模拟出16种盐碱互作条件,研究盐碱互作胁迫对高丹草种子萌发和幼苗生长的影响。结果表明,高丹草种子萌发及幼苗生长参数与总盐浓度、pH以及CO2-3和HCO-3浓度的影响较大,而CO2-3和HCO-3浓度又是影响pH的主要因素,总盐浓度和pH可作为影响高丹草种子萌发及幼苗生长的主导因素。但是,反映种子萌发参数的发芽率(Gr)、发芽势(Gp)、发芽指数(Gi)等指标以及反映幼苗生长参数的芽长(GL)、根长(RL)和侧根数(LRN)等指标对盐浓度和pH胁迫的敏感性不同,在相同等盐浓度下,随着pH的增加,GL、RL和LRN降低幅度较Gr、Gp、Gi等参数的降低幅度更为明显,盐害系数之间也存在明显的差异,说明盐浓度对高丹草种子萌发的影响较大,而高pH胁迫则主要影响其幼苗生长。因此,盐碱地高丹草的种植过程中不仅要考虑土壤含盐量的因素,而且要考虑pH的影响。     

局地尺度高寒草原土壤真菌多样性对地上植物多样性与生产力关系的调控作用

为研究局地尺度高寒草原土壤真菌多样性对地上植物多样性与生产力关系的调控作用，本研究以青海省湟源县局地尺度高寒草原为研究对象，对不同植物多样性梯度的地上生产力、土壤理化性状和土壤真菌多样性等指标进行调查、采样和分析。通过偏回归分析（partial least squares regression，PLSR）、方差分解分析（variance partitioning analysis，VPA）、构建结构方程模型（structural equation model，SEM）等分析手段，分析了土壤真菌多样性对地上植物多样性与生产力关系的调控作用。结果表明，高寒草原植物多样性与地上生产力存在显著线性正相关关系；土壤真菌多样性分别与植物多样性和地上生产力呈显著正相关关系；通过PLSR，VPA，SEM等方法控制土壤非生物因子效应后，真菌多样性与二者的显著正相关关系仍存在。综上所述，局地尺度下青海省湟源县高寒草原土壤真菌多样性是调控地上植物多样性与生产力正向关系的关键生物因子。     

混合所有制二级学院教工党员先锋作用发挥途径的探索与实践——以朋朋宠物科技学院为例

在混合所有制二级学院办学体制机制下,教工党员先锋作用的发挥对改革至关重要。本文以朋朋宠物科技学院为例,从教工党员先锋作用发挥的模式创建、具体途径和举措、改革的成效等方面,进行了全面的论述。     

雪莲果保健冰淇淋的生产工艺研究

通过单因素试验和正交试验，得到雪莲果保健冰淇淋的最优配方为:雪莲果浆 20%、白砂糖 10%、脱脂乳粉 5%、稀奶油 10%、鲜牛乳 45%、蛋黄粉 1%、复合稳定剂 0.5%、水 8.5%。感官评价结果显示，雪莲果冰淇淋组织细腻，具有雪莲果独特风味；营养成分分析结果显示，雪莲果冰淇淋糖(12.38%±0.06%)和脂肪(6.58%±0.22%)的含量较低，而总固形物(39.05%±0.05%)、粗蛋白(15.20%±0.18%)含量较高。此外，雪莲果浆的添加，使冰淇淋中粗纤维(0.06%±0.01%)和Vc(6.54%±0.08%)等功能性成分含量增加，提升了冰淇淋的风味特色和保健功效。雪莲果冰淇淋是一款低糖、低脂、高蛋白、高营养的保健冰淇淋，具有开发价值。     

大学图书馆组织结构设计探讨

运用现代组织设计的相关理论,对传统大学图书馆的组织结构进行深入剖析,分析了制约大学图书馆功能发挥的各种因素,提出了现代大学图书馆的组织结构设计方案。该方案能够兼顾图书馆教学、学科建设与科研以及图书馆的基本服务功能。     

油葵不同灌溉模式对土壤水盐含量的影响及经济效益分析

通过研究油葵不同灌水方式对土壤水分、盐分含量的变化和经济效益比较,找出合理的灌溉模式,提高灌溉水利用率。试验设4个处理:不灌水(CK)、灌水1次(开花期)、灌水2次(开花期、灌浆期各一次)、灌水3次(现蕾期、开花期、灌浆期各一次),每次灌水量900 m3/hm~2,重复3次,随机区组排列。结果表明:灌水2次处理在降低0~20cm土层土壤盐分含量、p H方面效果最好;灌水2次处理显著提高了油葵产量和经济效益,分别比对照提高91%、117%。灌水2次处理模式有利于油葵正常生长发育,降低了土壤返盐,能抑制耕作层中盐分的表聚,显著地提高油葵产量和经济效益,是油葵最佳的灌溉模式。     

施氮深度对‘黄金梨’树氮素吸收、分配及利用效率的影响

以7年生‘黄金梨’树为试材,采用~(15)N示踪技术研究了3个施氮深度[0(表面施氮)、20和40 cm]处理下不同器官对氮素的吸收、分配及利用效率,并探讨了氮素在土壤中的残留及损失。结果表明,梨果实成熟期,果实的Ndff值最高,其他器官的Ndff值均表现为20 cm施氮深度处理显著高于其他处理。各施氮深度处理,~(15)N的分配率均为贮藏器官最高,生殖器官最低。20 cm施氮深度处理的梨树N利用率最高(26.23%),40 cm施氮深度处理最低(15.65%)。N损失率以表面施氮处理最高(54.21%),20 cm施氮深度最低;0~80 cm土层的N残留率以40 cm施氮深度处理最高(31.73%),表面施氮处理最低。因此,本研究中,20 cm深度施氮处理能提高梨树各器官对N肥的吸收征调能力,氮素损失少。     

不同立地条件对川黔紫薇生长的影响

为了探索不同立地条件对川黔紫薇生长的影响,选取湖南省森林植物园、湖南城步南洞林场2个试验点研究了川黔紫薇1年生播种苗生长情况;选取湖南省森林植物园、湖南城步南洞林场和城步茅坪3个试验点研究了造林6年的川黔紫薇幼树生长情况。结果表明:(1)2个试验点的川黔紫薇1年生苗株高、地径均有极显著差异,以板页岩发育的黄壤的城步南洞林场试验点的1年生苗平均株高和地径分别为1.65 m、1.16 cm,以四纪网纹层发育的低丘红壤的湖南省森林植物园试验点的1年生苗平均株高和地径分别为1.08 m、0.82 cm。(2)3个造林试验点的6年生川黔紫薇的树高、胸径均有极显著差异,以板页岩发育的黄壤的城步南洞林场试验点的植株生长最快,平均树高和胸径分别为5.8 m和7.94 cm,以石灰岩发育的黄壤的城步茅坪试验点的植株次之,以四纪网纹层发育的低丘红壤的湖南省森林植物园试验点的植株生长最慢。结论认为川黔紫薇能在湖南省低丘至山地较大范围内栽培,但最适范围是海拔500 m左右及以上可造林山地,并且该树种是石漠化治理的优良树种。     

不同灌溉方式对北京春茬露地生菜的影响

为了探索适宜于北京春茬露地生菜的灌溉方式,以生菜品种"雷达"为研究对象,设置3个灌溉处理,以常规灌溉为对照,研究不同灌溉方式对生菜生长、品质和产量的影响。结果表明:常规灌溉处理的株高和叶片数显著低于微喷带和边缝式滴灌带处理;边缝式滴灌带处理的单方水产出最高,且其植株硝酸盐显著低于微喷带处理,维生素C含量要显著高于微喷带处理和常规灌溉处理,果实营养价值和安全性相对较高。综合考虑植株生长、品质、产量和单方水产出率等要素,边缝式滴灌带相对适宜春茬露地生菜的生产,其产量667m~2达到了2 797kg,单方水产出率达到31.3kg·m~(-3),单方水产出率比微喷带处理和常规处理分别高20.8%和233.0%。试验还得出了春茬露地生菜各生育时期的作物系数,能够为实现春茬露地生菜的高效生产提供一定的参考依据。