烟草转录因子NtMYB42基因的克隆与分析

【目的】克隆烟草木质素生物合成途径调控基因NtMYB42,为烟草品质改良提供参考依据。【方法】利用同源克隆法从栽培烟草K326克隆出NtMYB42基因全长序列和cDNA序列,研究分析NtMYB42基因的结构、编码蛋白理化性质、亚细胞定位和同源性等。【结果】NtMYB42基因组和cDNA全长分别为2 312bp和1 130bp,包含2个外显子和1个内含子,编码281个氨基酸,分子量为31.79kD,等电点pI为5.18,预测有3个糖基化位点和18个磷酸化位点;NtMYB42与SlMYB42等植物MYB42蛋白同源性水平较高,与SlMYB42一致性达82.6%。【结论】从K326中克隆出NtMYB42基因全长序列和cDNA序列,NtMYB42是番茄SlMYB42、矮牵牛PnODO1和拟南芥AtMYB42的同源基因,是烟草木质素合成途径调控的重要候选基因。     

小麦TaPIP1基因克隆及其在花药开裂中潜在功能分析

二系杂交小麦育种是小麦产量提高的重要途径之一。光温敏雄性不育小麦生殖生长过程中花药的发育及开裂情况直接影响杂交小麦的制种效率和产量。植物花药的开裂与脱水活动紧密相关。水通道蛋白(aquaporins,AQPs)是高效转运水分及特异小分子的膜内在蛋白,其中质膜内在蛋白(plasma membrane intrinsic proteins,PIPs)在水分的吸收与外排中发挥着重要作用。为进一步了解水通道蛋白在小麦光温敏核雄性不育系花药开裂中的作用提供理论基础。本研究以不育系BS366花药的cDNA为模板,克隆获得了TaPIP1基因。利用生物信息学软件对TaPIP1进行分析,该基因包含一个879 bp的开放阅读框,编码292个氨基酸。TaPIP1的启动子区存在赤霉素、脱落酸、茉莉酸和光等响应元件。TaPIP1属于MIP超家族,具有典型的NPA保守结构域,亚细胞定位于细胞质膜与核膜上。miRNA互作预测发现TaPIP1受tae-miR1131与tae-miR408的剪切抑制,表明TaPIP1可能和与植物的抗氧化能力相关。通过蛋白互作预测及qPCR实验,表明TaPIP1可与热激蛋白(heat s...     

马蹄金叶片离体培养及植株再生的研究

在不同植物生长调节剂组合、不同培养基条件下，探讨了马蹄金叶片离体培养的方法和影响因素。结果表明，含不同植物生长调节剂组合的培养基对愈伤组织的诱导频率无显著影响，出愈率均达90％-100％；以MS或B5培养基作诱导愈伤组织的基本培养基效果较好；将叶片接种到MS 2mg／L6—BA的诱导培养基中诱导愈伤组织，再用B5 1．5mg／L6-BA 0．5mg／L ZT 0．2mg／Lα—NAA作分化培养基出苗效果最佳，愈伤组织分化频率高达20％。     

共培养基对甘蓝型油菜下胚轴GUS瞬间表达及转化效率的影响

为提高根癌农杆菌介导的甘蓝型油菜遗传转化效率,以甘蓝型油菜"湘油15"下胚轴为外植体,以MS为基本培养基,研究了共培养基中α-NAA和6-BA浓度对根癌农杆菌介导法转化甘蓝型油菜过程中下胚轴GUS基因瞬间表达及转化效率的影响。结果表明,共培养基对GUS基因的瞬间表达和稳定表达具有重要影响,但共GUS基因的瞬间表达率和转化效率之间没有明显的线性关系。     

甘蓝型黄籽油菜遗传转化体系初探

以甘蓝型黄籽油菜GH01的下胚轴为材料研究了抗生素浓度、农杆菌感染浓度和时间对甘蓝型黄籽油菜遗传转化的初步影响。试验结果表明,卡那霉素(Kan)和头孢霉素(Cef)对芽的分化有一定的抑制作用,其合适的浓度为10mg/L的Kan,500mg/L的Cef;农杆菌的浓度和侵染时间也影响转化效率,在甘蓝型黄籽油菜的下胚轴转化中,适合用低浓度的菌液较长时间地感染。     

甘蓝型油菜F3’H基因反义植物表达载体的构建

类黄酮3’-羟化酶(F3’H)是类黄酮途径中的一个关键酶,对种皮色泽和花色的形成具有重要作用。通过PCR法扩增了甘蓝型油菜(Brassica napus L.)F3’H基因的一段特异保守片段F3’HA,并将其亚克隆到中间载体pCAMBIA2301G中,构建了F3’H反义植物表达载体pCAMBIA2301-F3’HA,通过PCR鉴定和酶切鉴定证实载体构建成功,并转化到根癌农杆菌LBA4404菌株中形成工程菌株。为进一步研究F3’H基因在甘蓝型油菜种皮色素合成途径中的分子生物学机理和该基因的代谢调控网络奠定基础。     

印度梨形孢提高烤烟抗旱能力的机理初探

为探明干旱胁迫下印度梨形孢提高烤烟抗旱能力的机理，以云烟87为试验材料，自然干旱7d,分析了生理生化指标及干旱相关基因表达的变化。结果表明，印度梨形孢能够定殖于烤烟根部，促进烤烟地上和地下部分生长，且干旱胁迫后叶片褪绿不明显，干旱症状轻微。在干旱胁迫下，与对照相比，接种印度梨形孢烤烟叶片中叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素含量降低缓慢，可溶性蛋白和Pro含量显著升高，MDA含量降低。随干旱处理时间延长，接种印度梨形孢烤烟叶片SOD和POD活性呈现先升高后下降的趋势，干旱相关基因NTNAC1和NAC4的表达上调，且显著高于对照植株。文中研究初步明确了印度梨形孢提高烤烟抗旱能力的机理，为深入研究印度梨形孢的抗逆性和烤烟在干旱地区的种植生产提供了理论基础。     

红薯藤中黄酮提取条件的优化

采用温浸法来提取红薯藤中的黄酮，通过单因素试验探讨了乙醇体积分数（0％、30％、45％、60％、75％）、浸提时间（10min、20min、30min、40min、50rain）、液料比（15：1、30：1、45：1、60：1、75：1）、浸提温度（40℃、50℃、60℃、70℃、80℃）对黄酮提取的影响。在此基础上，采用L9（3^4）正交设计试验，得出温浸法提取红薯藤黄酮的最佳条件为液料比40：1，乙醇浓度75％，浸提时间40min，水浴温度70℃，在该条件下黄酮的得率达到1．07％。     

微波辅助法提取山药多糖的研究

以山药多糖为研究对象,采用单因素试验对山药多糖的微波提取方法进行了研究,在单因素试验基础上采用正交试验,确定山药多糖提取的最佳工艺条件为:微波功率464W、料水比1:20、浸提温度60℃、醇沉比4:1.