猪轮状病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法的建立

根据GenBank中登录的猪轮状病毒(PoRV)VP6基因序列特征,设计特异性的引物和探针,条件优化后,建立检测PoRV TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法.结果表明:建立的Taq Man实时荧光定量RT-PCR方法敏感性高,最低可检测192拷贝·μL~(-1);特异性强,对猪常见病原(如猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒和猪流行性乙型脑炎病毒等)检测均为阴性;重复性好,扩增相关系数为0.999,其组内和组间变异系数分别为0.25%~1.26%和0.31%~1.49%.对临床收集的79份猪腹泻病料进行常规RT-PCR检测,检测出阳性样品4份,阳性率为5.06%(4/79);对这79份病料进行TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法检测,检测出阳性样品6份,阳性率为7.59%(6/79);同时,4份经RT-PCR检测为阳性的样品经TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法检测均为阳性,符合率达100%.本研究建立的方法为PoRV早期感染诊断提供检测手段.     

仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系的优化

[目的]优化仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系。[方法]以25份仁用杏和3份食用杏为材料,利用微卫星标记结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术筛选出多态性高、可重复的SSR位点。并比较不同因子对电泳体系的影响,探索仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系。[结果]仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系为：聚丙烯酰胺凝胶的浓度为6%,丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为29∶1,1000V下电泳2～3h,0.1%AgNO3染色15min后显影。[结论]该优化体系为仁用杏资源微卫星标记遗传分析奠定技术基础。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒FJ07A株的分离及其结构蛋白基因的序列分析

从福建某猪场发生疑似"高热病"死亡的小猪病料中分离到1株病毒,该病毒在Marc-145细胞上增殖致细胞病变。对分离病毒的TCID50、动物回归试验、RT-PCR鉴定及对病毒株的结构蛋白基因进行了测定与分析。结果表明:分离毒株为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(命名为PRRSV-FJ07A),TCID50为10-6.5.mL-1,对35日仔猪具有致病性,结构蛋白基因与美洲型代表株VR-2332核苷酸同源性为89.2%～95.8%,氨基酸同源性为88.1%～96.2%;与国内PRRSV-HUN4株的核苷酸同源性为90.1%～99.7%,氨基酸同源性为88.3%～100.0%;与欧洲代表株LV的核苷酸同源性为63.7%～70.0%,氨基酸同源性为59.6%～78.9%。PRRSV-FJ07A序列已登陆Genbank,登录号为GI:283100314。     

变异猪流行性腹泻病毒M和N双基因融合真核表达及其活性鉴定

[目的]体外表达变异猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M-N双基因融合蛋白并明确其生物活性,为开展PEDV新型疫苗及其诊断技术研究提供更多的候选蛋白.[方法]将变异PEDV的M基因克隆至pEASY-Blunt M2(pM2)真核表达载体构建pM2-M真核质粒,通过同源重组将N基因克隆至M2-M基因片段构建pM2-M-N双基因融合重组质粒,然后转染293T细胞表达出M-N双基因融合蛋白.通过Western blotting、ELISA及免疫BLAB/c小鼠试验鉴定表达融合蛋白的生物学活性.[结果]扩增获得的M基因、N基因片段大小分别为678和1359 bp,且与原序列的相似性均达100.0%.将M基因和N基因并连接至pM2真核表达载体成功构建获得pM2-M-N双基因融合重组质粒,M-N双基因片段大小为2004 bp,且与原序列的相似性为99.3%.以pM2-M-N双基因融合重组质粒转染239T细胞,表达出大小约75 kD且具有免疫活性的M-N双基因融合蛋白,纯化的M-N双基因融合蛋白能与PEDV阳性血清反应,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等病毒均无交叉反应;以其免疫BLAB/c小鼠能诱导产生特异性抗体.[结论]通过pM2真核表达载体能构建获得变异PEDV毒株的pM2-M-N融合双基因重组质粒,转染293T细胞后可表达出具有良好免疫活性的M-N双基因融合蛋白,为后期开展变异PEDV基因工程疫苗及其诊断技术研究提供更多的候选蛋白.     

以叶片为原料的食品加工技术

叶片作为植株的一部分,往往被人们忽视。殊不知有些叶片营养价值很高,可以进行加工,成为很好的食品或者保健品。下面介绍几种叶片加工技术。1 甘薯叶系列食品加工技术1.1 速冻甘薯叶程序 叶料选择→清洗→烫漂→速冻→包装→冷藏。操作要点:将沥干水的甘薯叶用塑料吊篮迅速放入沸水容器内。烫漂5～10秒,立即送预冷问,用冷水使其温度下降至10℃左右。速冻:采用平面网带式速冻机迅速冻结预冷后的甘薯叶,冻结器平均温度为-32℃冻品进货平均温度约为15℃,出货温度为-18℃。包     

绿豆酸化全乳饮料的研制

绿豆是一种兼营养和药用价值一体的经济作物，它营养丰富，其膳食纤维、淀粉、蛋白质及矿质营养含量较高。在药用价值方面，绿豆因含有多种生物碱而具有清热解毒作用。与一些药用植物中所含的生物碱作用相似，生物碱多数都具有药理作用，例如：麻黄碱具平喘解毒之功效，小蘖碱是很好的消炎药等。根据《本草纲目》记载：“绿豆，消肿制痘之功虽同赤豆，而散热解毒之功能，且益气。厚肠胃、通经脉，无久服枯人之忌。”所以人们很久以前就知道用绿豆制汤后作为一种防暑降温解毒的饮料。但美中不足的是制作的口味不佳，营养成分及贮藏期也有限，…     

蛋糖比对蛋液起泡性能影响的研究

本文从影响蛋液起泡性的最主要因素加以分析研究,确定出蛋液起泡最佳的蛋糖比例为1:1。据此拟定工艺技术参数,可以生产出理想的蛋糕产品。     

伪狂犬病病毒FJMH1907b株的分离和gD基因的演化分析

为探究福建省新流行的猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)gD基因的遗传进化情况,根据GenBank已公布的PRV gD基因序列设计1对特异性扩增引物,对新分离PRV FJMH1907b株的gD基因进行PCR扩增、测序,与国内外已发表的15个毒株进行同源性比对分析,并构建遗传进化树.新分离FJM...     

猪流行性腹泻病毒N蛋白的原核表达及生物学活性鉴定

为研究猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）的N蛋白特性及在诊断中的应用,本研究采用RT-PCR方法从猪流行性腹泻病毒FJ-11A株中扩增其N蛋白基因片段,并将其克隆到原核表达载体pET-32a上,构建原核表达重组质粒pET32a-PEDV-N,进行条件优化诱导表达、SDS-PAGE、Western blot和ELISA试验。结果表明,该重组目的蛋白（约60 kDa）得到表达,且具有良好的免疫学活性,该研究为开发猪流行性腹泻病毒诊断方法和研究N蛋白功能奠定基础。