嗜水气单胞菌温敏胞外蛋白酶基因eprJ的克隆与检测

根据已发表的人源嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)温敏胞外蛋白酶基因eprA1的核甘酸序列,设计合成一对引物,以嗜水气单胞菌鱼源株Ah J-1基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到1 005 bp的胞外蛋白酶基因eprJ1,将该基因片段连接到pMD18-T载体中,构建克隆载体pMD-eprJ1。序列分析发现,其与发表的Ah AH1的胞外蛋白酶eprA1基因的同源性有91%。根据测序结果在保守区重新设计一对引物以增强特异性,扩增片段大小为387 bp。对1990~2004年15年间从浙江、福建、湖北及江苏等地不同患病水产动物肝肾等脏器分离到的23株Ah检测结果显示,从中国东南地区分离的21株Ah水生动物致病性菌株扩增均为阳性,2株Ah非致病性菌株为阴性,推测该基因普遍存在于致病性Ah中。检测模板DNA的灵敏度可达1.5×10-3ng/μL。     

国际化框架下的日本农业问题及政策对我国的启示

二战以后，日本政府为改造本国传统农业，加快农业现代化进程，实施了一系列农业政策，使日本农业在20世纪80年代较快地加入了现代化农业国家的行列。但是，随着全球经济一体化和农业贸易自由化进程的加快，日本农业出现了与国际化趋势不相适应的一系列问题和矛盾，主要体现在：(1)粮食安全供给问题；(2)农业保护与农业贸易自由化的冲突问题；(3)农业经营体制问题；(4)农业劳动力的过疏化和老龄化问题等。就日本农业在国际化框架下存在的问题和矛盾以及为解决这些问题和矛盾日本政府进行的农业政策改革等方面进行了分析和探讨，在此基础上，指出了对我国农业国际化发展的启示。     

关于建平县营造混交林模式的探讨

大力营造混交林是顺应时代发展要求,实现林业由传统林业向现代林业转变,全面实施以生态建设为主、建设生态文明的重大举措。文章通过混交林的类型、混交的方式方法、混交林的特点、有利与不利因素等方面进行了探讨分析,并依据建平县的实际,提出了意见和建议。     

加州鲈源弗氏柠檬酸杆菌的分离鉴定及耐药性分析

【目的】明确引起佛山市三水某水产种苗有限公司育种基地加州鲈（Micropterus salmonoides）体表出血和溃烂的病原菌,并进行药物敏感性分析,为该病的临床诊断及科学防控提供科学依据。【方法】采用常规细菌分离方法从患病加州鲈的肝脏、脾脏和肾脏等组织中分离病原菌,经革兰氏染色和磷钨酸负染后,使用光学显微镜和透射电子显微镜观察菌体形态及其染色特性;通过ATB Expression生化鉴定仪和Biolog微生物自动鉴定系统进行生理生化特性鉴定,基于16S rRNA序列和gyrB基因序列进行分子生物学鉴定,经人工回归感染试验和组织病理学观察进一步确定病原菌的致病性及其对组织细胞的损伤,同时以K-B纸片扩散法测定其药敏特性。【结果】从患病加州鲈肝脏中分离获得1株优势菌株（180803bj_jzl）,为周鞭毛的革兰氏阴性杆菌,Biolog微生物系统自动鉴定其为弗氏柠檬酸杆菌（Citrobacter freundii）的可能性高达99.4%;基于16S rRNA序列和gyrB基因序列相似性构建的系统发育进化树均显示,分离菌株180803bj_jzl与弗氏柠檬酸杆菌聚类为一支,与GenBank已公布弗氏柠檬酸杆菌参考菌株的16S rRNA序列相似性均在99.00%以上,gyrB基因序列相似性则在91.00%以上。人工回归感染7 d内的累积死亡率达60%,临床症状与自然发病加州鲈的症状基本相同;其肝脏组织中央静脉和肝窦有红细胞淤积,肝细胞质内有大量空泡,呈散在变性坏死;脾脏的白髓与红髓分界不清,脾窦和脾小血管内有嗜铁血红素中心;鳃小片上皮细胞与毛细血管分离,呈球拍状,部分上皮细胞坏死脱落,只残存少量鳃小片骨架。分离菌株180803bj_jzl对氟罗沙星、氧氟沙星、大观霉素、新霉素、庆大霉素、恩诺沙星和诺氟沙星等7种抗菌药物敏感,对多西环素、四环素、乙酰螺旋霉素、罗红霉素、头孢氨苄和阿莫西林等15种抗菌药物已产生耐药性。【结论】弗氏柠檬酸杆菌感染可引起加州鲈体表出血和溃疡,且具有较强的毒力,致使肝脏、脾脏和鳃等组织病理损伤,实际生产中可选用新霉素和恩诺沙星等渔用抗菌药物进行防治。     

初探母源免疫处理草鱼母本及其子代5种免疫因子含量的周年变化规律

为探究草鱼母源免疫因子传递特性,本实验借助ELISA和qPCR技术分别检测分析了GCRV弱毒疫苗免疫草鱼母本及其子代（即母源免疫子代）早期胚胎阶段至一龄期间5种免疫因子（IgM、C3、LZM、MBL和Bf）蛋白活性和基因表达水平的周年变化规律。结果显示,草鱼母本经GCRV弱毒疫苗免疫后,血液中5种免疫因子蛋白活性及基因表达水平在产卵期均显著高于对照组1.5倍以上,至免疫后第11个月与对照组无显著差异。母源免疫子代发育至水花（4 d）时,IgM、C3、MBL和Bf的基因表达水平均高于对照组;发育至乌仔（15 d）时,IgM、C3和Bf的蛋白活性水平均略高于对照组;发育至5~11月龄时,5种免疫因子在肝脏、脾脏、肾脏和头肾等免疫器官中仍存在高表达。研究表明,GCRV弱毒疫苗促使母源免疫因子在亲本和子代体内富集表达具有一定的时效性,最长可维持至11个月,为实际生产中草鱼母本疫苗免疫程序的制定提供参考依据。     

鱼用哈维氏弧菌亚单位缓释微球口服疫苗的免疫效果初探

<专刊>= <栏目>=研究论文 <图片>= <表格>= <连载>= <来源>= <中图分类号>=S942.2 <主题分类>= <行业分类>= <本刊专题>= <本刊编号>=1005-8737-(2007)07-048-05 <基金项目>=农业部农业结构调整重大技术研究专项(060503B)，广东省科技计划     

茶树雌蕊总蛋白质双向电泳分离体系的建立

为建立一套适合茶树雌蕊总蛋白质分离的双向电泳体系,对茶树雌蕊总蛋白的提取方法、SDS-PAGE凝胶浓度、聚焦条件和IPG胶条pH范围等进行了比较优化。结果表明,TCA/丙酮-clean up kit法提取总蛋白,用17 cm pH 5~8 IPG胶条,13%SDS-聚丙烯酰胺凝胶进行分离,用考马斯亮蓝R250染色,可以获得清晰、分辨率高、重复性好的双向电泳图谱,共检测到约1200个蛋白点,主要分布在pH 5~8,相对分子量14~117 kD范围内,碱性蛋白得到有效分离,可以满足茶树雌蕊的蛋白组学分析和研究。     

凫早2号等早生茶树品种在宜宾的引种表现

为丰富宜宾茶树品种类型,提高宜宾早茶的品质,以福鼎大白茶为对照,引入早生茶树品种凫早2号和碧香早,观测其适应性和生物学性状,分析生化成分,并对制茶品质进行评价.结果表明:凫早2号移栽成活率较高,发芽较早,生长势旺盛,具有高产优势;内含物质丰富,制成烘青绿茶品质优于对照,制成工夫红茶品质与对照相当.碧香早移栽成活率较高,发芽较对照略迟,生长势旺盛;内含物质丰富,制成烘青绿茶品质与对照相当,制成工夫红茶品质与对照相比较差.凫早2号和碧香早在宜宾适应性较强,可作为优良茶树品种引进搭配种植,其中凫早2号适合制名优绿茶和红茶,碧香早适制名优绿茶.     

秸秆利用,下气力培育产业链

正博览会主角竟然是秸秆,没想到还能七十二变,看得人眼花缭乱。6月15日,在安徽合肥滨湖国际会展中心,安徽秸秆综合利用产业博览会在这里举行。安徽省农业委员会副主任陈卫东说:"国内外秸秆和畜禽废弃物综合利用的新技术、新模式、新设备、新工艺,涵盖了秸秆利用、秸秆收储运、秸秆文化工艺等全链条。"多样化利用,秸秆"能小能大"秸秆不仅能做成冰箱里的保温泡沫、房上的屋瓦、工艺包装袋等,就连盘子、杯子等日常生活经常     

鲤疱疹病毒3型ORF136基因编码蛋白多克隆抗体的制备与鉴定

为了对鲤疱疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus 3,CyHV-3)ORF136基因编码蛋白进行功能研究和血清学诊断,本实验通过对ORF136基因推导的第31~157位氨基酸序列进行PCR扩增,并与原核载体pET-32a(+)连接,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态后进行IPTG诱导表达,将纯化后的重组蛋白免疫新西兰白兔(Oryctolagus cuniculus)以制备ORF136多克隆抗体,运用Western blot和间接免疫荧光技术对抗体进行鉴定。结果表明,重组融合表达蛋白大小与预期一致,约为35 kD,且主要分布在包涵体中。Western blot分析显示,免疫兔后获得的纯化ORF136多克隆抗体能特异性识别纯化的CyHV-3和感染CyHV-3的KS细胞;间接免疫荧光分析进一步表明ORF136多抗能识别感染CyHV-3的KS细胞。ORF136多克隆抗体的制备为ORF136蛋白功能研究和CyHV-3血清学诊断方法的建立提供了重要基础。