犬瘟热病毒小熊猫株H、F和N基因的克隆及表达

根据GenBank中发表的犬瘟热病毒（CDV）的核苷酸序列，设计并合成了扩增CDVH、F和N基因的3对引物，经RT—PCR分别扩增获得了CDV小熊猫株（LP株）H、F和N基因，并对H、F及N基因进行了克隆和序列测定。序列分析表明，CDV LP株属于强毒谱系，与CDV流行株的亲缘关系近．H基因含有较多潜在的糖基化位点．F和N基因相对比较保守。将CDV LP株H、F和N基因克隆入真核表达栽体pVAX1的CMV启动子下游，构建了CDV基因疫苗表达载体pVAXLPH、pVAXLPF、pVAXLPN，体外转染BHK-21细胞．用间接ELISA方法检测到目的蛋白的表达。用构建的3个表达质粒免疫小鼠，从小鼠血清中检测到了抗CDV抗体．初步证实用CDVH、F和N基因作为核酸疫苗免疫动物，可以激活机体的免疫应答。     

朱顶红若干观赏性状在F1代的遗传表现

【目的】研究朱顶红花径、花梗高度等6个观赏性状在杂交一代(F1)的遗传表现,为朱顶红遗传育种工作提供理论依据。【方法】以外院1号、苹果、红狮子等10个朱顶红品种为亲本,配成12个杂交组合,观测其F1代花径、花梗高度、花梗直径、花色、花型以及花朵开张角度等遗传性状,并与其亲本的相应性状进行比较,计算狭义遗传力。【结果】朱顶红F1代的花径、花梗高度、花梗直径与其双亲比较,表现出明显的衰退现象,杂种总平均花径、花梗高度和花梗直径分别相当于中亲值的89.8%,81.0%和88.1%,但仍有超高亲个体存在;在花色遗传上,红色较红白间色、粉色、白色的遗传能力强;在花型遗传上,重瓣对单瓣表现为显性遗传;在花朵开张角度遗传上,直角和钝角较锐角具有更强的遗传能力。朱顶红花径、花梗高度、花梗直径和花朵开张角度的狭义遗传力分别为81.5%,83.8%,49.4%和22.2%。【结论】朱顶红花径、花梗高度遗传力较高,适宜在世代早期进行严格选择;而花梗直径和花朵开张角度遗传力较低,适宜通过综合方法在晚期世代中选择。朱顶红花色遗传表现为红色遗传能力强,瓣型遗传表现为重瓣遗传能力强,花朵开张角度遗传表现为直角和钝角的遗传能力强。     

美国七彩山鸡传染性脑脊髓炎的诊治及病理研究

山西省某场美国七彩山鸡发病,确诊为七彩山鸡的传染性脑脊髓炎。其外部症状明显表现为精神沉郁、反应迟钝、头颈震颤,共济失调。病理解剖表明,该病病变主要在脑部,具体表现为脑膜紧张、湿润,血管呈树枝状充血状态,大小脑水肿。观察其病理组织学特征,切片表现为神经细胞变性和坏死、神经小胶质细胞增生、脑和脊髓出现明显的血管周围浸润现象,即血管套现象。     

重组鸡细胞外脂肪酸结合蛋白的原核表达及鉴定

细胞外脂肪酸结合蛋白(Extracellular Fatty Acid-Binding Protein,Ex-FABP)是一种鸡胚发育过程中表达于肥大软骨、肌肉纤维和血粒细胞中的脂蛋白,大小约为21 ku。试验通过构建Ex-FABP原核表达载体,以实现Ex-FABP蛋白的大量表达,并对其进行纯化及鉴定;以艾维茵肉鸡胫骨软骨总RNA为模板,RT-PCR扩增ExFABP基因,连接pGEM-T克隆载体后,再与载体pET-28a连接并转化,获得含pET-28a-Ex-FABP重组表达质粒的Escherichia coli BL21(DE3)表达菌株;使用IPTG诱导表达蛋白,SDS-PAGE鉴定表达情况,利用镍柱亲和层析法纯化蛋白,对纯化蛋白进行Western Blot鉴定。结果表明,试验成功构建重组表达载体pET-28a-Ex-FABP;表达产物经SDS-PAGE和Western Blot鉴定,结果显示,目的蛋白在24 ku附近出现特异性条带,表明表达蛋白正确。试验成功表达了大量纯度比较高的Ex-FABP蛋白,可为后续的动物试验以及家禽疾病的研究提供理论依据。     

采后‘嘎拉'苹果果实糖和淀粉代谢及关键酶基因表达特性

以‘嘎拉’苹果为试材,研究了采后果实后熟软化过程中可溶性糖和淀粉含量、相关酶活性及关键酶基因表达的变化,分析了低温、乙烯因子(1-MCP、乙烯利)处理对它们的影响,探讨了糖和淀粉代谢与采后‘嘎拉’果实软化的关系。结果表明:‘嘎拉’果实软化的初始阶段,淀粉降解对果实软化的影响最显著,并伴随淀粉酶(AM)活性和MdAM基因表达的快速上升,且淀粉含量、AM活性及它们与硬度的相关性均显著受到低温和乙烯因子的调节,表明淀粉降解与‘嘎拉’果实软化关系密切。糖代谢中,蔗糖、果糖和葡萄糖含量变化与果实软化表现显著的相关性,均受到低温和乙烯因子的调节,但仅有蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性与果实硬度的变化显著相关。随着果实软化SPS活性和MdSPS基因的表达量不断增加,并显著受乙烯利的促进,受低温与1-MCP的抑制,其活性及其与硬度间的相关性也受到同样的影响,表明蔗糖代谢参与了‘嘎拉’果实的后熟软化,SPS在蔗糖代谢中起重要作用。     

犬冠状病毒V1株纤突蛋白全基因克隆与序列分析

首次对犬冠状病毒(CCV)V1株纤突蛋白(S)基因进行了克隆和测序。根据GenBank中报道的CCV V54株S基因序列，设计了一对特异性引物，对CCV V1野毒株S基因进行了RT-PCR扩增。将扩增得到的PCR产物纯化后克隆到pGEM-T中得到重组质粒pTS，用于序列测定。结果该基因全长4362bp，编码1453个氨基酸，N端前18个氨基酸为推测的信号肽序列，后1435个氨基酸构成成熟蛋白。将V1株S全基因与GenBank中已发表的6个CCV毒株S基因进行了比较，结果核苷酸序列同源性在91．0％～99．0％之间；推导的氨基酸序列同源性在93．0％～99．0％之间；同时发现CCV变异区主要集中在S基因前1／2处，其中350-370、439-478、1718-1818三个区域碱基变异较大，而1060-1700区碱基却十分保守。基于S全基因聚类分析结果表明，S基因分型结果与CCV毒力强弱并不一致；V1野毒株推导的S蛋白潜在的N-联糖基化位点与CCV V54强毒相同，均为34个，比Insavc-1弱毒多一个；其中第566-568位糖基化位点是多数强毒拥有而弱毒Insavc-1没有的。推导的V1株S蛋白疏水性及抗原表位与Insavc-1株有一定的差异，这些差别对病毒致病性和免疫原性等影响需进一步的研究。     

分类施策防治光肩星天牛效果好

笔者根据多年光肩星天牛防治经验,总结出一套分类施策治理办法,以供同行参考。1!不同侵染期的防治方法侵染初期(新疫点):由于带活体虫害木的流动(随运输工具或水流流动),在某个地区出现新的疫点,这时林木受害株数少,受害程度低,往往不易发现,因此,监测检疫工作至关重要。监测检     

胡萝卜窖藏其产品研制

我国北方胡萝卜采收后,冬季严寒,春季回温快,易受冻害、热害而腐烂,影响品质和加工,甚至失去食用和加工价值.经窖藏,既可调节市场胡萝卜缺乏,满足鲜食用,亦可延长加工厂冬春季节原料的供给期,是一种成本低廉、方便宜行的农民增收的好方法.现将经验介绍如下.     

鸡传染性支气管炎病毒地方流行株的分离鉴定及免疫试验

从山西疑似IB的病料中,分离到1株IBV分离株,该分离株在电镜下可见到直径为60～120nm,有囊膜及纤突呈冠状排列的病毒粒子;对NDV有明显的干扰作用;分离株的传代物都有明显的致鸡胚矮小化作用;动物回归感染死亡鸡肾脏病变明显,表现肾脏肿大、花斑肾现象,输尿管内充塞大量尿酸盐;无直接血凝性,经1%胰酶处理后可凝集鸡红细胞;分离株对乙醚和氯仿敏感;采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对分离毒株进行扩增,结果均扩增出特异N基因核酸片断,以上结果表明该分离病毒为IBV.将该分离株制备灭活苗进行免疫试验,试验保护率为100%,结果显示了该分离株具有良好的免疫效力.     

一株鸡传染性支气管炎病毒地方分离株膜蛋白基因的遗传变异分析

对从山西省分离到的1株IBV(IBVSX16)的膜蛋白基因片段进行序列测定及分析,结果发现,IBVSX16株膜蛋白基因含有一个长681 bp的ORF,编码226个氨基酸残基组成的多肽,与疫苗株H120和中国分离株LX4推导的氨基酸序列比对发现,存在基因突变现象,未发现缺失和插入现象,变异主要发生在2～17位.系统进化关系显示19株IBV毒株分属于5个群.IBVSX16株位于第II群,中国IBV分离毒株主要集中在第Ⅲ群和第Ⅳ群,具有较明显的地理区域性,可见IBV分离株在基因进化关系上形成了自己较为独立的进化群.