应用噬菌体展示技术筛选兔出血症病毒抗原模拟表位

以抗兔出血症病毒(RHDV)的单克隆抗体A3c作为靶物质,应用噬菌体展示技术筛选RHDV抗原表位。将纯化的单抗A3c包被固相载体,经3轮亲和筛选后,挑取25株噬菌体单克隆并扩增,用ELISA测定后,提取阳性克隆单链DNA并测序,用阳性噬菌体克隆免疫小鼠制备高免血清,检测筛选抗原表位的免疫原性。结果表明:3轮亲和筛选后,特异性噬菌体克隆得到了有效富集,25株噬菌体单克隆中有19株为阳性克隆;测序结果表明,获得了与抗原高度同源的序列GTDDMDPGTTAA,即抗原的模拟表位,其中,氨基酸基序DXXDP为表位中的核心氨基酸;制备的小鼠高免血清与抗原具有较好的反应性,阳性噬菌体克隆与兔RHDV高免血清也具有较好的反应性。因此,该表位具有良好的免疫原性和反应原性。该研究为RHDV抗原表位的研究和新型疫苗的探索积累了资料。     

不同佐剂对兔出血症灭活冻干疫苗免疫效果的影响

健康新西兰成年兔 2 0只 ,随机分成 4组 ,在接种兔出血症灭活冻干苗的同时 ,各组分别注射左旋咪唑 (L MS,2mg/ kg)、黄芪多糖 (APS,2 .4 mg/ kg)、亚硒酸钠 (Se,0 .1 mg/ kg)和生理盐水 ,于免疫后 8、1 4、2 1、2 8d无菌心脏采血 ,应用间接 EL ISA和 MTT比色法检测机体抗体水平和淋巴细胞转化功能。结果显示 ,L MS组抗体和淋巴细胞转化水平在 1周后即可明显上升 ,与对照组差异显著 (P<0 .0 5 ) ;APS组 ,第 2周抗体水平达到最高 ,淋巴细胞转化功能显著增高 ,与对照组比较差异显著 (P<0 .0 5 ) ;Se组 ,抗体上升的过程较慢 ,第 3周达到峰值 ,与对照组和 L MS组相比 ,差异显著 (P<0 .0 5 )。结论 :L MS短期效果明显 ,但持续时间短 ;Se的作用缓慢 ,第 2 1天抗体水平才明显上升 ;APS调节效果最好 ,免疫后 8d即迅速刺激体液免疫和细胞免疫 ,且可较长时间维持较高水平     

国家一类新兽药兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗

兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗，由江苏省农科院兽医研究所和南京天邦生物科技有限公司研制申报，经农业部兽用生物制品规程委员会审查通过，2005年11月16日被批准为国家一类新兽药，并颁发新兽药注册证书【证号：（2005）新兽药证字36号】。     

兔大肠杆菌病的诊断与防治

１９９８年底至１９９９年元月,山东枣庄某兔场发生一种疾病,病兔主要表现为吃料减少甚至废绝,精神沉郁,四肢无力,部分病兔发生腹泻,病程短,一般发病后３天内死亡。该场原有４００多只兔,发病一个多月,死亡６０余只,经多种抗生素治疗无效,发病率达１５％,死亡...     

家兔传染性鼻炎及其防治

近年来 ,全国家兔养殖的地域范围及群体规模不断扩大 ,由于多方面的原因 ,随之而来一些疾病如家兔传染性鼻炎由易被忽视变得日趋严重 ,成为影响养兔业的重要疾病。从气候炎热的广东、广西到寒冷的新疆、内蒙古自治区 ,从湿润的沿海到干燥的内陆地区 ,规模较大的兔场传染性鼻炎发病率均较高 ,严重地影响了兔场的正常生产和经济效益的取得。因此 ,重新认识该病的危害性和严重性是非常重要的 ,采取有效的措施进行防治也是十分必要的。1　流行特点家兔传染性鼻炎呈地方性流行。多数兔场均有高低不等的发病率。全国各地均有发生。不分品种和年龄 …     

中药成分复方对兔外周血淋巴细胞增殖、IFN-γ和IL-10的mRNA表达以及兔出血症疫苗免疫效果的影响

【目的】研究两个中药成分复方（cCHMIs）的免疫增强作用和机理。【方法】选择黄芪多糖、淫羊藿多糖、蜂胶黄酮和人参皂苷4种中药成分组成两个复方,用MTT法和荧光定量RT-PCR法测定它们对兔外周血淋巴细胞增殖和IFN-γ、IL-10 mRNA的表达影响;并将两个复方作为佐剂,配合兔出血症疫苗免疫幼兔,以铝胶苗和无佐剂苗为对照,分别于免疫后7、14、21、35、49 d用MTT法和血凝抑制法测定外周血淋巴细胞增殖和血清抗体的动态变化,于免疫后63 d测定免疫器官指数和攻毒保护率。【结果】两个复方在体外均可以显著促进淋巴细胞增殖,提高淋巴细胞IFN-γ、IL-10 mRNA的表达;作为佐剂,两个复方可以显著提高免疫兔的血清抗体效价,促进体内淋巴细胞增殖,显著促进圆小囊、肠淋巴结等免疫器官的发育,有较高的攻毒保护效果。【结论】两个复方中药成分具有较强的免疫增强作用,可被开发成新型的免疫增强剂。     

中药成分复方的佐剂作用及其与中药复方的功效比较

分别用淫羊藿多糖（EPS）加蜂胶黄酮（PF）、黄芪多糖（APS）加入参皂甙（GS）制成2个中药成分复方（cCHMI1,cCHMI2）,同时用相应的淫羊藿、蜂胶、黄芪和人参的提取物制成相应成分含量相同的2个中药复方（cCHM1,cCHM2）。试验1用2个中药成分复方（对照组为生理盐水）分别配合兔瘟灭活苗免疫家兔,于免疫后第0、3、7、10、14、17、21、28、35、42天用血凝抑制试验法测定血清抗体效价的动态变化;试验2将4个复方分别与灭活的新城疫强毒混合制成疫苗免疫雏鸡,以油佐剂苗、无佐剂苗和生理盐水为对照,分别于免疫后第7、14、21、28、35、42天用MTT法和血凝抑制试验法检测外周血淋巴细胞增殖和血清抗体效价的动态变化。结果表明,2个中药成分复方能显著提高家兔血清的兔瘟抗体效价,cCHMI1的效果优于cCHMI2;4个复方均能显著促进雏鸡淋巴细胞增殖和提高血清抗体效价,效果与油佐剂苗相当,中药成分复方稍优于中药复方。     

病毒性出血症疫苗免疫剂量对幼兔血清抗体效价的影响

选择35、40和45日龄的新西兰家兔各30只,每种日龄兔随机均分为5组,其中对照组注射生理盐水,4个试验组分别注射4种剂量(1 m l、2 m l、3 m l、4 m l)的兔病毒性出血症疫苗,分别于免疫前及免疫后1~7周内每周采血测定血清抗体效价的动态变化。结果表明:各日龄兔的2 m l、3 m l、4 m l剂量组的抗体上升速度和有效抗体维持时间均显著大于同日龄的1 m l剂量组;35日龄兔的2 m l、3 m l、4 m l剂量组的抗体峰值显著高于1 m l剂量组。提示35日龄兔注射剂量2 m l为最佳免疫程序。     

几种提纯RHDV方法的比较研究

运用离子交换层析法、凝胶过滤层析法和密度梯度离心法对已作初步处理的RHDV分别进行提纯，并通过血凝性鉴定、抗原蛋白含量检测、ELISA和SDS-PAGE凝胶电泳等方法检测其纯度。结果表明，通过sephadex-200凝胶过滤层析法所提纯病毒的血凝性和蛋白浓度最高；稀释至相同的蛋白浓度之后，该法所提纯的病毒ELISA检测的OD值最大；SDS-PAGE电泳条带1条，经免疫转印分析证明，该条带为RHDV蛋白特异性条带。表明通过该法提纯的病毒，回收率最高、蛋白最纯。