口蹄疫病毒WFL株基因组全长cDNA的克隆及序列分析

根据口蹄疫病毒基因组的结构特点以及GenBank上公布的全序列，用DNAMAN分别设计了涵盖整个基因组序列的3对引物，从接种口蹄疫病毒WFL株的细胞培养液中提取了病毒基因组RNA，采用RT-PCR方法和RACE法分别扩增了3条基因片段，并将扩增片段分别与T载体连接，在体外分别进行了5-半分子和3’半分子的构建。最后将5’半分子和3’半分子连接成基因组全长cDNA分子。经PCR鉴定、酶切鉴定及全长cDNA测序，证实成功构建了口蹄疫病毒wFL株基因组全长eDNA分子。序列分析结果表明，供试口蹄疫病毒基因组全长为8155nt，5＇UTR长1059nt；具有一个大的读码框，其核苷酸长度为6969nt。包括201aa的前导蛋白基因和2122aa的聚合蛋白基因；3＇UTR长127nt，包括34nt的polv（A）。     

相思子毒素-a单克隆抗体的制备与鉴定

用含1%甲醛的磷酸盐缓冲液对相思子毒素-a(abrin-a)减毒处理制备类毒素,以类毒素为免疫抗原分4次免疫3只BALB/c小鼠。采用聚乙二醇(PEG)法,取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,筛选分泌抗abrin-a的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株。将阳性细胞株接种BALB/c小鼠制备McAb腹水,根据亚类鉴定结果,分别采用蛋白A或蛋白G亲和层析柱纯化腹水,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测McAb特异性,Western-blot法分析McAb抗原识别位点。结果获得1G5、3C2和4G1共3株McAb杂交瘤细胞株,均为抗abrin-a的特异性McAb,与相思子凝集素、蓖麻毒素(ricin)和蓖麻凝集素均无交叉反应,其中4G1为特异性结合abrin-a A链的McAb,1G5和3C2两株为特异性结合abrin-a B链的McAb;制备的McAb可用于abrin-a含量的检测。     

奶牛真胃炎的发病情况调查及诊治

真胃炎是奶牛产后突发的一种严重的消化障碍性疾病,临床上病牛表现为不食、消瘦、机体脱水、腹痛、腹腔积水,粪便异常、味腐臭、内含有淡黄色胶冻状物质或潜血便.死亡牛真(皱)胃及十二指肠均发生不同程度的炎性病变及坏死灶,严重者可因真胃壁穿孔而死亡,病程长达1～2个月,多为预后不良.初步发现该病有别于奶牛真胃变位,国内外无人报道过,是一种新发的奶牛内科疾病.     

应用竞争PCR检测丙酸盐对体外培养牛肝细胞丙酮酸羧化酶mRNA水平的影响

根据牛肝细胞内PC(丙酮酸羧化酶)基因组与PCcDNA相比多含有一个内含子序列．在其中再插入一外源DNA序列．从而使最终构建的突变体片段的长度大于PCcDNA的长度，成功构建了PCcDNA的竞争DNA模板，然后应用竞争PCR方法研究了丙酸盐对体外培养新生牛单层肝细胞PCmRNA水平的影响。使单层肝细胞培养液中丙酸钠浓度分别为0、1．5、2．5、3．5、4．5、8．5、11．5mmol／L，处理24h，提取总RNA、逆转录，在同一体系中用相同引物扩增目的带和竞争模板带。结果表明．随着丙酸钠浓度的升高．PCmRNA水平呈上升趋势，提示肝细胞内PCmRNA的表达水平受培养液中丙酸钠浓度的影响。     

应用B.melitensis 16M单克隆抗体建立羊布病的胶体金免疫层析检测体系

[目的]用B.melitensis16M提纯的LPS和O链抗原作为检测抗原,研制出针对B.melitensis16M的单克隆抗体(McAb),将其标记胶体金,建立一种诊断布病的胶体金免疫层析方法。[方法]B.melitensis16M全菌免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备McAb,测定免疫球蛋白亚类及亲和力。用HiTrapProteinGHP亲和层析纯化抗体并用胶体金标记,建立胶体金免疫层析方法。选择最佳反应模式组装成试纸条,对其特异性、敏感性、稳定性、阳性病料试验。[结果]筛选出能稳定分泌抗B.melitensis16M的种特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株2D10、3C6、1E10,单抗亚类分别为IgG2a、IgG1,亲和常数(k)介于1×10-8￣2.6×10-10。根据配对实验,以3C6为最佳包被抗体,2D10为最佳金标抗体。抗体IgG标记浓度为30μg/ml时,检测效果最佳。同时,与B.melitensis16M多抗IgG作为包被抗体、2D10为金标抗体的检测体系对比,两种包被方法组装的试纸条最低检出量为5.0×103CFU/ml,且不与其它菌发生交叉反应,保持期≥100d。以荧光定量PCR为参照,试纸条检测80份阳性病料,检检出率为100%。[结论]建立的胶体金免疫层析方法检测B.melitensis16M快速、简便、可靠,有望开发成为布病快速诊断试剂盒。     

日光温室“越冬黄瓜—草菇”抗连作障碍栽培技术

采用“越冬黄瓜—草菇”轮作可有效抗连作障碍,同时合理利用农业废弃物,节本、优质、高效。     

长春地区猪源链球菌分离株的病原特性研究

2000～2001年从长春地区分离到20株猪源链球菌,结合培养特征、生化特性及血清学反应等对其进行鉴定,其形态、染色、培养特征及理化特性基本符合猪链球菌的特点,大多具有α或β溶血,生化试验结果不稳定。用国际通用的链球菌A～G乳胶分型诊断试剂盒检测20株分离菌,5株为C群链球菌,9株为D群链球菌,1株为G群链球菌,2株与D群和G群有交叉反应,3株不在检测范围。20株链球菌对小白鼠致病性有所差异。本实验可证实长春地区猪链球菌病的病原已不局限于原有的C群链球菌,因此研制针对本地区流行株的多价灭活疫苗已成为控制该病的当务之急。     

布鲁氏菌鉴定和检测方法研究进展

布鲁氏菌是重要的人畜共患病病原菌，其鉴定和检测方法受到国内外的普遍重视。本文对近年来布鲁菌DNA同源性及其内切酶图谱分析、血清学检测、PCR扩增、核酸探针杂交等鉴定、检测方法进行了综述，并展望了分子生物学技术在布鲁氏菌快速、准确鉴定、检测中的良好前景。     

春小麦单产500千克栽培技术

2005年我场种植春小麦5 067公顷,平均单产为478千克/667米~2,其中达到500千克/667米~2以上的3 533公顷,450千克/667米~2以上的1 467公顷,实现了大面积高产稳产,创历史最好水平。一、选地与整地1.选地合理轮作,避免重茬,同时选择土层深厚、肥力高、有灌溉条件、杂草少、有机质含量在1.5%左右的土壤为佳。碱解氮大于50毫克/千克,有效磷大于20