PRRSV HN25株ORF5基因的克隆和重组腺病毒的构建

克隆PRRSV HN25株ORF5基因,测序并进行序列分析。结果显示ORF5基因编码区长603bp,编码200个氨基酸,与国内外VR-2332株、LV株和CH-1a株ORF5基因的核酸序列同源性分别为99.0%,63.8%和91.4%,而推导的氨基酸序列同源性分别为98.0%,58.8%和90.5%。构建含ORF5基因的重组腺病毒穿梭质粒,PmeI酶切线性化后,转化含有腺病毒骨架载体pAdeasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞,同源重组后筛选重组腺病毒质粒,经PacI酶切后转染293A细胞进行包装,获得重组腺病毒。通过PCR鉴定重组腺病毒含有ORF5基因,Western blot检测的结果表明PRRSV ORF5基因在293A细胞内获得表达。     

猪IL-2与IL-6的融合表达及其产物的促淋巴细胞增殖活性

为了获得具有猪白细胞介素-2(pIL-2)和猪白细胞介素-6(pIL-6)双重活性的融合蛋白,研究其作为高效免疫佐剂的可行性,作者利用基因重组技术将克隆到的pIL-2和pIL-6基因的成熟肽片段利用一段柔性Linker序列串联,然后插入到原核表达载体pBV220的适当位置,获得重组质粒pBVpIL-6-2,转化E.coli DH5α、E.coli BL21(DE3)和E.coli Rosetta(DE3)后,42℃诱导表达得到相对分子质量约为36.7ku的重组蛋白pIL-6-2,对蛋白进行纯化、复性后用MTT法检测其对小鼠脾淋巴细胞的促增殖活性,结果显示不同浓度的pIL-6-2蛋白对小鼠脾淋巴细胞的促增殖活性差异很大,其中以0.1μg·mL-1浓度的pIL-6-2活性最好。本研究为利用该蛋白作为高效免疫制剂的应用奠定了良好的基础。     

猪圆环病毒2型Cap蛋白表达及其间接ELISA诊断试剂盒研制

根据已知猪圆环病毒2型(PCV2)序列设计引物,PCR扩增出579 bp去除信号肽的ORF2基因片段,将其克隆入表达载体pGEX-4T-1的BamHI和XhoI位点构建重组质粒,转化Rossetta(DM3)进行诱导表达,经检测表达蛋白以包涵体形式存在。用GST蛋白纯化试剂盒纯化目的蛋白,SDS-PAGE检测只存在一条约45.3 ku的目的条带,纯度达到90%以上。Western blot分析表明纯化的目的蛋白具有良好的免疫反应性。以纯化的蛋白为抗原,建立了间接ELISA诊断方法及组装了试剂盒,确定了最适的抗原包被浓度为0.625μg/mL,抗体稀释浓度为1∶100,确定临界值为0.371。该试剂盒与猪圆环病毒1型(PCV1)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)血清无交叉反应性;与北京世纪元亨公司ELISA试剂盒相比其特异性、敏感性、符合率分别为90%、93.3%、91%;对同份血清样品批内、批间重复性试验变异系数均小于10%;稳定性试验变异系数小于5%,在4℃条件下保存期可达12个月;对240份临床血清检出率为80%。结果表明,研制的ELISA诊断试剂盒具有良好的特异性、敏感性,重复性、稳定性,完全达到国内外同类产品质量要求,可大规模应用于临床检测。     

鸡毒支原体的分离鉴定和最低抑菌浓度测定

从山东、河北、北京和天津等不同地区分离、鉴定了4株鸡毒支原体，通过体外最低抑菌浓度测定发现泰妙菌素、泰乐菌素、百里霉索、罗红霉素、林可霉素／壮观霉素合剂、氧氟杀星、乳酸红霉素和盐酸林可霉素对该4个菌株的最低抑菌浓度(MIC)平均值分别是0．0062μg/ml、0．0171μg/ml、0．0682μg/ml、8．5248μg/ml、8．5248μg/ml、0．1024μg/ml、0．4550μg/ml和15．4944μg/ml，同时发现不同菌株之间的最低抑菌浓度有明显的差异。该试验结果表明鸡毒支原体容易对抗菌药物产生抗药性，目前临床预防或治疗鸡毒支原体感染可选用泰妙菌素、泰乐菌素、百里霉素和氧氟杀星等药物，而常规使用的红霉素和罗红霉素效果不佳。     

一起急性猪肺疫的诊治

2002年9月山东省某猪场一批肥育猪发病 ,表现为体温升高、呼吸困难、便秘、眼结膜发红等症状。发病2天后 ,死亡2只。肌注青霉素、地塞米松后症状减轻 ,但停药后即复发。遂送我所化验检查。经病理剖检、细菌分离与鉴定 ,诊断为急性猪肺疫。通过药敏试验选择敏感药物进行积极治疗 ,同时应用本场分离菌株制做自家蜂胶灭活疫苗进行紧急预防注射等综合性措施 ,使病情很快得到了有效控制。1发病情况发病猪群为100日龄左右的育肥猪 ,大群精神倦怠 ,采食量下降 ,饮水量增多 ;病猪表现为体温升高 ,呼吸困难 ,鼻流粘液 ,眼结膜发红 ,初期便秘 ,后表现…     

禽霍乱蜂胶灭活疫苗对鸡血清某些生化性状的影响

选用健康京白９０４鸡２０只，随机分为３组：第一组为接种禽霍乱蜂胶灭活疫苗组（８只），第二组为接种蜂胶佐剂组（８只），第三组（４只）为对照组。结果表明，接种禽霍乱蜂胶灭活疫苗４天后血清总蛋白、γ－球蛋白显著升高（Ｐ＜０．０５）；淀粉酶活力下降，谷丙转氨酶活力变化不大。     

压力蒸汽灭菌化学指示卡应用效果观察

试验表明，所试压力蒸汽灭菌化学指示卡在１２１－１２６℃作用２０－３０分钟可完全达到变色要求。用该指示卡监测物品灭菌情况具有使用方便，经济，结果直观，快捷的优点。     

禽霍乱蜂胶灭活疫苗研究与应用总结

研制的禽霍乱蜂胶灭活疫苗，５天产生坚强免疫力，保护率高达９０～９６．５％，免疫期长达６个月以上．经全国２９个省、市、自治区的２亿羽份鸡、鸭、鹅等各种家禽现地应用表明，该苗具有安全可靠、易于注射、减少应激、不影响产蛋、无毒副作用等特点．获国家级新兽药证书和国家级新产品证书．