鸡毒支原体TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

为快速检测鸡毒支原体,根据鸡毒支原体的保守基因设计特异性引物和TaqMan探针,建立鸡毒支原体TaqMan实时荧光定量PCR方法并分析鸡毒支原体培养过程中颜色单位改变法(color change unit, CCU)和荧光定量PCR检测的相关性。结果显示,标准曲线y=-3.646x+44.208,相关系数R²=0.998,最低检测限度为1 copy/μL;与其他菌株等均无交叉反应;组内和组间变异系数均小于3%,表明该方法具有良好的稳定性和可重复性。用建立的实时荧光定量PCR检测方法对26份临床样品进行检测,该方法较普通PCR方法检出率更高。建立的荧光定量PCR与CCU显示鸡毒支原体在对数生长期时,两者具有一定的对应关系。表明建立了鸡毒支原体TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法,可实现对鸡毒支原体的快速检测,为鸡毒支原体感染的防控提供技术基础。     

鸡传染性贫血病毒CRISPR/Cas13a检测方法的建立及初步应用

为了快速、准确和简便地检测鸡传染性贫血病毒(chicken infectious anemia virus, CIAV),本研究参照GenBank中CIAV的VP2基因设计了特异的RPA引物和用于LwCas13a反应系统的crRNA,通过优化反应条件建立了检测CIAV的CRISPR/Cas13a方法，并验证了该方法的特异性、敏感性和复合性。结果显示，该法对感染鸡的其他常见病毒的检测均为阴性，特异性良好无交叉反应；灵敏度为50 copies/μL;与PCR的检测结果有很好的符合率。本研究建立的CRISPR/Cas13a检测方法配合试纸条显色在1.5 h内可对CIAV进行快速的鉴别诊断，为该病的诊断及防控净化提供了强有力的技术支撑。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪肺炎支原体双重荧光PCR检测方法的建立

为了建立快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪肺炎支原体(Mhp)的双重荧光PCR检测方法，本试验根据NCBI数据库中的PRRSV ORF7和Mhp P36基因，分别设计引物和TaqMan探针，通过优化扩增反应条件，建立PRRSV和Mhp的双重荧光PCR检测方法；分析所建立PCR方法的特异性、敏感性和重复性，并初步应用于临床样品检测。结果显示，25μL PCR反应体系中各引物最佳添加量：PRRSV-F 1.5μL、PRRSV-R 1.0μL、PRRSV-P 0.8μL、Mhp-F 1.2μL、Mhp-R 1.3μL、Mhp-P 0.7μL。优化后的PCR反应程序：50℃反转录20 min, 95℃预变性2 min, 95℃变性5 s, 55℃退火10 s, 72℃延伸20 s (此处收集荧光),40个循环。建立的双重荧光PCR方法特异性较好，与其他猪常见病原体无交叉反应；检测PRRSV和Mhp的敏感性分别为4.2拷贝/μL和9.6拷贝/μL;批内和批间变异系数均不高于2%,具有很好的重复性。因此，本试验建立的双重荧光PCR方法可同时检测PRRSV和Mhp,为猪繁殖与呼吸综合征...     

压力蒸汽灭菌效果与监测方法

使用三种指示剂对压力蒸汽灭菌效果进行观察，结果发现，１２１℃作用２０ｍｉｎ，用嗜热脂肪杆菌芽孢菌片监测合格率为７１％，化学指示卡为５４％，指示管为１００％；１２１℃作用３０ｍｉｎ，菌片法为９５％，化学指示卡为９０％，指示管为１００％；１２６℃，合格率为１００％。物品透气性差，灭菌效果亦差。关键词压力蒸汽灭菌；化学指示剂；生物指示剂；灭菌监测方法。     

东弗里升细管冻精与洼地绵羊杂交改良研究

东弗里升绵羊是优秀的乳肉兼用品种，探究东弗里升绵羊和地方特色品种洼地绵羊杂交改良，有利于挖掘种质资源，培育新品种。本研究利用程序化冷冻方法制备东弗里升细管冻精，分析精子冷冻前后的活力和运动能力。同时对28只洼地绵羊进行同期发情内窥镜输精处理，记录受胎率及后代生长发育数据。结果表明：冷冻降低精子的运动能力，精液冷冻后曲线速度（VCL）、精子头侧摆幅度（ALH）和快速运动精子比例与鲜精相比降低（P<0.05）;28只洼地绵羊内窥镜输精妊娠率为71.43%(20/28)，产羔率为128.57%(36/28)，窝产2～3羔比例为72.22%(13/18)；随窝产羔数增加，羔羊平均出生重降低；东洼杂交F1代同时期体重均高于洼地绵羊，其中18月龄东洼杂交F1代母羊体重高于洼地绵羊母羊（P<0.05）；东洼F1代育肥期平均日增重（305 VS 264 g）、耗料增重比（4.1 VS 3.5）均高于洼地绵羊（P>0.05）。因此，通过细管冻精腹腔内窥镜技术进行东弗里升与洼地绵羊杂交能够提高洼地绵羊的生产性能。