文蛤不同群体的同工酶分析

采用聚丙烯酰胺垂直电泳技术（PAGE）对来自山东野生、江苏野生、浙江养殖、广西野生白色壳4个文蛤Meretrix meretrix群体两种组织（消化腺、闭壳肌）的EST、MDH、ME、ADH、SOD、CAT等6种同工酶进行了分析。结果显示：文蛤不同组织之间、不同群体之间、养殖群体和野生群体之间的同工酶酶谱均有较明显的差别;广西白壳群体的多种同工酶酶谱与其它几个群体相比有较大差异,说明该种群与另外3个群体种质差异较大,亲缘关系较远。对山东野生、广西普通壳色和广西白色壳色3个群体的4种同工酶（EST、AMY、MDH、SOD）进行了研究,结果表明：广西普通壳色群体和山东群体的酶谱相似,而与广西白色壳群体差异明显,初步推测广西白色壳群体为文蛤属的其他种类;在文蛤各群体中均找到了特征性酶带,可以作为区别于文蛤不同群体的蛋白标记,用于文蛤种质资源的分析鉴定,并可为选育优良品种文蛤提供遗传依据。     

文蛤二倍体和三倍体染色体核型分析

以担轮幼虫为材料,采用热滴片法制作染色体标本,对二倍体和三倍体的文蛤(Meretrix meretrix Linnaeus)染色体数目及核型进行探讨,结果显示,文蛤二倍体的核型为2N=38,24M 14SM,NF=76;三倍体的核型为3N=57,36M 21SM,NF=114。二者染色体类型基本相同,均未发现有异型和具随体的染色体。另外本研究还分析了文蛤与帘蛤目(Veneroida)及帘蛤科(Veneridae)的其他种类之间的核型异同,为探讨它们之间的亲源关系提供科学依据。     

贝类育苗技术之一美国硬壳蛤人工育苗技术总结

美国硬壳蛤(Mercenaria mercenaria)又称小圆蛤、北方帘蛤或美洲帘蛤。该贝属广温、广盐性种类,对环境耐性强,适应于不同底质养殖,生长速度较我国产的文蛤快,2周年即可达到壳长50mm以上的商品规格。为增加南通市海洋贝类养殖品种,挖掘广阔的浅海与滩涂潜力,同时也为发展规模化硬壳蛤增养殖提供种苗资源,笔者与浙江省海洋水产研究所合作,引进美国硬壳蛤亲贝,在江苏省如东县大豫镇某育苗基地,进行人工育苗试验。现将有关具体技术工作情况总结如下:     

农田高效砷氧化侧胞短芽胞杆菌的分离、鉴定及其对水稻砷毒害的修复作用

采用梯度富集、硝酸银试验、砷形态转化测定、16SrDNA、T-BYLP等方法,从中分离、鉴定出具有高效氧化三价砷[A暑（Ⅲ）]功能的砷氧化细菌,优化了砷氧化细菌的最佳培养条件,并以“汕优63”水稻为研究材料,水培种植,探讨抽（Ⅲ）胁迫下该菌株对苗期水稻生长的修复作用及机制．结果表明,福州农田水稻土中分离出的高效砷氧化菌为侧胞短芽胞杆菌,最佳培养条件为：4-羟基苯甲酸作碳源、蛋白胨作氮源、pH8．0、培养温度25℃．最佳培养条件下,该菌株在10h内能将200mg·L^-1的A8（Ⅲ）氧化为五价砷[As（V）]．As（Ⅲ）胁迫下,水培液0．25％（体积分数）接种该菌株并调控7d后,苗期水稻根长恢复率为09．06±0．05）％,株高恢复率为07．72±0．05）％,明显高于未接种该菌株的根长恢复率（71．73±0．06）％和株高恢复率（88．06±0．03）％,对苗期水稻A8（Ⅲ）毒害具有显著修复效果．砷形态分析结果表明,0．25％接种侧胞短芽胞杆菌后,苗期水稻水培液的As（Ⅲ）完全转化为As（V）,但是,未接种侧胞短芽胞杆菌水培液的A县（Ⅲ）只有74％转化为舢（V）．     

菲律宾蛤仔规模化育苗技术

我们于2004-2005年进行了菲律宾蛤仔规模化育苗试验和生产，解决了菲律宾蛤仔规模化人工育苗的关键技术，为菲律宾蛤仔的全人工养殖推广和开发提供了技术支持和保障。主要技术研究情况如下：     

文蛤病原菌——需钠弧菌的鉴定和生物学特性分析

从患病文蛤Meretrix meretrix体内分离出一优势菌株WT01,回归感染试验证明是文蛤的致病菌。对该菌形态、生理生化特征、盐度、温度和PH值生长条件以及16S rRNA基因序列进行了研究。结果表明,该菌为革兰氏阴性菌,发酵葡萄糖产酸不产气,氧化酶阳性,生长需NaCl,无色素,不发光,在TCBS平板上形成圆形黄色菌落,对弧菌抑制剂O／129敏感,具有弧菌属的典型特征。16S rRNA基因序列分析表明,该菌与需钠弧菌Vibrio natriegen的亲缘关系最为接近,其同源性达999／6以上。因此,将该菌鉴定为需钠弧菌。实验显示其半数致死量为5．5×10^6CFU／g。19种抗菌药物药敏试验结果表明,该菌对氟哌酸、复方新诺明、菌必治、先锋必、链霉素、氯霉素和庆大霉素等抗生素较为敏感。并对其胞外产物的生物学特性进行了分析。     

文蛤不同地理群体自繁和互交F1代的早期生长性状

为了培育文蛤新品种,开展了不同地理群体文蛤(山东野生群体和江苏野生群体)的自繁和互交实验,获得了2个自繁群体和2个互交群体,运用方差分析对4个群体子一代的浮游幼虫和稚贝(1～12月龄)的主要性状进行了比较。结果表明,各实验组的受精率、受精卵的孵化率、胚胎发育和浮游幼虫生长无明显差异;2个月龄内稚贝各实验组生长发育差异不明显;3-12月龄稚贝生长性状主要表现为S♀×J♂>S♀×S♂>J♀×S♂>J♀×J♂,其中前3个组合之间差异不显著,但均与第四组合差异显著;互交组的杂种优势率范围在6%～168%。杂种优势在不同性状表现不同,活体重的杂种优势高于壳长、壳高和壳厚;同时各性状指标受季节性温度变化影响较大,5-10月份是高速生长期,而12月份以后处于低生长状态。获得的4个群体将作为进一步选育的基础群体,子一代的变异性增加为进一步选育奠定了基础。     

泥蚶和南美白对虾综合养殖池塘氮磷收支研究

为了研究池塘虾贝混养模式中不同养殖密度氮磷收支变化，设置2个养殖密度(低密度组TL,高密度组TH),通过定期采样计算综合养殖池塘的氮磷输入和输出。结果表明，饲料是氮元素的最大来源，在TL中占氮总输入量的55.31%,低于TH的61.71%;补充水是氮元素的第二大来源，在TL中占氮总输入量的23.87%,高于TH的17.68%;系统中磷元素的输入主要来源于饲料，在TL中占磷总输入量的75.93%,低于TH的80.26%;肥料是系统中磷元素的第二大来源，在TL中占磷总输入量的13.30%,高于TH的9.33%。系统氮的输出中，养殖生物移出、底泥沉积、排水是氮输出的主要方式，TL养殖生物移出占氮总输出量的30.43%,低于TH的35.9%;TL底泥沉积占氮总输出量的30.95%,高于TH的27.35%;TL排水占氮总输出量的25.35%,高于TH的21.17%。系统磷的输出中，底泥沉积是主要的输出方式，TL底泥沉积占磷总输出量的51.16%,低于TH的52.29%;其次是养殖生物移出，TL养殖生物移出占磷总输出量的22.68%,低于TH的26.06%。在氮、磷利用率方面，TL低于TH。     

浙江缢蛏群体糖原含量变化与gys基因多态性的关联分析

为了探讨缢蛏糖原含量与糖原合酶基因(sc-gys)的特性及其用于分子标记辅助育种的可行性,实验检测了浙江缢蛏群体糖原含量的周年变化,克隆获得糖原合酶基因的cDNA全长序列,分析其在不同组织、不同月份的表达差异,并进一步筛选出与糖原含量相关的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)位点。结果显示,养殖缢蛏在2—6月糖原含量较高,4月达到最大值。sc-gys基因的cDNA全长为2 402 bp,开放阅读框为2 136 bp,编码711个氨基酸。荧光定量PCR结果显示,sc-gys基因主要在外套膜和足中表达,其不同月份的表达水平与糖原含量周年变化规律一致,4月表达量显著高于其他月份,表明该基因与糖原合成关系密切。在"甬乐1号"品种和台州野生群体sc-gys基因的外显子区共筛选到2个与糖原含量相关的SNP位点,且两位点之间没有连锁不平衡,优势基因型组合个体的糖原含量比群体均值提高11.8%,这些位点和优势基因型组合可为缢蛏糖原含量的遗传改良提供候选标记。