中国大、中型驴种遗传多样性的微卫星分析

[目的]为分析我国大、中型驴品种遗传多样性。[方法]利用24个微卫星标记,对我国8个大、中型驴品种遗传多样性进行了检测。[结果]24个微卫星位点在8个驴品种中的多态信息含量除NVHEQ18为中度多态外,其余23个微卫星均为高度多态,8个驴种的平均PIC（0.6940）、H（0.7119）和E（3.94）,表明基因多态性和遗传多样性相对较高。[结论]这24个微卫星可作为有效的遗传标记用于各驴品种的遗传多样性和系统发生关系的分析。我国大、中型驴品种的分子系统发生关系与其育成史和地理分布基本一致。     

驴生长激素基因cDNA的克隆及生物信息学分析

[目的]研究驴GH基因的特性与功能。[方法]以驴肝组织为材料,设计一对特异性引物,采用RT-PCR技术克隆驴GH基因cDNA序列。[结果]测序得到706bp的驴GH基因cDNA序列,此序列包含完整的GH基因的阅读框,编码216个氨基酸,驴GH基因编码的蛋白有7个的疏水区域,存在7个跨膜区和信号肽,二级结构主要以α-螺旋和不规则卷曲为主,三级结构包含第27～215位氨基酸残基。[结论]驴GH基因在进化上非常保守,基于CDS序列构建的系统进化树与比较形态学和比较生理学结果一致。     

北京油鸡和来航鸡脾脏差异表达microRNA的鉴定与分析

【目的】明确北京油鸡和来航鸡脾脏重量、组织结构及其miRNA表达谱的差异,筛选与两个鸡种免疫应答能力差异相关的候选基因,为家禽抗病育种研究奠定基础。【方法】选取1日龄同期孵化的北京油鸡和来航鸡母雏各45只作为试验材料,在相同营养水平和环境条件下饲养,42日龄测量体重和脾脏重。每个品种随机选取3只个体（体重接近群体均值）,取其一半脾脏组织制作石蜡切片,利用H.E.染色,显微镜下观察脾脏组织结构、脾小体的数量和动脉周围淋巴鞘厚度。提取另一半脾脏组织中的小RNA,等量混合组成2个RNA池,构建cDNA文库,利用Solexa平台进行高通量测序。测序结果与参考基因组数据库比对获得表达基因。利用Mireap软件预测新miRNAs基因。利用RPKM（reads per kb per million reads）方法计算基因的表达量,根据FDR（false discovery rate）＜0.001和|log₂ ratio(T/CK)|≥1的标准筛选差异表达的基因。利用TargetScan和Pictar软件预测差异表达miRNA的靶基因,并对其进行GO和KEGG数据库功能注释。利用DAVID软件对靶基因蛋白进行富集分析。将预测靶基因与已知脾脏重和脾脏指数相关QTL区域注解的基因取交集。【结果】在42日龄,北京油鸡的体重和脾脏重均显著高于来航鸡（P＜0.01）。组织学观察显示,两个鸡种的脾脏组织结构发育完整,可见清晰的白髓、红髓、脾小结和动脉周围淋巴细胞鞘。与来航鸡相比,北京油鸡脾小体的数量更多、动脉周围淋巴鞘更厚,鞘内淋巴细胞也更为密集。高通量测序在两组样本共鉴定出486种已知miRNA 、130个候选miRNA 和216个共表达miRNA 。两组间显著差异表达的miRNA共计35种,其中在北京油鸡中有8个表达上调,27个表达下调,它们的变化倍数在1.002-10.41之间。差异基因表达丰度在前5位的miRNA是miR-2954、miR-6606-5p、miR-146b-5p、miR-21-3p和miR-21-5p,对其2 767个靶基因的生物信息学分析结果显示,它们参与了T和B淋巴细胞的分化、免疫器官的发育、蛋白质磷酸化和细胞形态发生等生物学过程,并在泛素介导的蛋白水解、凋亡和磷脂酰肌醇信号系统等14个通路中显著富集。miR-6606-5p、miR-146b-5p的共同靶基因BLM和miR-2954的靶基因IRF8均定位于脾重或脾指数相关的QTL区域。【结论】（1）42日龄北京油鸡和来航鸡脾重、组织结构及其miRNA表达谱的确存在一些差异。（2）某些重要的差异高丰度表达miRNA(如miR-2954、miR-6606-5p、miR-146b-5p 、miR-21-3p和miR-21-5p ) 可能通过对靶基因调控,来参与调节T、B淋巴细胞分化、增殖、激活等过程,进而影响脾脏的重量、组织结构及其免疫应答能力。     

坝上长尾鸡育成期生长发育规律研究

为研究坝上长尾鸡育成期生长发育规律,选取660只坝上长尾鸡(公鸡331只,母鸡329只)进行试验。结果表明,坝上长尾鸡育成期体重逐渐增加,其中8~20周龄白羽、黑羽、麻羽、白花公鸡与母鸡体重差异极显著(P0.01),10~20周龄银灰公鸡与母鸡体重差异极显著(P0.01),8周龄银灰公鸡与母鸡体重差异显著(P0.05),芦花公鸡与母鸡育成期体重差异不显著(P0.05);8~20周龄不同羽色公鸡体重差异不显著(P0.05),8~20周龄芦花母鸡体重显著大于白羽、黑羽、麻羽、白花、银灰母鸡(P0.05),10~20周龄银灰母鸡体重显著小于白羽、黑羽、麻羽母鸡(P0.05),18~20周龄银灰母鸡体重显著小于白花母鸡(P0.05)。随着周龄的增加体重绝对生长值、相对生长率减小;育成期体斜长、龙骨长、胫围、胸宽、胸深、胫长、骨盆宽呈增加趋势,公鸡的累积生长值极显著大于母鸡,其中体斜长、龙骨长、胸宽、骨盆宽的绝对生长值先增加后降低,体斜长和胸宽的绝对生长值在16周龄达到最大,龙骨长和骨盆宽在14周龄达到最大;胸深和胫长绝对生长值呈下降趋势;胫围在育成后期绝对生长值增加;所测得的公鸡20周龄主尾羽长度多数达21 cm以上,最长达43 cm,母鸡尾羽上翘,主尾羽长约10~21 cm,分两侧呈八字形。     

不同光照时间对蛋鸡生产性能的影响

按光照时间不同分为四组：试验Ⅰ组（１４ｈ）、试验Ⅱ组（１５ｈ）、试验Ⅲ组（１７ｈ）、对照组（１６ｈ）。每组８０只,各组饲养管理相同,试验期为５周。试验结果：产蛋率和总产蛋重Ⅲ组最高,与Ⅰ组、Ⅱ组、对照组比较差异显著（ｐ＜００５）。Ⅲ组产蛋率为８１００％,比Ⅰ组、Ⅱ组和对照组分别高３６５％、４４３％、３２６％。Ⅰ组、Ⅱ组和对照组各组之间差异不显著（ｐ＞００５）。料蛋比Ⅲ组最低２３７∶１,与Ⅰ、Ⅱ组和对照组比较差异显著（ｐ＜００５）。蛋重四个组之间差异不显著（ｐ＞００５）。经济效益Ⅲ组最好,盈利分别比Ⅰ、Ⅱ组和对照组高：１１０８％、１２３９％、１４７５％。光照１７ｈ的Ⅲ组,产蛋率、产蛋重、料蛋比显著优于Ⅰ组、Ⅱ组和对照组。因此,产蛋鸡在产蛋中期、后期采用１７ｈ光照可以提高生产性能,降低饲养成本,提高经济效益。     

牙鲆致病性迟钝爱德华菌毒力基因的检测及序列分析

为探讨牙鲆致病性迟钝爱德华菌毒力基因携带与分布,以毒力基因为分子靶标研究其致病机理及建立快速检测方法,根据 GenBank 上的基因序列,设计2对引物扩增致病性迟钝爱德华菌毒力基因 fimA和小肠结肠炎耶尔森菌毒力基因 irp2,结果在7个供试牙鲆病例的130株致病性迟钝爱德华菌中,irp2毒力基因的阳性率为46．15％（60／130）,fimA 毒力基因的阳性率为100％,且均与已发表的参考菌株相应序列高度同源,同源性分别为97．32％和97．59％。可见耶尔森菌强毒力岛（HPI）在牙鲆致病性迟钝爱德华菌中广泛分布,但不同病例分离菌株间存在差异;fimA 毒力基因存在于所有的被检致病性迟钝爱德华菌中,可以作为快速检测致病性迟钝爱德华菌的标志物。     

中国境内不同地理型东方蜜蜂线粒体DNA tRNAleu～COⅡ基因多态性研究

 【目的】从线粒体水平上探讨中国境内不同地理型东方蜜蜂的系统发育关系，为东方蜜蜂亚种分化的研究及我国境内东方蜜蜂资源的保护与合理开发利用提供基础资料。【方法】采用公开的E2、H2引物对11个不同地理型东方蜜蜂线粒体DNA tRNAleu～COⅡ基因进行了PCR扩增、测序，并利用相关软件和网站进行了序列比较分析。【结果】该序列长度为471bp；序列中共有9个位点发生变异；序列相似性均在99%以上；限制性酶切分析表明：云南保山东方蜜蜂缺少一个SwaⅠ酶切位点；部分编码蛋白序列比对表明，海南海口和吉林安图东方蜜蜂各有一个氨基酸发生变异。与GeneBank上公开登录的国内外有关东方蜜蜂相关序列的比较表明，单纯利用非编码区序列对比，不能把日本蜜蜂同中国大陆的东方蜜蜂区别开来；COⅡ基因部分序列对比显示，东方蜜蜂的线粒体类型包括：日本-韩国型、中国大陆型、中国台湾型、马来西亚沙巴州-印度黑色蜜蜂型、中国海南型、印度黄色蜜蜂型、泰国南部型和印度黑色蜜蜂型。【结论】中国境内不同地理型东方蜜蜂存在着较明显的遗传分化，其中海南东方蜜蜂由于长期的海岛隔离形成了一个独特的类群，支持了通过形态学认定的海南东方蜜蜂为东方蜜蜂的一个新亚种的观点。本研究部分测序结果已在美国国家生物信息中心（NCBI）网站GeneBank上登录，登录号为：DQ385854，DQ388602～DQ388609。     

阳原驴MSTN基因生物信息学分析及组织表达研究

【目的】试验旨在分析阳原驴肌生长抑制素(myostatin,MSTN)基因CDS序列特征及其在不同生长发育时期和不同组织中的表达水平。【方法】采集6、12、18、24月龄阳原驴的血样及不同组织样,提取其基因组DNA及不同组织样总RNA。利用PCR技术扩增阳原驴MSTN基因CDS序列,并对其进行生物信息学分析。利用实时荧光定量PCR技术检测MSTN基因在阳原驴不同生长发育时期背最长肌、腿肌和18月龄不同组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏)中的表达水平。【结果】阳原驴MSTN基因CDS序列长1 128 bp,编码375个氨基酸,与马的核苷酸序列相似性最高(99.9%),编码蛋白属于不稳定的亲水性蛋白,含有转化生长因子-β(TGF-β)超家族结构域,不含跨膜区,存在1个信号肽区域,包含6个O-糖基化位点、1个N-糖基化位点和34个磷酸化位点,主要分布于细胞核中(39.1%),二级结构中无规则卷曲占比最高(50.93%)。MSTN基因在18月龄阳原驴背最长肌和腿肌中的表达水平显著高于6、12、24月龄(P＜0.05);MSTN基因在18月龄阳原驴不同组织中均有表达,其中背最长肌中的表达水平显著高于其他组织(P＜0.05),其次是腿肌、肺脏、脾脏、肾脏和肝脏,心脏中的表达水平最低。【结论】试验成功扩增出阳原驴MSTN基因CDS序列,MSTN基因在阳原驴不同生长发育时期背最长肌和腿肌中的表达水平均以18月龄最高,且在18月龄不同组织中以背最长肌和腿肌中表达水平较高。研究结果为进一步探讨MSTN基因在阳原驴骨骼肌生长发育中的作用机制提供参考。