马β2-微球蛋白基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的高效表达与纯化

为了构建马MHCI四聚体分子，从马外周血单核细胞（PBMC）中提取总RNA，采用RT-PCR技术对去除信号肽部分的β2m基因进行了扩增，将其RT-PCR产物经纯化、BarnHⅠ＋XhoⅠ酶切后与经同样处理的原核表达载体pET-28a（＋）进行连接，转化入感受态细胞BL21（DE3）。将筛选出的阳性克隆进行测序、诱导表达并将其表达产物进行纯化。结果表明，去除信号肽部分的马β2m基因全长300bp，含有1个开放阅读框，编码一由99个氨基酸组成的成熟蛋白；表达产物以包涵体的形式存在，经SDS-PAGE和Western-blotting分析，重组蛋白的分子质量约为15ku，且具有免疫生物学活性。     

乳酸菌发酵骨泥的研究

通过用乳酸菌对不同浓度的骨泥进行发酵发现，发酵骨泥液中游离钙的含量明显提高。１０％的骨泥经乳酸菌发酵其游离钙的含一比未经发酵的鲜骨泥提高８倍，２０％的骨泥经发酵的比鲜骨泥提高５倍。另外，骨泥发酵液在室温条件下保存，１个月内其乳酸菌的数量一直保持在１０＾６以上。     

豚鼠动物模型评价牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗效力的研究

以豚鼠为试验动物模型,探索一种应用豚鼠替代牛进行牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗效力检验的方法.豚鼠和牛同步对6批牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗进行PD50效力检验,其中2批进行重复性试验.豚鼠分别在免疫后7、14、21和28天采血检测Asia-1型的中和抗体水平.统计学分析显示,测定的豚鼠PD50和牛PD50之间具有极...     

马γ-干扰素成熟蛋白基因在大肠埃希氏菌中表达及其多克隆抗体制备

采用RT-PCR从ConA刺激的马外周血单核细胞(PBMC)中扩增获得含信号肽的马γ-干扰素(Equine interferon-γ,EIFN-γ)基因,将其克隆至载体pCR2.1-TOPO中。通过PCR方法从重组质粒(pCR-EIFN-γ)中扩增马干扰素成熟蛋白(Mature EIFN-γ,reEIFN-γ)基因,并将其亚克隆至原核表达载体pET-28a( )。重组子经测序鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,将纯化后的表达产物免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。结果表明,mEIFN-γ基因全长为441bD,含一个开放阅读框,编码146个氨基酸的成熟蛋白;对其表达产物以可溶性和包涵体两种形式存在,重组蛋白相对分子量约为18Ku,且具有免疫反应活性。mEIFN-γ基因在大肠杆菌中高效表达并在非变性和变性条件下,采用Ni~ 亲和层析纯化方法均可获得高纯度的重组马γ-干扰素制备的多克隆抗体,为建立马γ-干扰素检测方法、监测机体免疫状态和研究机体免疫机制奠定了基础。     

赤羽病病毒核衣壳蛋白基因的表达纯化及活性鉴定

为获得赤羽病病毒（Akabane virus, AKAV）核衣壳蛋白重组抗原,经RT-PCR扩增了OBE-1株的S节段,将其插入到pMD 18-T载体,然后用带有酶切位点的引物从该重组载体亚克隆出表达核衣壳蛋白的N基因,用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后与同样处理的表达载体pET-28a（＋）进行连接,转化感受态细胞BL21（DE3）.将筛选出的阳性克隆进行测序、IPTG诱导表达和融合蛋白纯化及活性鉴定.结果表明,N基因含有1个全长702 bp的ORF,编码233个氨基酸,通过SDS-PAGE和Western-blotting分析,证实重组菌株可高效表达有免疫活性的分子质量约27 ku的可溶性融合蛋白,用薄层扫描仪分析,其最高表达量占可溶性菌体蛋白总量的58.5%.工程菌经超声波裂解高速离心后,上清液在ProBondTM Purification System（含Ni2＋）天然状态下纯化,可获得高纯度的融合蛋白.     

赤羽病毒G1基因的真核表达及抗原性检测

通过RT-PCR获得赤羽病毒（AKAV）OBE-1株的Gl基因,克隆至pMD18-T载体。经测序鉴定正确后,将该片段作为目的基因亚克隆至Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中的pFastBacHTA转移载体质粒中,利用Tn7转座子与穿梭我体Bacmid DNA同源重组,获得了重组杆状病毒DNA,用CELLFECTIN介导其转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒BAC-G1P1。SDS-PAGE结果表明,感染BAC-GIP1后的Sf9昆虫细胞表达可溶形式的120ku目的蛋白,其大小与预期相符。Western blot和间接免疫荧光试验显示表达产物具有良好的免疫学活性。     

广东香芋主产区斜纹夜蛾发生危害及综合防治

概述了广东省各香芋主产区斜纹夜蛾的发生情况、生活习性及危害特点,并从农业防治、物理防治、生物防治、化学防治等方面介绍了斜纹夜蛾的综合防治技术和措施,以期为香芋生产中斜纹夜蛾的防治提供参考.     

1×109PIB/g斜纹夜蛾核多角体病毒·10%溴虫腈悬浮剂防治甘蓝斜纹夜蛾田间药效试验

1×109 PIB/g斜纹夜蛾核多角体病毒·10%溴虫腈悬浮剂防治甘蓝上斜纹夜蛾的田间药效试验结果表明,每667m2田块喷施25 mL后3 d,斜纹夜蛾的校正死亡率达到85%以上.显著优于对照药剂10%溴虫腈悬浮剂50 mL和1×109PIB/g斜纹夜蛾核多角体病毒可湿性粉剂60 g的处理效果,说明1×109 PIB/g斜纹夜蛾核多角体病毒·10%溴虫腈悬浮剂在防治斜纹夜蛾上具有良好的防治效果和应用前景.     

郑州市动物园草食动物和灵长类动物寄生虫感染情况及驱虫试验

为了解郑州市动物园草食动物和灵长类动物的寄生虫感染情况和采取有效的寄生虫防治措施,采用饱和糖水或饱和盐水漂浮法,分别于2003年、2006年两次对郑州市动物园草食动物和灵长类动物进行了寄生虫感染情况调查,结果：2003年,郑州市动物园15种草食动物寄生虫阳性率高达52.5%（21/40）,但感染强度较小,主要寄生虫为线虫、球虫;金丝猴鞭虫感染严重。2006年,调查21种草食动物和14种灵长类动物,寄生虫总阳性率为32.58%,其中球虫、毛首线虫、绦虫、蛔虫的感染率分别为15.66%、13.25%、4.82%、1.2%;用甲苯咪唑、害获灭、地克珠利等药物对分别对阳性动物进行驱虫试验。结果表明,除金丝猴毛尾线虫外,其余寄生虫病驱虫效果显著。