浅谈石羊河流域生态环境治理

通过对石羊河流域生态系统现状及存在的问题分析,认为水资源的过度开发、供需矛盾突出是生态与环境恶化的主要原因,为此,针对石羊河流域现状,就植树种草方面提出了生态系统恢复的几项措施及应注意的几个问题,以促进人与自然和谐相处,经济社会可持续发展.     

华东地区H9N2亚型禽流感病毒HA基因的遗传演化分析

为了解华东地区H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的遗传特点和流行规律,利用RT-PCR方法扩增华东地区2008~2013年分离的17株H9N2亚型AIV血凝素(HA)基因片段,进行序列测定和遗传进化分析,并对HA蛋白质的裂解位点、受体结合位点和潜在的糖基化位点进行分析。结果显示,17株H9N2亚型AIV HA基因核苷酸和推导的氨基酸同源性分别为84.6%~99.3%和86.0%~99.5%,均属于欧亚分支。其中15株鸡源病毒属于Y280-like亚系,2株鸭源病毒属于G1-like亚系。HA裂解位点都是非连续碱性氨基酸,属于低致病力毒株。HA受体结合位点149、150、191、198和234位氨基酸存在变异,尤其是234位氨基酸有14株毒株变为L,表现出人流感病毒受体结合特性。有2株毒株在145位氨基酸出现新的糖基化位点,5个毒株在218位氨基酸缺失1个糖基化位点,13个毒株在313位氨基酸增加了一个新的糖基化位点。研究结果表明华东地区近年来H9N2亚型AIV存在一定的变异,应加强对该类病毒的分子流行病学监测。     

VC对盐胁迫下紫苏种子萌发的影响

为了解VC对盐胁迫下紫苏种子萌发的作用机制,研究不同浓度VC浸种和NaCl处理对野生紫苏种子萌发率、活力指数和盐害指数的影响.结果表明,VC浸种和低浓度盐(25、50 mmol/L)均能促进紫苏种子萌发;VC浸种能缓解75和100 mmol/L盐对种子萌发的胁迫;VC浸种在其余盐浓度对种子萌发胁迫上产生协同叠加毒害效应.40 mg/L VC浸种耐盐临界度为100 mmol/L(20、25℃),20 mg/L VC浸种耐盐临界度为100 mmol/L(30℃),20和30℃条件下,极限耐盐度为175 mmol/L;20 mg/L VC浸种极限耐盐度为175 mmol/L(25℃).     

DFRKN-1碱性磷酸酶的提取纯化和主要理化性质研究

[目的]提取纯化根结线虫天敌真菌-1(Destroying fungi of root-knot nematode-1,DFRKN-1)的碱性磷酸酶,并对其主要理化性质进行研究。[方法]以DFRKN-1为提酶材料,经正丁醇提取,硫酸铵分级沉淀分离,透析获得酶的粗提取液,用SephadexG-150凝胶过滤柱层析纯化,获得纯化碱性磷酸酶,并测定纯化碱性磷酸酶的理化性质。[结果]酶纯度达到电泳纯,提纯倍数达到15.7倍,比活力达5333 U/mg;该酶的最适pH值为8.9,最适温度为43℃,米氏常数为6.82 mmol/L;K+、Ba2+、Mg2+对该碱性磷酸酶的活性均有激活作用,甲醛、草酸、酒石酸对该碱性磷酸酶均有抑制作用。[结论]试验结果可为进一步深入研究DFRKN-1提供参考。     

鸭IFN-γ,IL-2mRNA荧光定量RT-PCR方法的建立及应用

为评价疫苗免疫对鸭细胞免疫应答反应的影响,本研究提取鸭脾脏组织总RNA,采用鸭IFN-γIL-2、GAPDH基因特异性引物,建立了SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)方法.结果显示IFN-γ、IL-2、GAPDH基因扩增标准曲线相关系数均高于0.99;3者扩增效率相近,均接近于100％;融解曲线呈特异性单峰;各基因组内和组间变异系数均小于2％.应用该方法检测不同佐剂禽流感灭活疫苗免疫樱桃谷鸭后脾脏组织IFN-γ和IL-2 mRNA的相对表达水平.结合免疫后抗体水平及攻毒保护结果,比较不同佐剂对禽流感灭活疫苗免疫应答的影响.结果显示,金黄色葡萄球菌毒素A重组蛋白(rSEA)佐剂组IFN-γ和IL-2 mRNA表达水平显著高于其他免疫组(P＜0.05).结果表明,建立的qRT-PCR特异性、重复性和稳定性良好,能够快速、准确检测鸭体内细胞因子的表达水平,为进一步评价疫苗免疫效果奠定了基础.     

鸭胚成纤维细胞上坦布苏病毒受体蛋白的鉴定

[目的]拓展对坦布苏病毒受体的认知,为研究其在鸭体内的感染机制打下基础.[方法]取9日龄SPF鸭胚制备鸭胚成纤维细胞(DEF),待细胞长成单层后提取DEF膜蛋白,利用免疫共沉淀试验筛选出DEF膜蛋白中可与坦布苏病毒结合的蛋白,经病毒辅覆蛋白结合分析(VOPBA)验证后通过LC-MSMS质谱分析进行鉴定;同时人工合成鸭热休克蛋白70基因(HSP70)序列的开放阅读框(1905 bp),构建重组质粒pET32a-HSP70并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,以重组蛋白免疫小鼠制备抗鸭HSP70血清,与DEF细胞共孵育后接种坦布苏病毒,并采用实时荧光定量PCR检测抗血清对病毒感染的抑制作用.[结果]DEF膜蛋白中分子量约70 kD的蛋白可与坦布苏病毒结合,经LC-MSMS质谱分析和序列比对可确定该蛋白即为鸭热休克蛋白70(HSP70).含重组质粒pET32a-HSP70的BL21(DE3)感受态细胞经IPTG诱导4 h后,SDS-PAGE检测发现在分子量约85 kD处出现目的蛋白条带,获得的重组鸭HSP70蛋白主要以包涵体形式进行表达,且能与His标签抗体发生特异性反应.以重组鸭HSP70蛋白免疫小鼠获得的抗鸭HSP70血清可封闭DEF细胞上的HSP70,而竞争性抑制坦布苏病毒感染.[结论]HSP70是坦布苏病毒感染DEF细胞的受体,可作为新的靶点用于抗坦布苏病毒药物设计.     

旱砂地沙枣种子直播与植苗造林技术研究

为了提高荒漠区旱砂地造林成活率、保存率、降低造林成本,我们在景泰县芦阳镇红光村进行了沙枣(Elaeagnus angustifolia L.)种子直播与植苗造林试验。结果表明旱砂地沙枣植苗造林与直播造林成活率差异不大,但保存率差异较大,植苗造林保存率比直播造林高出18%;成本分析表明植苗造林与直播造林等成本效果比为100∶197.06,等效果成本比为100∶50.97。     

旱砂地树种选择与造林技术

在白银市的旱砂地上,选择具有代表性的区域5处共26.7hm~2,从2008年开始至2017年,用比较抗旱的12个树种进行了对比栽培试验,观察10年来的生长情况及保存率,得出相对适生的树种,研究出旱砂地造林技术,推广旱砂地造林1.34万hm~2,初步得出了旱砂地的可持续了利用和植被恢复相关数据和依据。     

生鲜乳中三聚氰胺检测改进方法试验方案

三聚氰胺(Melamine)是一种三嗪类含氮杂环有机化合物,重要有机化工原料,具有肾毒性,能导致人体肾结石,甚至肾衰竭而被强制限量.2008年10月7日,国家质检总局、国家标准委员会发布了GB/T22388-2008国家标准,对三聚氰胺的检测有高效液相色谱法(HPLC),液相色谱-质谱/质谱法(LC-MS/MS)和气相色谱-质谱联用法(GC-MS).目前液相色谱配合紫外检测器或二极管阵列是最常用的检测方法,但其不足在于前处理时间长、步骤复杂,降低检测效率.与国标法相比,改进的方法不采用三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤、更换流动相中离子对试剂缓冲液与乙腈的比例及试剂,更换提取液试剂,共可降低约40%的检测成本,节省约2倍的处理时间.     

负载EM菌天然沸石对水体氨氮的去除效果

以负载EM菌的天然沸石为研究对象,对比其与原始沸石去除氨氮的效果。结果表明,粒径0.5~1 mm的天然沸石吸附5 min时对100 mL含10 mg·L^-1氨氮水体的去除率和吸附量达到极值,分别为4.24%和0.088 mg·g^-1。在此条件下增加沸石投加量或减小氨氮初始浓度均会降低天然沸石对氨氮的吸附量。天然沸石负载EM菌的最佳条件为天然沸石与浓度为9.6×10⁹ mL^-1的EM菌接触24 h。该条件下,负载EM菌的天然沸石对100 mL含10 mg·L^-1氨氮的最高去除率和吸附量分别可达24.79%和0.502 mg·g^-1,较天然沸石大幅提升。