猪细小病毒7型SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立及临床样品的检测

采用PCR方法扩增猪细小病毒7型(PPV7)衣壳蛋白基因保守区域493 bp,将其克隆到pMD18-T载体,构建重组质粒作为标准阳性质粒,以其为模板建立用于检测PPV7的SYBR GreenⅠ实时PCR检测方法,并验证其灵敏性、特异性和重复性。结果表明,本试验建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法在2.85×10^1~2.85×10^8拷贝/μL呈良好的线性关系,相关系数为0.995,斜率为4.158,灵敏度可达到2.85×10^1拷贝/μL。该方法对于猪繁殖障碍性传染病常见病原如PRRSV、PCV2和PRV未出现特异性扩增,表明特异性好。所有标准曲线在溶解温度为83.103℃时出现单一的特异峰。使用本方法检测了2017年山东地区7家养猪场216份临床样品,总阳性率为12.5%。     

北京亦庄电网综合评价及供电能力分析

通过对现有电网结构和运行数据的分析，对北京经济技术开发区核心区（亦庄）电网进行综合评价。及对10kV电网从技术合理性、运行安全性、供电质量及可靠性、维护水平和运行经济性等方面进行综合评价，并从这几个方面对存在的主要问题进行分析。     

走出农村教育的瓶颈

我国农村人口占总人口的65％，农村的发展对中国改革开放和现代化建设具有举足轻重的影响．可以说．没有农村的小康就没有全国的小康。而农村的发展靠人才．人才的培养靠教育。因此，农村教育是中国教育改革的重点，大力发展农村教育，把沉重的人口负担转变为人力资源的优势，不仅是教育发展的重要目标，也是影响现代化建设进程的战略性任务。     

南方红壤丘陵区不同土地利用方式土壤N2O排放系数研究

【目的】明确不同土地利用方式土壤氧化亚氮（N₂O）排放系数的差异并评估区域N₂O排放,为评估南方红壤丘陵区N₂O排放清单提供基础数据和参考依据。【方法】选择南方红壤丘陵区4种常见的土地利用方式（油茶林、旱地农田、稻田和松林）,通过分析土壤不施肥与施氮肥时N₂O排放速率和排放量的差异,计算排放系数,并用15N同位素标记方法探究硝化作用和反硝化作用对土壤排放N₂O的相对贡献。【结果】不同土地利用方式土壤理化性质差异明显,稻田全氮含量最高（2.22 g/kg）,显著高于其他3种土地利用方式土壤（P<0.05,下同）。土壤不施肥时,N₂O排放速率在0~227.80 μg/（kg·h）,施氮量为200 kg N/ha时,N₂O排放速率在0~4213.27 μg/（kg·h）。4种土地利用方式的土壤N₂O排放系数均随土壤孔隙含水量（WPFS）增加而增加,WPFS为75%时,稻田、旱地农田、油茶林和松林土壤N₂O排放系数分别为2.47%、0.39%、2.31%和0.91%。4种土地利用方式土壤N₂O排放系数主要受全氮含量影响,N₂O累积排放量均与潜在反硝化潜势呈显著正相关,除稻田外,其他3种土地利用方式土壤N₂O累积排放量也与潜在硝化势呈显著正相关,以NO₃--N为底物的反硝化作用对N₂O排放的相对贡献平均大于90.00%,远高于硝化作用。【结论】南方红壤丘陵区土壤以NO₃--N为底物的反硝化作用主导N₂O排放,施用氨基氮肥可能有效减少氮肥N₂O排放损失,为国家执行碳中和政策提供理论依据。     

烟田施肥

树势强健，树冠较小，约相当于普通型树冠体积的2／3；新梢粗壮，萌芽率高达78．3％，短枝多，以短枝结果为主。结果早，4年生亩产可达2349公斤。其枝条缓放后易成花，短截、修剪促发的短枝也能成花结果。短果枝连续结果能力强，具有腋花芽结果的习性。开花较整齐，座果率高。     

紫花苜蓿MsGAI的克隆、表达及遗传转化

【目的】 DELLA蛋白属于GRAS家族,是赤霉素信号转导途径中重要的转录因子,负向调节GA转导途径。克隆获得紫花苜蓿GAI,分析其基因生物信息学特征并预测蛋白结构域。明确紫花苜蓿GAI组织表达特征及不同处理下的表达模式,构建该基因超表达载体并转入紫花苜蓿,以探究DELLA蛋白基因在紫花苜蓿赤霉素（GA）信号转导途径及胁迫条件下的作用机理。【方法】 利用同源克隆的方法,从紫花苜蓿中克隆得到MsGAI。利用生物信息学方法分析该基因的序列特征,使用MEGA7.0对MsGAI蛋白序列及同源序列进行多序列比对,构建同源物种间的系统发育树。利用实时荧光定量PCR检测紫花苜蓿各组织GAI表达量以及在PEG、NaCl、GA、ABA和黑暗处理下,GAI的表达变化。同时对转基因GAI株系表达水平进行分析,选择表达量高、中、低株系（L5、L8、L11）分别进行PEG和NaCl处理,分析GAI的表达变化。以pBI121为基础载体,采用双酶切-连接的方法构建植物超表达载体35S:MsGAI-gus。将重组载体转入农杆菌GV3101菌株中,以紫花苜蓿叶片为外植体,采用农杆菌介导的愈伤组织转化法转化紫花苜蓿,经PCR检测和GUS组织化学染色,得到转基因阳性苗。【结果】 该基因序列包含有一个1 818 bp的开放阅读框,编码605个氨基酸。生物信息学分析结果显示,MsGAI蛋白具有GRAS家族的典型结构域和保守区,其中包含N端保守结构域DELLA和TVHYNP,C端保守结构域SAW。多序列比对及系统进化树分析表明,该序列与其他物种的DELLA蛋白序列相似度均高达80%以上,将其命名为MsGAI。该基因与蒺藜苜蓿GAI亲缘关系最近,其次与鹰嘴豆、红三叶等双子叶豆科植物亲缘关系较近,与大麦等单子叶植物较远。实时荧光定量PCR分析表明,MsGAI在紫花苜蓿各组织中均有表达,根中的表达量最高。经PEG、NaCl、GA以及ABA处理后,均有明显响应;黑暗处理显著抑制MsGAI的表达。转基因株系经PEG、NaCl处理后,GAI表达量均上调。对构建完善的35S:MsGAI-gus植物超表达载体进行双酶切检测,琼脂糖凝胶电泳显示,条带大小与预期一致。对转基因植株进行GUS组织染色验证,结果表明,阳性植株呈现蓝色,对照组为白色。对超表达载体携带的MsGAI和GUS序列进行PCR检测均呈阳性。【结论】 紫花苜蓿DELLA蛋白基因的克隆和超表达载体构建成功,MsGAI对逆境胁迫有响应。     

东北地区秋季饲喂赖氨酸锌对湖羊种公羊血浆生化指标与精子质量的影响

【目的】试验旨在研究东北地区秋季饲喂赖氨酸锌对湖羊血浆生化指标与精子质量的影响。【方法】选择体况良好的1～2岁湖羊种公羊32只随机平均分为4组,分别补饲0、25、50、100 mg/d赖氨酸锌。试验于2022年8月至2022年10月在黑龙江伊春开展,平均气温10.3℃。试验预试期7 d,正试期56 d。分别于试验第28、42及56天采集湖羊颈静脉血,测定血浆睾酮、褪黑素、白细胞介素-2、白细胞介素-4、白细胞介素-6、白细胞介素-10、促肾上腺皮质激素和肿瘤坏死因子-α水平,以及血浆总抗氧化能力、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性及丙二醛水平。采集湖羊精液测定精子活率、质膜完整率及畸形率。【结果】第28天时50 mg/d组湖羊褪黑素水平显著高于0及100 mg/d组(P<0.05),总抗氧化能力显著高于0 mg/d组(P<0.05),白细胞介素-4水平显著低于25 mg/d组(P<0.05),白细胞介素-10水平显著低于0 mg/d组(P<0.05)。第42天时50 mg/d组湖羊超氧化物歧化酶活性显著高于0 mg/d组(P<0.05),白...     

竹子公园规划设计研究

从竹子公园的层面调查分析了现代园林竹子造景的现状,针对现存的问题提出建设性意见,指出现代园林植物造景借鉴古典园林竹子造景的艺术手法应“景到随机”、因地制宜。     

L9（34）正交试验优化柑橘中橙皮苷的提取工艺

[目的]开展柑橘皮中橙皮苷提取纯化工艺研究,充分利用汉中丰富的柑橘资源,提高其经济附加值。[方法]以汉中柑橘皮为研究材料,采用碱浸酸析法提取橙皮苷,以碱的种类、碱添加量、提取温度、提取时间、料液比进行单因素试验,以碱添加量、提取温度、提取时间、料液比进行L_9(3~4)正交试验优化橙皮苷的提取工艺,以超高效液相色谱检测验证优化结果。[结果]影响柑橘皮中橙皮苷提取纯化工艺因素大小依次为提取时间、碱添加量、提取温度、料液比;1 g柑橘皮添加0.08 g的Ca(OH)_2,提取时间0.5 h,温度30℃,料液比1∶30 g/m L的工艺条件下能得到最佳提取效果,粗产品收率为4.5%。[结论]试验所得优化参数和提取工艺稳定,选用的设备操作简便、快速,具有良好的应用前景。