进境大豆种子中烟草环斑病毒的快速检测

烟草环斑病毒(Tobaeco ringspot virus,TRSV)是进境大豆种子必须检疫的项目,属于我国禁止入境的二类检疫性有害生物,本文建立了大豆种子中TRSV的快速检测方法.采用Trizol试剂直接提取大豆种子总RNA,通过RT-PCR扩增得到359 bp特异性产物.该产物经半巢式PCR进一步验证得到206 bp特异性片段,经测序及同源性比较表明,片段序列与GenBank中登录的TRSV外壳蛋白基因部分序列存在92%～96%的同源性,而未见与其它基因序列存在同源性.同时,大豆种子样品经DAS-ELISA复核检测结果显示TRSV阳性反应.因此,判定该批进境大豆种子携带TRSV.     

PCR方法从进口饲料中检出转基因成分

本方法通过PCR扩增,从进口饲料泰农-40中得到35S启动子和Nos终止子外源基因片段,同时,从进口饲料效美素中得到Nos终止子基因片段,经酶切验证,最后判定这两种饲料中均含有转基因成分.     

一步RT-PCR检测南芥菜花叶病毒方法的建立

本研究采用Trizol快速提取植物叶片总RNA，通过GeneBank设计特异性引物，并利用一步RT—PCR技术，最终建立了一套比较实用的检测ArMV的方法。该方法对于其它病毒的检测同样具有借鉴意义。     

啤酒花潜隐类病毒的实时荧光RT-PCR检测

 近年来,四川省冕宁县大力发展樱桃产业,全县樱桃种植面积1 500 hm2,年产量已达到1 3000 t,是凉山有名的樱桃之乡。2009年开始,在部分樱桃园发现花变绿症状果树,随后发病面积逐年扩大,2011年发病面积已达总栽培面积的3%,发病果园病株率可达10%~40%,对冕宁县樱桃产业造〖HJ*2/3〗成潜在威胁。本研究针对植原体进化过程中的保守基因（16S rRNA和核糖体蛋白rp基因）,采用分子生物学方法对冕宁县采集到的表现花变绿症状的樱桃植株进行检测鉴定,以明确病原及株系的分类地位,为该病害的防治提供参考。     

检测小麦线条花叶病毒的TaqMan MGB探针技术

为给小麦线条花叶病毒(Wheat streak mosaic virus,WSMV)的灵敏、稳定、快速检测提供依据,根据该病毒不同分离株外壳蛋白(Coat protein,CP)基因的保守序列,设计了特异性引物与TaqMan MGB荧光探针,建立了WSMV的实时荧光RT-PCR检测方法.结果表明,本研究设计的TaqMan MGB荧光探针对WSMV的检测具有很好的特异性,解决了因病毒不同分离物之间基因组变异较大、难以找到长片段保守序列来设计探针的困难.该方法无需任何PCR后处理.基因污染风险小.它与双抗体夹心酶联免疫检测方法相比,灵敏度提高1 000倍,具有快速、灵敏和高特异性的优点,适合于WSMV的快速检测.     

斑点免疫金渗滤法检测赤羽病抗体的研究

以亲和层析原理为基础,将提纯的AKAV抗原包被在硝酸纤维膜上,利用胶体金标记SPA显色,建立了斑点免疫金渗滤法诊断赤羽病抗体的方法。其中最佳点样抗原质量浓度是0.099mg/mL,封闭液选择含1%BSA,0.5%Tween-20的0.01mol/LpH7.2的PBS缓冲液,SPA胶体金最佳稀释度为1∶4。特异性试验表明,该方法特异性好,与牛病毒性腹泻病毒、牛传染性鼻气管炎、牛白血病、口蹄疫、蓝舌病等阳性血清不发生交叉反应。将DIGFA与ELISA进行对比,差异不显著。研究结果表明,该方法操作简单,结果易于判断,适用于赤羽病的临床诊断和流行病学调查。     

痕量转基因油菜籽成分的半巢式PCR检测

研究成功建立了痕量转基因油菜籽成分的半巢式PCR(Semi-nested PCR)检测方法，灵敏度比常规PCR提高了100倍。该方法通过改良CTAB法提取并纯化得到不同梯度浓度的DNA模板溶液。设计了4个外源基因的特异性半巢式PCR引物，以油菜籽磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(PEP)为内标准基因，对油菜籽混合样品中外源FMV35S启动子、GOX、BARSTAR和BARNASE基因进行了检测，灵敏度达到0.001%。