绵羊FecB基因非探针法HRM分型技术条件优化研究

本文通过对影响高分辨率熔解曲线(HRM)的因素分析,旨在建立适合绵羊FecB基因分型的最优反应体系。试验分别对扩增子长度、引物量、Mg2+浓度和模板量等因素进行研究。结果表明,不同因素都会对HRM分析结果有影响,绵羊FecB基因非探针法HRM分型的最优反应条件为:引物添加量0.6μL,Mg2+浓度2.4 mmol/L³.2 mmol/L,模板量50 ng,以及扩增产物为115 bp。     

羊腹腔镜深部授精技术的应用

腹腔镜技术(Laparoscopic technique)可用于疾病诊断、活体检测、活体取样、卵泡发育活动观察,以及辅助动物人工授精(artificial insemination:AI)和胚胎移植(embryo transfer:ET)等,还可对小动物如犬、猫等进行绝育手术(切除卵巢或子宫等),亦可用于牛的真胃移位手术操作。本文介绍了腹腔镜技术在羊AI上的应用,统计资料显示,采用传统的输精技术,羊情期受胎率平均为45%~55%,而采用腹腔镜输精技术,羊情期受胎率平均为70%~93%,比传统输精技术提高了15%~25%,甚至40%以上。腹腔镜输精技术的应用提高了羊的情期受胎率,提高了工作效率,方便于规模化羊场组织生产,有利于成批次的培育肥羔,增加养殖的经济效益。     

绵羊KAP6.1基因的遗传多态性分析

KAP6.1基因属于角蛋白家族,羊毛纤维的复杂结构主要由角蛋白组成,这些蛋白对于羊毛纤维的机械性能和主要构造起主要作用。本研究以693只中国美利奴羊(新疆军垦型)为实验材料,采用PCR技术、SSCP技术和克隆测序的方法分析KAP6.1基因的多态性。结果表明:KAP6.1基因存在C159T碱基突变和57 bp的插入/缺失,其中,C159T位点存在3种基因型,分别为AA,BB和AB型,基因型频率依次为0.3694,0.4574,0.1732,等位基因A频率为0.4560,等位基因B频率为0.5440。57 bp的插入/缺失位点存在2种基因型AA型(303 bp)和AB型(303 bp/246 bp),基因型型频率依次为0.9292和0.0707,等位基因A频率为0.9646,等位基因B频率为0.0354,实验证明KAP6.1基因能够作为优质细毛羊毛性状的候选基因进行研究。     

不同品种绵羔羊超数排卵及胚胎体外生产技术研究

探讨品种对羔羊超数排卵效果和卵母细胞发育能力的影响,并将体外受精胚胎进行了移植,为研究利用绵羊羔羊卵母细胞生产后代提供理论和技术方法。对4～8周龄不同品种羔羊用FSH+PSMG处理后获得的平均卵母细胞数量和体外胚胎卵裂率和囊胚率进行了比较,并比较成熟液中有无β-巯基乙醇对胚胎卵裂率和囊胚率的影响。结果:各品种获得的平均卵母细胞数分别为:哈萨克为210.22枚,湖羊为0枚,美利奴为135.80枚,湖羊与哈萨克的杂交后代为37.80枚,湖羊羔羊和湖羊与哈萨克羊的杂交羔羊获得的平均卵母细胞数显著低于哈萨克羔羊(P<0.01,P<0.05)。哈萨克羔羊卵裂率(69.0%)显著高于湖羊与哈萨克羊杂交羔羊(66.4%,P<0.05);哈萨克羔羊囊胚率(17.5%)和美利奴羔羊囊胚率(16.2%)显著高于湖羊×哈萨克羔羊(13.8%)(P<0.01,P<0.05)。β-巯基乙醇对羔羊胚胎卵裂率影响不显著,对囊胚率影响极显著(P<0.01)。哈萨克羔羊卵子体外受精获得的2-8细胞胚胎进行输卵管移植,14只受体羊中7只妊娠,妊娠率为50.0%;共产羔9只,其中8只存活。     

湖羊PRNP多态性及其对产羔数影响和抗痒病风险评价

为了对湖羊的抗痒病选育提供实验依据,本研究采用PCR-RFLP和测序方法,对120只湖羊PRNP编码区136位、154位和171位密码子多样性进行检测,分析PRNP多样性和基因型对产羔数的影响,并对湖羊痒病易感性进行评估。结果表明,在湖羊中发现了之前研究报道的3个位点所有突变,其优势等位基因分别为A136(94.2%),R154(99.2%)和Q171(62.9%)。在检测的8种单倍型中,ARQ(56.6%)和ARR(21.3%)为主要单倍型。本研究还在湖羊中发现新的单倍型TRK(HM639758),但比例仅为0.4%。群体中ARQ/ARQ(29.2%)和ARR/ARQ(27.5%)为优势基因型,而抗病性基因型ARR/ARR仅占4.2%,未发现VRQ/VRQ基因型。湖羊主要隶属于抗病力较高的R1-2级(35.0%)和R3级(47.5%),推测湖羊对痒病具有中低度易感风险。PRNP不同基因型的选育对产羔数无显著影响。     

半胱胺对藏绵羊断奶羔羊增重及饲料转化效率的影响

试验研究了半胱胺(Cs)对藏绵羊断奶羔羊增重、饲料转化效率的影响。将40只(公母各半)80日龄左右且体重平均为(16.00±0.31)kg的藏绵羊断奶羔羊随机分为2组(试验组和对照组),在日粮精料中添加300 mg/(kg·BW)的Cs,隔日添加1次,试验期42 d。分别于开始用药后的第0、7、14、21、28、35天称重,并记录各组所采食的精料量。试验结果表明,试验组精料中添加Cs使藏绵羊断奶羔羊35 d增重提高43.25%(P0.01),开始用药后的前7 d差异不显著,但8~35 d最为明显,以后随时间延长促生长效果逐渐减弱;精料/增重比下降43.33%。     

非探针法高分辨率熔解曲线(HRM)对FecB基因分型方法的研究

为了建立一种基于非探针法高分辨率熔解曲线(HRM)技术对绵羊FecB基因高效分型的方法,试验选用健康、成年绵羊48只,利用HRM和限制性片段长度多态性(PCR-RLFP)对绵羊多胎主效基因FecB基因进行分型效果研究。结果表明:FecB基因具有3种基因型,分别是野生型(AA)37.50%、杂合型(GA)33.33%、纯合突变型(GG)29.17%;通过对基因测序比对、HRM和PCRRLFP结果的准确率比较,HRM的准确率达到了95.83%(46/48),高于RLFP的分型结果,所需试验时间大大缩短。说明非探针法HRM技术是一种高效率、节省人工的FecB基因分型方法。     

利用同期发情技术提高中美羊双胎率的试验

用中国美利奴成年母羊 6 0只 ,幼龄母羊 (8月龄 ) 19只 ,用同期发情处理 ,其中 ,A组 17只成年母羊发情配种 ,发情率为 10 0 % ,双胎率为 73.3%。B组 43只成年母羊同期处理后利用腹腔内窥镜观察卵巢排卵情况 ,其中排双卵的羊 35只 ,占 81.4% ,明显高于自然发情母羊双胎率 (2 3.2 % ) (P <0 .0 1)。C组同期处理 8月龄幼龄母羊 19只 ,配种妊娠 14只 ,其中双胎 6只 ,双胎率为 31.6 %。     

荷斯坦公牛PRNP多态性与精子活力相关性及抗病性评估

为分析荷斯坦公牛朊蛋白基因(PRNP)多态性与精子活力的关系,并对其抗病性进行评估,选育抗病公牛,本实验以公牛精液为样品,研究脚基因中12bp、23 bp和24 bp 3个片段的插入/缺失多样性、基因mRNA转录水平及其与精子活力等指标的关系.结果表明,12bp和23 bp在群体中均得到3种基因型,24 bp只有2种基因型.不同基因型群体的mRNA转录水平存在显著差异,而基因型与精液产量和活力等指标存在相关性,抗病力和精子活力指标存在负相关.本研究中3个片段的插入-缺失多样性可以作为公牛选育的辅助标记.     

精原干细胞体外培养研究进展

精原干细胞（SSCs）是指位于睾丸生精小管基膜上既能自我更新维持自身群体数量恒定,又能定向分化形成精母细胞,最终形成精子的一类原始干细胞。其体外培养以及近年来兴起的移植、基因转染的深入研究,为探讨精子的发生机制、重建不育个体的精子发生、生产转基因动物提供了新的途径。文章综述了精原干细胞体外培养的研究现状,并对其体外的纯化、鉴定,以及未来的应用进行了介绍,旨在为精原干细胞的研究提供借鉴。