犬瘟热病毒中国分离株囊膜糖蛋白基因免疫小鼠诱发的抗体应答

将CDV中国分离株(YZ0101)的两囊膜糖蛋白基因F和H与pGEM—rreasy载体构建的重组质粒分别采用EcoRI和Kprd、BamHI和Kpnl双酶切后定向克隆进真核表达载体pcDNA3．1(-)中，DNA测序和限制性酶切分析筛选阳性克隆pcDNA-H和pcDNA-F，以重组质粒DNA和脂质体共转染COS-7细胞，用间接免疫荧光试验验证转染的COS-7细胞胞浆中分别表达了CDV的H和F蛋白。以聚乙烯胺(PEI)为佐剂，将犬瘟热病毒F和H基因重组质粒pcDNA-H和pcDNA-F的DNA分别或混合肌注6周龄BABI／c小鼠，同时设pcDNA原载体DNA对照。以2周为间隔共免疫4次。最后一次免疫后3周，采血分离血清，酶联免疫吸附试验(ELISA)和病毒中和试验(SN)分析基因免疫在小鼠体内诱导的免疫应答。结果显示：pcDNA-H和pcDNA-F试验组免疫4次后分别激发了10^2.99 0.134、10^2.93 0.164滴度的ELISA抗体；两种质粒DNA混合免疫后产生了1：32～1：128的抗CDV的中和抗体；而原载体DNA免疫后，用ELISA和SN未检测出特异的CDV抗体。表明犬瘟热病毒囊膜糖蛋白F和H基因免疫小鼠可诱发产生特异性的体液免疫。     

基因打靶技术的应用研究

简要阐述了基因打靶的概念和基本环节,系统介绍了筛选方法和基因打靶的策略.基因打靶在基因功能研究、家畜遗传改良、人类疾病动物模型的建立和基因治疗等方面有着广阔的应用前景.     

转基因SD大鼠构建技术的研究

为构建转基因SD大鼠,用3种不同转基因构件p279-D5、p279-D5B、p279-SV40Tag对SD大鼠受精卵进行显微注射和胚胎移植试验,移植出生仔鼠经PCR检测筛选首建鼠.结果表明:以每只20 U的孕马血清促性腺激素和人绒毛膜促性腺激素的剂量组合对5周龄组大鼠达到了最佳超数排卵效果.3种构件经PCR检测后都获得了阳性后代,其外源基因整合率分别为p279-D5 1.4%(5/350)、p279-D5B 1.1%(3/274)和p279-SV40Tag 1.3%(3/230).     

LaSota疫苗气雾免疫试验

鸡新城疫气雾免疫在国外已广泛采用,国内虽有少数鸡场正在使用或试验中。但是,初次气雾免疫对雏鸡造成的副反应(呼吸道症状)尚无很好的克服办法,只能在弱毒疫苗(Ⅱ系、B_1等)作饮水、滴鼻等的基础免疫,采用气雾免疫,以加强免疫效果。本试验旨在肉用仔鸡整个饲养期中(约10～12周),免去基础免疫而采用一次气雾免疫,以达到减少副反应和免疫保护的目的。多次试验表明:采用鹅胚化LaSota疫苗(鸡新城疫Ⅳ系苗)在雏鸡12～16日龄时进行一次性气雾,如果喷雾器具的雾滴选择适当,免疫反应可以降低到最小程度,并可在80日龄以内抵抗鸡新城疫强毒的攻击,免疫保护率可达100%。一次性气雾免疫做到省时、省疫苗,工效可提高150倍以上,不失为肉用鸡场简便而经济的免疫方法。     

犬输卵管胚胎移植实验研究

对自然发情同步配种的供体毕格犬输卵管冲卵,受体毕格犬输卵管鲜胚移植,以摸索犬输卵管胚胎移植的方法和技术,为犬转基因和克隆研究提供技术参考。结果表明:在8头受体犬中有1头犬于手术后成功怀孕并顺利产下1头胚胎移植雄性幼犬,首次获得输卵管胚胎移植成活幼犬,从而说明犬的输卵管胚胎移植方法是可行的。     

应用ELISA检测鸡血清外源性白血病病毒抗体

应用ELISA检测南京,扬州等地7个鸡群鸡血清中禽白血病病毒(ALV)抗体。在被检的335份血清中,阳性170份,占51％,所检的7个鸡群,均有不同程度的阳性检出率。     

牛膈疝经胸腔修补

牛的膈疝以往认为是稀有病,实际上乳牛和役牛均有发生。近十年来国外在这方面的报导逐渐增多,国内尚未有报导。膈疝是一种严重的疾病,不能自愈,手术修补是唯一的疗法。由于手术修补在成年牛难度较大,以往不少人虽经尝试,但成功者很少,以致Blood等(1979)至今还认为应早期淘汰。1974年Vig和Singh曾实验性地制造了水牛犊膈     

犬瘟热病毒扬州分离株融合蛋白F和附着蛋白H基因的序列分析

根据Genbank犬瘟热病毒(CDV)毒株序列分别设计融合蛋白F和附着蛋白H全基因的2对引物，以2个CDV扬州分离株(CDV-YZ0101、CDV-YZ0102)为模板RT-PCR扩增出H基因和F基因2个片段，将其克隆进pGEM-Teasy载体，并进行序列分析。结果表明：H基因的开放阅读框架(ORF)为1824bp，2种分离株间核苷酸和编码氨基酸同源性达98％左右，与中国长春分离株、美国、日本分离株的同源性分别为96％、93％～95％和9。％～91％。氨基酸分析显示扬州分离株与其他分离株的H蛋白有8～9个可能的天冬酰胺糖基化位点，而OP-CDV疫苗株只有4个类似位点。扬州分离株与长春分离株同属一个系，与美国、日本分离毒株以及疫苗株相比，均存在着明显的差异。F基因ORF为1989bp，不同毒株间的核苷酸及编码氨基酸差异主要表现在信号肽区域，而编码的F0前体蛋白表现出较高同源性(97％～99％)，且所有的13个半胱氨酸残基、4个可能的天冬氨酰糖基化位点和2个疏水区域均完全一致。因此CDV F与H蛋白基因相比有很高的同源性，证明中国分离株与国外参考株有差异。