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为制备可以区分牛病毒性腹泻1型病毒(BVDV1)和2型病毒(BVDV2)的单克隆抗体,利用纯化的BVDV1和BVDV2为抗原免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),取脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,同时以BVDV1和BVDV2病毒作为包被抗原进行间接BVDV1-ELISA和BVDV2-ELISA检测,获得了3株单克隆抗体,其中1株是针对BVDV1的特异性抗体命名为BV1,另外1株是针对BVDV2的特异性抗体命名为BV2,第3株与BVDV1和BVDV2病毒都反应命名为BV12.交叉实验表明,3株单抗中仅有BV12与猪瘟病毒(Hog chorera virus,HCV)反应.BV1、BV2和BV12单抗腹水效价分别为106、107和106,均具有中和活性,中和效价最高达1:524288,分别属于鼠IgG1、IgG2a和IgG2a亚类,轻链均为κ链.3株杂交瘤细胞的染色体数目分别为102、99和100条.本研究获得3株单克隆抗体可以区分BVDV1和BVDV2的杂交瘤细胞. 相似文献
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一株昆虫病原性真菌莱氏野村菌的分离与鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
利用PDA培养基,对收集自广东化州的家蚕病原真菌(编号为Ma1菌株)进行分离培养.首先对菌落特征、菌丝、分生孢子梗及分生孢子形态特征进行观察.再利用真菌核糖体基因ITS区域设计合成的引物对Ma1菌株进行PCR扩增得到558 bp大小的目的条带.目的条带采用Blast方法将测序结果在GenBank中进行同源搜索,依据邻接法构建获得与其相关菌株的ITS序列系统发育树.通过形态学和ITS基因序列分析,最终判定来自家蚕的病原真菌Ma1菌株为莱氏野村菌(Nomuraea rileyi). 相似文献
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阐述了300亿PIB/g斜纹夜蛾核多角体病毒母药的生产工艺,包括斜纹夜蛾的人工饲养、多角体病毒的人工增殖、多角体病毒的提纯、产品的制备、加工及包装.该产品为粉剂,多角体含量为300亿PIB/g.经生物测定,当多角体病毒的接种浓度为2.0×107 PIB/mL时,斜纹夜蛾四龄幼虫的平均死亡率可达86.40%. 相似文献
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香蕉枯萎病拮抗菌的筛选及盆栽防效的测定 总被引:1,自引:0,他引:1
从香蕉根围土壤中分离得到了六株对香蕉枯萎病具有较强抑制作用的拮抗菌,其中真菌2株(F1、F2)、细菌3株(B1、B2、B3)、放线菌1株(A1).利用土壤接种法和蘸根接种法分别测定了这6株拮抗菌对香蕉枯萎病的盆栽防治效果.结果表明:这6株拈抗菌对香蕉枯萎病均具有一定的防效,其中真菌F2菌株对香蕉枯萎病的防治效果最好,在接种其发酵液60 d后,两种接种方法的平均防效分别达60.54%和67.84%,这为利用生物防治方法控制香蕉枯萎病提供了潜在的资源. 相似文献
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为了构建马MHCI四聚体分子,从马外周血单核细胞(PBMC)中提取总RNA,采用RT-PCR技术对去除信号肽部分的β2m基因进行了扩增,将其RT-PCR产物经纯化、BarnHⅠ+XhoⅠ酶切后与经同样处理的原核表达载体pET-28a(+)进行连接,转化入感受态细胞BL21(DE3)。将筛选出的阳性克隆进行测序、诱导表达并将其表达产物进行纯化。结果表明,去除信号肽部分的马β2m基因全长300bp,含有1个开放阅读框,编码一由99个氨基酸组成的成熟蛋白;表达产物以包涵体的形式存在,经SDS-PAGE和Western-blotting分析,重组蛋白的分子质量约为15ku,且具有免疫生物学活性。 相似文献
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应用实时荧光定量RT-PCR方法评价了大肠杆菌表达的重组马白细胞介素-18(rEIL-18)蛋白在商品化的重组人IL-12(rhIL-12)协同作用下刺激马外周血单核细胞(PBMCs)产生EIFN-gamma的情况。在rhIL-12的协同作用下,rEIL-18在体外刺激马PBMCs产生EIFN-gamma的效应是阴性对照的20倍之多,并且在一定rhIL-12浓度的条件下,rEIL-18在体外诱导马PBMCs产生EIFN-gamma的能力是呈一定的剂量依赖性。此外,评价了制备的9株抗rEIL-18单克隆抗体中和rEIL-18的生物学活性的能力,证实其中1株可中和rEIL-18的生物学活性,并且呈一定的剂量依赖性。结果表明:首次获得原核表达的具有生物活性的rEIL-18,其活性可被1株抗rEIL-18单克隆抗体中和。 相似文献
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马γ-干扰素成熟蛋白基因在大肠埃希氏菌中表达及其多克隆抗体制备 总被引:5,自引:0,他引:5
采用RT-PCR从ConA刺激的马外周血单核细胞(PBMC)中扩增获得含信号肽的马γ-干扰素(Equine interferon-γ,EIFN-γ)基因,将其克隆至载体pCR2.1-TOPO中。通过PCR方法从重组质粒(pCR-EIFN-γ)中扩增马干扰素成熟蛋白(Mature EIFN-γ,reEIFN-γ)基因,并将其亚克隆至原核表达载体pET-28a( )。重组子经测序鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,将纯化后的表达产物免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。结果表明,mEIFN-γ基因全长为441bD,含一个开放阅读框,编码146个氨基酸的成熟蛋白;对其表达产物以可溶性和包涵体两种形式存在,重组蛋白相对分子量约为18Ku,且具有免疫反应活性。mEIFN-γ基因在大肠杆菌中高效表达并在非变性和变性条件下,采用Ni~ 亲和层析纯化方法均可获得高纯度的重组马γ-干扰素制备的多克隆抗体,为建立马γ-干扰素检测方法、监测机体免疫状态和研究机体免疫机制奠定了基础。 相似文献