奶牛SRY基因核心保守区真核表达载体构建及序列分析

SRY基因是哺乳动物性别分化与控制的主导基因,参与有序的、多层次调控性别分化和控制的过程.本研究从牛血中提取总RNA,设计特异性引物,利用RT-PCR技术扩增出SRY基因HMG box基因片段,将该片段与pMD18-T载体连接并转化到大肠杆菌(E.coli Top)10中,提取质粒并用EcoRⅠ、AvrⅡ酶消化,将消化后的目的基因纯化并回收,与经同样的酶消化后并纯化回收的载体pPIC9K连接并转化到E.coliTop10,获得重组表达质粒pPIC9K-SRYHMG box,经PCR、酶切、测序验证了此载体构建成功,为下一步使用毕赤酵母表达SRY蛋白打下基础.     

一例犬腹腔肿物的病理学诊断

2009年1月吉林农业大学动物科学技术学院收治1只雌性凯利蓝梗病犬,通过一系列检查诊断为小肠肿瘤。实施手术,切除空肠中段一直径约10cm外生性生长的形态不规则肿瘤。肿瘤无包膜,较坚实,切面呈肌肉样外观。病理切片发现肿瘤大部分为平滑肌构成,但肌细胞失去原有的梭形形态,细胞核大小不等,形态多样,染色质粗糙,核分裂像多见。最终确诊为空肠的平滑肌肉瘤。     

猪肌生成抑制素成熟蛋白编码序列真核表达载体的构建

从猪肌生成抑制素(MSTN)cDNA序列中设计引物。以pMD18-T-MSTN质粒为模板，PCR扩增猪MSTN成熟蛋白编码序列，该片段全长1095bp。将所得片段与pMD18-T载体连接，构建重组质粒pMT—mpMSTN，将其转化到大肠杆菌DH5a中，成功地筛选到阳性克隆。双酶切重组质粒pMT—mpMSTN和真核表达载体pcDNA3．1，连接目的片段与载体pcDNA3．1，转化大肠杆菌DH5a，经酶切、PCR及测序分析，表明成功地构建了真核表达质粒pcDNA3．1-mpMSTN。     

日粮氮源结构对阉牛氮代谢及瘤胃发酵影响的研究

采用安装瘤胃瘘管的西门塔尔改良架子牛阉牛3头 ,通过4×3不完全拉丁方设计 ,系统研究了4种不同氮源结构的日粮对阉牛消化代谢、微生物蛋白合成、N利用和瘤胃发酵的影响。结果表明 ,3组以玉米酒精糟 (CDDG)和尿素为主要N源的试验日粮随着RDP水平的增加其微生物蛋白产量、尿N排出量和乙酸/丙酸比有所增加 ,N沉积率亦随UDP的增加而增加。对照组豆粕型日粮的DM和OM的消化率高于试验组 ,微生物蛋白产量显著高于试验组 (P<0.01) ,但尿N高于试验组且N沉积率低于试验日粮A和B。对照组豆粕型日粮的瘤胃固相食糜流通率显著高于其它各组 (P<0.05) ,各处理对TVFA和 pH值无显著影响。对照组豆粕型日粮的NH3-N浓度最高且显著高于试验日粮A组 (P<0.05)。     

褪黑素对雏鸡睾丸支持细胞体外增殖的影响

为研究褪黑素对雏鸡睾丸支持细胞增殖的影响,本实验以原代分离培养并鉴定的雏鸡睾丸支持细胞为研究对象,经不同浓度(1、10、100、1000 nmol/L)褪黑素处理细胞48 h后,使用Cell Counting Kit-8(CCK-8)、EdU和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测雏鸡睾丸支持细胞的细胞活力、细胞增殖能力和增殖相关基因的表达。结果表明:与对照组相比,添加1000 nmol/L褪黑素可提高细胞活力和细胞增殖能力(P<0.05),上调PCNA、Cyclin B和Cyclin D基因的表达(P<0.05),下调P21基因的表达(P<0.05)。结果显示褪黑素可以促进支持细胞增殖。     

猪肌生成抑制素C端88氨基酸肽抗体制备

用IPTG诱导pET-28α-MSTN-BL21工程菌产生猪肌生成抑制素下游包涵体，应用SDS-PACE侧带法纯化包涵体蛋白，并用EDCI进行直接偶联，皮下多点注射试验用獭兔，连续免疫3次，每次间隔2周，其间用ELISA跟踪检测抗体效价。6周后，心脏采血，获得高效价的抗血清，血清滴度达l：6400。     

新形势下动物科学专业实践教学改革的思考

实践教学是实现素质教育和创新人才培养的重要环节,直接影响着动物科学专业人才培养的质量。文章分析了目前动物科学专业实践教学中存在的问题,并从教学内容、教学平台、教学方法和考核体系等方面提出了教学改革措施。     

临床分离大肠杆菌磺胺敏感性及磺胺抗性相关基因的检测

对分离自中国东北牛(n=181)、猪(n=182)、鸡(n=146)和鹌鹑(n=55)的粪便及病变器官的564株大肠杆菌菌株进行磺胺敏感性与磺胺抗性基因检测。分别用肉汤微量稀释法和聚合酶链式反应检测磺胺敏感性和磺胺抗性基因。结果表明:在564株菌株中,235(41.7%)株对磺胺试剂敏感,329(58.3%)株对磺胺甲恶唑有抗性,190(33.7%)株对甲氧苄啶-磺胺甲恶唑有抗性;不同动物分离株的磺胺抗性比例不同,从牛、猪、鸡和鹌鹑中分离到的菌株int1基因的比例分别是12.2%、44.5%、40.4%、18.2%,sul1基因比例分别是5.5%、37.4%、28.1%、3.6%,sul2基因比例分别是39.2%、25.3%、29.5%、10.9%,但在牛、鸡、鹌鹑源菌株中未检测到sul3基因,在182株猪源大肠杆菌中检测到13株(7.1%)sul3基因阳性菌株。菌株的磺胺抗性与其包含的抗性基因之间不完全吻合。     

发情周期不同阶段KiSS-1和GPR54 mRNA在小尾寒羊卵巢上表达规律的研究

研究发情周期不同阶段KiSS-1和GPR54 mRNA在小尾寒羊卵巢中的表达规律,为从分子水平阐明小尾寒羊多胎性的奠定基础。将12只雌性小尾寒羊随机分为4组,分别处于发情前期、发情期、发情后期和间情期,每组3只,颈动脉放血致死后采集卵巢,采用实时荧光定量PCR技术研究发情周期不同阶段母羊卵巢上KiSS-1和GPR54基因的表达规律。结果表明:母羊发情周期各阶段卵巢上均有KiSS-1和GPR54基因表达;发情期母羊卵巢KiSS-1基因的表达量显著提高(P<0.01),比发情后期、间情期和发情前期分别提高了1.0、1.7倍和1.4倍,发情周期不同阶段GPR54基因在卵巢上的表达量无显著差异(P>0.05)。研究结果表明,发情期母羊卵巢上KiSS-1基因的表达量极显著高于发情周期其他阶段,提示卵巢上KiSS-1表达可能参与母羊排卵过程的调节。     

溆浦鹅卵泡抑制素α亚基编码区cDNA克隆及其原核表达

根据GenBank中鸡卵泡抑制素α亚基序列设计引物，对该序列按大肠杆菌嗜好密码子进行优化，在设计的引物两端分别加上限制性内切酶SacⅠ和XhoⅡ的识别位点序列。利用RT-PCR技术从溆浦鹅卵泡的颗粒细胞总RNA中扩增出抑制素α亚基成熟区序列，经PCR扩增出354bp片段，该片段与pMD18-T载体连接，转化JM109感受态细胞，所得阳性克隆进行双酶切鉴定和PCR鉴定，并进行了测序分析，得到的克隆序列与设计的序列基本一致。表明成功地获得了抑制素α亚基编码序列的克隆载体。从阳性细菌中提取质粒，经SacⅠ和XhoⅠ酶切，回收354bp目的片段，定向克隆到pET28a中，转化DH5α受体菌，提取质粒，再转化到BL21(DE3)中，成功筛选出阳性克隆。阳性菌经IPTG诱导，通过SDS-PAGE，检测出溆浦鹅卵泡抑制素α亚基编码区的表达。