犬瘟热病毒N蛋白基因的克隆、原核表达及其表达产物抗原性鉴定

参考GenBank中发表的CDVN蛋白基因序列,用Oligo6．0软件设计一对特异性引物,从患犬瘟热的犬全血样品中提取总RNA,经RT—PCR扩增得到1572bp的基因片段,将其插入pMD18-T克隆载体中构建了pMD18-CDVN重组质粒,将其转入到大肠杆菌DH5a中,进行鉴定、测序。将目的基因与原核表达载体pGEX-4T-2连接构建了pGEX-4T-2-CDVN重组质粒,转化到大肠杆菌BL21（DE3）中,进行鉴定、测序、IPTG诱导表达。序列分析表明克隆的CDVN蛋白基因从起始密码子ATG开始到终止密码子TAA结束全长为1572个核苷酸,与GenBank中发表的CDVN蛋白基因序列相比同源率达到93．9％～99．1％。Western-blotting分析显示表达产物为84kDa的融合蛋白,可被犬瘟热抗血清所识别,具有良好的抗原性。     

犬细小病毒VP2基因的克隆表达与免疫印迹分析

根据基因库已发表犬细小病毒序列设计合成了VP2基因的1对特异引物,以细小病毒感染的犬粪样品中提取的总DNA为模板,进行PCR扩增。把扩增产物克隆至pMD18-T载体进行测序、鉴定。将克隆的VP2基因片段克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,再将构建成功的原核表达质粒载体pGEX-4T-2-VP2转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,进行鉴定、测序、表达。结果表明,克隆的VP2基因片段全长1 755 bp,与13个VP2基因序列的同源性为98.4%～99.8%。系统进化树分析表明,所克隆的VP2 CSN830611序列同日本株(AB054222)、意大利株(AF306445)的进化途径一致。Western-blotting分析显示,表达产物为90 kD的融合蛋白,可被犬细小病毒阳性血清所识别,具有良好的反应原性。     

湖北恩施烟区烤烟化学成分特点及综合评价

分析了湖北恩施烟区不同等级、不同产地、不同品种烤烟的主要化学成分特点,并进行了综合评价。结果表明:(1)烤烟总糖、还原糖含量较高,氯含量略低,其他主要化学成分含量适宜、比例协调;(2)不同等级烤烟的总糖、还原糖、总氮、烟碱、糖碱比、氮碱比存在显著差异;不同产地烤烟氯含量、钾氯比存在显著差异;不同品种烤烟主要化学成分的差异均未达显著水平;(3)不同等级烤烟以C3F化学成分的综合指数最大,不同产地以鹤峰县、恩施市烤烟化学成分的综合指数较大。     

分散固相萃取-气相色谱法测定茶鲜叶中7种拟除虫菊酯类农药残留

建立了超声波提取、分散固相萃取净化、气相色谱-电子捕获法(GC-ECD)同时测定茶鲜叶中甲氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、氯菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯7种拟除虫菊酯类农药残留的方法。样品采用V(乙酸)∶V(乙腈)=1∶99的混合溶剂超声提取,适量乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)、十八烷基硅烷键合硅胶(C18)和石墨化碳黑(GCB)吸附剂净化,GC-ECD测定,基质外标法定量。结果表明:在0.004~2 mg/L范围内,7种拟除虫菊酯类农药的峰面积与相应质量浓度间呈良好的线性关系,相关系数均大于0.999;在0.01~0.5 mg/kg的添加水平下,平均回收率为80%~101%,日内相对标准偏差(RSD)均小于8.4%(n=6),日间RSD均小于9.3%(n=3);7种农药在茶鲜叶中的检出限为0.002~0.02 mg/kg,定量限为0.01~0.05 mg/kg。该方法操作简单、定量准确、溶剂用量少,对检测条件要求低,可同时测定茶鲜叶中7种拟除虫菊酯农药的残留量。     

几种陆生植物材料对铜绿微囊藻的联合抑藻作用

正铜绿微囊藻属于蓝藻门、色球藻目,是蓝藻水华中主要的优势种群之一,因此倍受关注。为了控制蓝藻水华、改善水质及水产养殖环境,物理、化学、生物等控制蓝藻的方法逐步发展起来。随着生物技术的发展及物理化学方法越来越多弊端的发现,在控制蓝藻水华的技术中,以生态学原理为出发点的生物控藻技术得到广泛的研究。很多研究表明,溶藻菌、水生植物、陆生植物等都具有抑制藻类的作用。本研究是在前期筛选出的抑藻材料的基础上,以4种有效抑制铜绿微囊藻的陆生植物(马水桔皮、铁     

肥料运筹对不同茶果间作模式碧螺春茶叶产量与品质的影响

明确不同间作模式下碧螺春茶园高产优质协同的肥料运筹方式,为苏州洞庭碧螺春茶园"精准施肥"和"配方施肥"提供理论和技术支撑。以30年茶树龄的纯茶园和茶-枇杷间作茶园的碧螺春茶为材料,研究不同施氮水平以及无机有机肥配施对碧螺春茶百芽重及主要营养品质的影响。结果表明:(1)在不同施氮水平下,纯茶园和茶果间作茶园的茶叶百芽重均在施氮量为450 kg/hm2时最重,继续增加施氮量,百芽重不再增加,在纯茶园中反而下降,且茶-枇杷间作茶园的茶叶百芽重在有机肥与无机肥比例为6:4时达到最高。(2)在相同施氮水平下,茶-枇杷间作茶园的茶叶游离氨基酸、茶多酚和儿茶素含量均大于纯茶园;游离氨基酸含量与施氮量呈显著的正相关;有机无机肥配施能显著提高茶叶的游离氨基酸及咖啡碱含量,降低酚氨比,其中游离氨基酸在茶-枇杷间作茶园的作用效果大于纯茶园,咖啡碱的含量在纯茶园和茶-枇杷间作茶园中均在纯菜籽饼肥处理时达到最大值,与相同施氮量的无机肥处理相比较分别提高了41.9%和51.7%。茶-枇杷间作和增施有机肥有利于改善碧螺春茶叶的品质,30年树龄茶园适宜的施氮量为450 kg/hm2,根据茶园不同种植模式构建有机无机肥配施比例可实现茶叶高产优质生产目标。     

分散固相萃取-气相色谱法测定土壤中的高效氯氰菊酯残留

为建立快速准确地测定土壤中高效氯氰菊酯残留量的分析方法,采用乙腈超声提取土壤中的高效氯氰菊酯,提取液经PSA和C18分散固相萃取净化,利用HP-5毛细管色谱柱程序升温分离,气相色谱-电子捕获法(GC/ECD)测定,基质外标法定量。结果表明:在0.02-1.0 mg/L范围内,高效氯氰菊酯的峰面积与其浓度呈良好的线性关系,相关系数0.9930,方法检出限为0.003 mg/kg,定量限为0.02 mg/kg,加标回收率在83.8%-100.6%,相对标准偏差小于3.7%-9.8%。该方法操作简单、结果准确、溶剂用量少,对检测条件要求低,易于普及掌握,适用于土壤中高效氯氰菊酯残留量的测定。     

山东省茶产业现状与发展建议

总结了山东省茶产业在生产、加工、销售、品牌建设、创新业态等方面的现状;从深化产业多元化发展等方面提出建议,为促进山东省茶产业发展提供决策参考。     

桑叶复合袋泡茶的研制

桑叶为主料,以红茶、绞股蓝为辅料,分别设置3质量水平进行复配,研发最佳等级复合袋泡茶。对正交试验设计的9个配方茶进行感官综合评价,选出优级配方3个,其中,以配方桑叶∶红茶∶绞股蓝=2.0∶0.4∶0.1质量配比时最优,氨基酸、水浸出物、茶多酚含量最高,且咖啡碱含量低,确定为最佳配方茶。     

高效液相色谱法测定茶鲜叶中18种游离氨基酸含量初探

建立了一种快速、灵敏、准确的柱前衍生-高效液相色谱-荧光检测器测定茶鲜叶中18种游离氨基酸含量的方法。将茶鲜叶样品搅碎混匀,以超纯水作为萃取溶剂,在90℃水浴下浸提20 min,以6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯为衍生剂柱前衍生化,使用Symmetry C18色谱柱梯度洗脱。以3倍信噪比计算方法的检出限,18种氨基酸的检出限为0.05~1.27μmol·L~(-1)。应用该方法检测了2个碧螺春茶鲜叶中18种氨基酸含量。结果表明,该方法简便、准确、快速、可靠。