腺病毒载体的研究概况

1953年,Rowe等首次由人的手术切除的扁桃体组织,用血浆埋块培养分离得到一株病毒,以后他人又陆续从人和其他哺乳动物、禽类中分离到类似的病毒.因为最初是从腺体组织分离得到,故名腺病毒.它分为两个属:哺乳动物腺病毒和禽类腺病毒[1].该病毒是无囊膜的线性双链DNA病毒[2,3],腺病毒在自然界分布广泛,至少存在100种以上的血清型,基因组长约36 kb,其两端各有一个反向末端重复区(ITR),ITR内侧为病毒包装信号.基因组上含有早期转录基因(E)和晚期转录基因(L),早期转录基因包括E1A、E1B、E2A、E2B、E3、E4, 晚期转录基因为L1、L2、L3、L4、L5[4].     

鹅圆环病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立鹅圆环病毒(GoCV)抗体的检测方法,本研究通过原核表达重组核衣壳(Cap)蛋白,将纯化的该重组蛋白作为ELISA检测的包被抗原,利用交叉反应性,以羊抗鸡IgG(HRP-IgG)作为二抗,经反应条件的优化,建立了检测鹅血清GoCV抗体的间接ELISA方法。确立的ELISA反应最适条件为:抗原包被浓度为2.05μg/mL,待检血清稀释度为1∶50,HRP-IgG稀释度为1∶2000,待测血清和二抗均于37℃反应1.5h,底物于室温显色10 min。经38份阴性血清检测确定阴阳性临界值为0.25。特异性试验结果显示,该方法与大肠杆菌、新城疫、禽流感H5和H9、小鹅瘟、鹅副粘病毒抗原阳性血清均无交叉反应;重复性试验结果显示,其批内和批间变异系数均小于10%。应用该方法检测了从4群GoCV PCR检测阳性种鹅群采集的血清,结果显示其血清阳性率在60.0%～90.9%。本实验建立的间接ELISA方法具有较好的特异性和重复性,为进一步开展GoCV流行病学调查提供了一种便捷可靠的手段。     

鸽圆环病毒浙江株△Cap基因的克隆与原核表达

根据已发表的鸽圆环病毒(PiCV)序列,在V1ORF保守序列部位设计引物(目的片段长度为629bp),对浙江某鸽养殖场的病料进行PCR扩增检测,获得阳性样品;应用设计的删除核定位信号外壳蛋白基因(△Cap)的引物,扩增获得680bp的△Cap基因,克隆于pMD18-T载体,进行测序;将△Cap基因亚克隆到原核表达载体pET-28a进行融合表达,SDS-PAGE电泳检测发现,△Cap融合蛋白经IPTG诱导后在大肠杆菌中以包涵体形式表达,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的22.1%。     

山黧豆抗氧化酶基因的克隆与表达分析

【目的】克隆山黧豆抗氧化酶基因,并对其进行生物信息学及表达模式分析,为研究抗氧化酶基因在山黧豆中的抗旱机制奠定基础。【方法】以萌发7 d的山黧豆叶片为材料,通过RT-PCR克隆山黧豆抗氧化酶基因的编码序列(CDS);采用荧光定量PCR分析抗氧化酶基因的组织表达模式;利用在线软件ExPASy ProtParam、SignalP 4.1、TMHMM V. 2.0、TargetP 1.1分别分析抗氧化酶基因编码的蛋白质理化性质、信号肽、跨膜区域以及亚细胞定位;利用在线工具Conserved Domain、SOPMA预测蛋白质保守结构域和二级结构,利用MEGA 6.0软件构建蛋白系统进化树;并利用20%PEG 6000溶液模拟干旱处理山黧豆,采用荧光定量PCR分析干旱胁迫不同时间抗氧化酶基因在叶片中的相对表达量。【结果】RT-PCR克隆获得山黧豆抗氧化酶基因APX、CAT、MnSOD、FeSOD和Cu/ZnSOD的编码序列,其长度分别为864,1 485,723,1 005和942 bp。生物信息学分析表明,APX、CAT、MnSOD、FeSOD和Cu/ZnSOD抗氧化酶均为酸性不稳定蛋白质,且均由α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲共4种二级结构组成;山黧豆抗氧化酶均包含高度保守的结构域。聚类分析结果表明,山黧豆的APX、CAT、MnSOD、FeSOD、Cu/ZnSOD依次与蒺藜苜蓿、蚕豆、豌豆、豌豆和锦鸡儿具有较高的相似性、较近的亲缘关系和遗传距离。表达分析结果表明,APX、CAT、MnSOD、FeSOD和Cu/ZnSOD基因在山黧豆根、茎、叶组织中均有表达。APX、CAT和MnSOD基因均响应了干旱胁迫,其中APX、CAT基因的表达量在干旱胁迫后迅速升高,3 h后达到最高,分别是0 h的5和4.3倍。【结论】成功克隆了山黧豆抗氧化酶基因APX、CAT、MnSOD、FeSOD和Cu/ZnSOD,推测其可协同清除干旱胁迫下产生的活性氧。     

黑龙江省中小规模奶牛场问题分析

正黑龙江省是国家的奶业大省,奶牛饲养量一直居全国前列。随着奶业提档升级步伐的加速,奶牛养殖的规模化程度也在不断提升。以往的"小规模、大群体""千家万户养牛"的模式已经淡出了历史舞台。但是,对于由散养而走向集中饲养的存栏500头以下的中小规模奶牛场来说,目前在以下几个方面存在着比较突出的问题。1疾病防控规模奶牛场的第一要务就是做好疾病防控,这是有别于散养的最大不同之处。对于奶牛场来说,一旦感染了传染性疾病就极难净化,很可能造成场区的废     

浅议生姜的功效与作用

生姜因其独特刺激的辛辣味,以及能够温热身体、升高体温的功效,越来越受到人们的瞩目,并且我们不但可以利用生姜水来沐浴,同时食用生姜对人体健康也非常有帮助,而且这两种方式都可以帮助身体排出毒素,减少脂肪。     

面向岗位需求的电子商务实践课程体系研究

近几年,电子商务的发展突飞猛进,市场对电子商务人才的需求量大增,但每个工作岗位都提出了新的要求,如何培养"学有所用",适合工作岗位的电子商务人才成为我们教学的一个重要问题。对电子商务的工作岗位进行调研后,运用项目教学法,提出了和岗位相对应的实践课程体系,构建了具体的实践项目,希望能够提升学生的实践技能,和工作岗位的需求想匹配。     

柿树害虫主要天敌的保护与利用

正果园中害虫的天敌分为捕食性和寄生性两大类。前者主要包括捕食性瓢虫、草蛉、小花蝽、蓟马、食蚜蝇、捕食螨、蜘蛛和鸟类,后者包括各种寄生蜂、寄生蝇、寄生菌等。1.1瓢虫瓢虫是果树害虫主要的捕食性天敌。以成虫和幼虫捕食多种蚜虫、叶螨、介壳虫、粉虱、木虱、叶蝉和其它小型昆虫。常见的有七星瓢虫、异色瓢虫、黑缘红瓢虫、红点唇瓢虫、红环瓢虫和深点食螨瓢虫。     

北方地区桑树主要病虫害防治方法

正1.1桑里白粉病桑里白粉病是由真菌引起的桑叶病害,各桑区均有发布。病症多表现在叶背,发病初期为散生白色细小霉斑,随病情发展病斑逐渐扩大连成一片,严重时布满全叶,霉斑白粉状,并散生许多黑色小粒点。本病多在秋季发生,在多湿条件下蔓延较快,枝条中、下部叶片发病比较重,发病桑叶提早硬化。防治方法:1)加强栽培管理,施足基肥,秋季早施肥,配施钾肥,及时抗旱,延迟桑叶硬化。2)合理采摘秋     

哺乳动物卵母细胞体外成熟的研究进展

<正>1卵母细胞体外成熟的研究现状1935年,Pincus等将从兔卵泡中分离出来的卵母细胞经体外培养,使其继续进行减数分裂,从而达到完全成熟。此后,卵母细胞的体外成熟培养得到了迅速发展。目前,卵母细胞的体外成熟技术己被广泛