牛Nanog基因真核表达载体构建及有效干扰序列筛选

 【目的】构建牛Nanog基因的真核表达载体pVenus-Nanog,筛选对其有效的干扰序列。【方法】以含有牛Nanog基因的PMD-18T-Nanog重组质粒为模板,经PCR扩增目的片段,将其克隆到真核表达载体pVenus上,酶切及测序鉴定正确后命名为pVenus-Nanog。将pVenus-Nanog用脂质体瞬时转染牛皮肤成纤维细胞,用荧光显微镜观察、RT-PCR和Western blotting分别检测Nanog的表达情况。针对牛Nanog基因的CDS区设计并合成3对干扰序列,分别命名为S1、S2、S3及阴性对照N.C.,用脂质体共转染pVenus-Nanog和siRNA于成纤维细胞,用半定量RT-PCR分析干扰效率。【结果】酶切分析与测序结果表明重组载体pVenus-Nanog构建成功,荧光显微镜观察、RT-PCR和Western blotting结果显示其能够在牛成纤维细胞中高效表达。脂质体共转染pVenus-Nanog和siRNA后,半定量RT- PCR结果显示S1效果最好,干扰效率达75%,S2和S3分别为20%和70%。【结论】成功构建了牛Nanog真核表达载体pVenus-Nanog,且获高效表达。通过脂质体共转染法筛选出了牛Nanog基因的有效干扰序列,为研究该基因在胚胎干细胞及早期胚胎中维持多能性调控网络中的作用机制奠定了基础。     

驴源马疱疹病毒8型的分离鉴定与生物信息学分析

本研究旨在分离1株驴源马疱疹病毒8型（Equine herpesvirus type 8，EHV-8）毒株并分析其遗传特征。从山东省聊城地区某驴场采集病驴肺脏组织，经PCR方法鉴定EHV-8的感染情况；对EHV-8感染阳性的肺组织进行研磨，经反复冻融后接种于兔肾细胞（RK-13）细胞中，盲传3代，待出现细胞病变（CPE）时收集细胞，并通过PCR、间接免疫荧光试验、透射电镜等技术对EHV-8进行鉴定。利用PCR扩增获得分离株的ORF70全基因组序列，并进行生物信息学分析。研究结果显示，经PCR鉴定获得EHV-8感染阳性的肺脏组织，病料接种易感细胞RK-13后出现典型CPE，分别收集前3代的细胞培养物，经PCR扩增，均获得与预期大小一致的ORF70基因片段，将分离获得的EHV-8毒株命名为SDLC66，序列上传GenBank，获得登录号：MW816102。经测序和序列比对发现，SDLC66毒株与AHV-3毒株（GenBank登录号：U24184.1）ORF70基因的相似性为99%，与国内的EHV-8 wh毒株（GenBank登录号：JQ343919.1）、国外EHV-8/IR/2015/40（GenBank登录号：MF431614.1）、EHV-8/IR/2003/19（GenBank登录号：MF431611.1）参考毒株的相似性最高，均为99.8%。经遗传进化树分析发现，SDLC66与EHV-8（EHV-8 wh、EHV-8/IR/2015/40和EHV-8/IR/2003/19株）在一个小分支上，亲缘关系最近；与EHV-1型参考毒株（Hong Kong/57/1984、United Kingdom/32/1982、Oxfordshire/206/2013株）序列来源于同一大分支，亲缘关系较近，与EHV-4毒株（91c1和TH20p株）亲缘关系较远。间接免疫荧光试验可见与病毒蛋白特异结合的红色荧光信号；透射电镜观察可见直径约110 nm的圆形病毒粒子，并且核衣壳外有一层亮晕，亮晕外有一层囊膜。说明本试验成功分离得到1株驴源EHV-8毒株，为进一步研究其致病性和致病机制奠定基础。     

两株H6亚型禽流感病毒全基因组序列测定及遗传进化分析

为研究2016年在活禽交易市场鸭体内分离的2株H6亚型禽流感病毒(AIV)[分别是A/duck/Jiangxi/88/2016(H6N6)(简称DK/88/16)和A/duck/Jiangxi/219/2016(H6N2)(简称DK/219/16)]分子特征及遗传进化规律,本实验对其进行了全基因组扩增和测序,并进行了遗传进化分析。结果显示,2株病毒间HA基因同源性较低,仅为94.5%,但与我国近年分离的H6亚型病毒株保持较高同源性。DK/88/16和DK/219/16的NA基因分别与我国近年流行的流感病毒N6和N2基因保持较高同源性。对2株病毒的内部基因分析显示,其内部基因的来源较为复杂,其中DK/88/16的内部基因PA来源于我国最近流行的H5N2或H5N6病毒,显示该株病毒为新的重组病毒。对2株病毒的分子特征分析显示,除M1蛋白的30和215位点及NS1蛋白的42位点具有增强病毒对小鼠致病力的分子特征外,其余均保持低致病力分子特征。以上结果表明,H6N2和H6N6亚型AIV在我国鸭群中持续存在,并不断的遗传重组,需要进行持续的流行病学监测。     

鲁西地方黑猪的耐粗饲性研究

为探讨鲁西地方黑猪对低营养水平日粮的耐受能力,研究设计3种不同营养水平的日粮A、B和C,并以长白猪和大白猪为对照,进行饲养试验。结果表明:A、B和C组间鲁西地方黑猪的日增质量和料重比差异不显著;而长白猪和大白猪,A组与B组,B组与C组间差异显著,A组与C组间差异极显著。表明增加粗纤维含量(9.2%~11.2%)对鲁西地方黑猪的肥育性能无显著影响,表现了良好的耐粗饲性。     

阿胶保健酸奶的研制

<正>试验目的是把牛奶和阿胶的营养成分与保健功能有机的融为一体,为阿胶资源的开发利用以及多品种、多系列、多风味的开发提供思路,并制得集营养与保健于一身的保健型酸奶。     

误食袜子引发的犬肠阻塞

2006年10月12日，笔者在聊城大学动物保健医院遇到这样一个病例：1只狼犬，28kg，年龄1岁半。主人诉：自前天发现狗不吃食，腹痛，少动，没见拉粪。经当地兽医门诊治疗2d，不但没有好转，反而病情加重了。随后来本院就诊。问诊得知这只狼犬平时一直在家里自由活动，很活泼，很讨人喜欢。     

鸡传染性法氏囊病与鸡伤寒混合感染的诊断

鸡传染性法氏囊病(IBD)是主要危害雏鸡的一种急性、高度接触性、病毒性传染病,病原为鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)。鸡伤寒是由鸡伤寒沙门菌引起的一种急性、败血性或慢性经过的传染病,主要危害2～3周龄雏鸡。现将实际工作中遇到的IBDV和     

雏鸡曲霉菌病的诊治

曲霉菌病也称霉菌性肺炎，主要发生在3周龄以下的雏鸡，是因饲料、垫草等发霉，雏鸡将霉菌孢子吸人肺部所致，能造成严重死亡和发育不良。1症状1．1主要是严重的呼吸困难，张口喘息，很少采食，饮水较多，后期有的腹泻，很快窒息或衰弱死亡。     

猕猴桃栽培技术

1园地及架式的选择选择 山区交通便利、光照充足、靠水源，雨量适中、湿度稍大地带，疏松、通气良好的沙质壤土或沙土，或富含腐殖质的疏松土类的丘陵山地作园地为佳。