禽呼肠孤病毒分子生物学研究进展

本文就十几年来有关呼肠孤病毒的特性、基因组、基因重组、病毒蛋白、诊断方法等分子生物学的研究进行了综述,并指出了禽呼肠孤病毒分子生物学研究中存在的问题,及进一步研究的方向。     

应用多重聚合酶链式反应检测鸡毒支原体、鸡滑液囊支原体和禽衣阿华支原体的研究

根据鸡毒支原体 (MG)、禽衣阿华支原体 (MI)、鸡滑液囊支原体 (MS)的基因文库 ,设计了 3对分别与MG、MI、MS某段基因序列互补的引物。用这 3对引物对同一样品中的MG、MI、MSDNA模板进行多重聚合酶链式反应 (PCR)扩增 ,结果均同时得到了 3条特异性的大小与实验设计相符的 732bp (MG)、 2 99bp (MI)、 2 0 7bp (MS)多重的PCR扩增带 ,而对其他 6种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性 ;敏感性测定结果能同时检出 1pg的MG、MI和MSDNA模板     

应用聚合酶链反应检测鉴别禽衣阿华支原体的研究

根据基因库中衣阿华支原体（ＭＩ）１６ＳｒＲＮＡ基因序列,设计了一对跨幅为２９９ｂｐ的引物,用这对引物对４禽株衣阿华支原体标准菌株和６种其它禽病病原体进行ＰＣＲ扩增,结果４禽株衣阿华支原体菌株均得到３片段大小与预期设计相一致的２９９ｂｐ的ＰＣ白话 增产物,而其它６种禽病病原体的扩增结果则均生,该ＰＣＲ能检出１ｐｇ的衣阿华支原体的ＤＮＡ模板。     

禽呼肠病毒P10、P17非结构蛋白基因的克隆及序列分析

根据GenBank上的禽呼肠病毒(ARV)S1基因序列,设计并合成了一对跨越P10和P17非结构蛋白基因的特异性引物,对13个ARV毒株进行RT-PCR扩增、克隆及序列测定。结果显示,13个ARV毒株的P10蛋白基因ORF全长均为297bp,编码98个氨基酸;P17蛋白基因ORF全长为441bp,编码146个氨基酸。这13个ARV毒株P10、P17蛋白基因核苷酸同源性分别在96.6%~100%和95.2%~99.3%之间,推导的氨基酸同源性分别在98.2%~100%和91.9%~99.0%之间。将这13个ARV毒株与GenBank上其他正呼肠病毒毒株,包括番鸭株(DRV)和飞狐上分离到的内尔森海湾病毒(NelsonBayvirus,NBV)及两个澳洲分离株(ARM-1和SOM-4)进行同源性比较和遗传进化树分析,结果表明,呼肠病毒有地域和种类的差别。     

禽巴氏杆菌病B26—T1200弱毒疫苗的田间免疫试验

用５批禽巴氏杆菌Ｂ２６－Ｔ１２００弱毒疫苗共接种３００万只鸡。现场观察６２４３７只免疫鸡。结果表明，该苗对不同品种鸡安全，只有３．８％免鸡表现为一过性食欲减少，精神稍差，但２天内都能恢复正常，没有引起免疫鸡直接死亡现象。田间免疫１４０天抽取各批苗免疫鸡攻毒，有８０％（１６／２０）鸡得到保护，免疫鸡群在免疫１４０天内没有发生禽巴氏杆菌病。     

新城疫植物油乳剂苗的研究

应用植物油代替矿物油制备ＮＤ油苗，植物油苗时相中含２．５％或５％蜂蜡（ＢＷ，乳化剂），油相和水相比例为４：１，植物油苗免疫来航易感鸡，并采血检测清ＨＩ抗体效价，全部５％ＢＷ植物油苗的ＨＩ抗体和对照矿物苗Ｈ抗体无明显差异（Ｐ〉０．０５），而大多数２．５％ＢＷ植物油苗（２．５％ＢＷ花生油苗除外）及２．５％直溶ＢＷ植物油苗，大多数５％直溶ＢＷ植物疫苗９５％直溶ＢＷ玉米油苗除外）的ＨＩ抗体都明显低于（Ｐ〈     

基于石墨烯电化学免疫传感器检测牛病毒性腹泻病毒

构建一种新型电化学免疫传感器用于检测牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV),为BVDV提供一种新型快速的检测方法。利用甲壳胺(Chi)修饰石墨烯(G)并负载金纳米粒子(AuNP),得到石墨烯-甲壳胺-金纳米粒子(G-Chi-AuNP)纳米复合物用于修饰金电极,然后固定抗BVDV NS3蛋白单克隆抗体,构建BVDV电化学免疫传感器。所构建的电化学免疫传感器对BVDV的检测敏感度为10~(1.2) TCID_(50),特异性试验结果表明,该方法对牛轮状病毒(BRV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛分支杆菌(MB)、牛冠状病毒(BCV)和猪瘟病毒(CSFV)无交叉反应。研究建立的BVDV电化学免疫传感器具有特异性好和灵敏度高的优点,在BVDV快速检测领域具有良好的应用前景。     

牛病毒性腹泻病毒E2结构蛋白的原核表达、纯化及鉴定

根据GenBank中已发表的牛病毒性腹泻病毒囊膜糖蛋白E2基因设计1对特异性引物,以Oregon CV24株为模板,PCR扩增目的片断后与pET-32a原核表达载体连接,转化大肠杆菌Transetta（DE3）感受态细胞,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表达产物,结果表明重组E2蛋白在体外得到较好表达,表达的融合蛋白分子量为57.7 ku。可溶性分析表明重组E2蛋白以包涵体的形式存在,经镍柱His标签蛋白纯化后进行western-blot检测。结果表明：E2重组蛋白均具有反应原性,能与BVDV的阳性血清进行反应。