猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株E11105 N基因的序列分析与原核表达

为研究PRRSV N蛋白的结构、功能以及N蛋白在病毒致病中的作用,以临床分离PRRSV毒株E11105为研究对象,采用Primer Premier 5.0设计一对特异性引物,经RT-PCR扩增出N基因片段,利用相关分子生物学软件对N基因序列进行分析;将N基因克隆连接到pColdⅠ原核表达载体上,经PCR、双酶切鉴定及序列测定后,得到重组质粒pColdⅠ-N,将pColdⅠ-N转入大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,IPTG诱导表达后用SDS-PAGE蛋白电泳及Western blot验证分析。结果显示,分离株E11105N基因与北美洲型代表株VR-2332、欧洲型代表株Lelystad virus(LV)、中国2006年暴发的高致病性PRRSV代表株JXA1、中国代表株CH-1a的核苷酸序列同源性分别为93.3%、34.7%、99.2%、95.4%,氨基酸序列同源性分别为94.4%、15.3%、94.4%、99.2%;系统进化树显示,E11105株N基因与美洲型代表株VR-2332、中国高致病性JXA1毒株的亲缘关系较近;分离株E11105N基因所编码蛋白不存在跨膜区;二级结构主要以α-螺旋和无规则卷曲为主,分别占20.33%和63.41%;预测该蛋白可能存在5个较为明显的B细胞优势抗原表位。SDS-PAGE蛋白电泳结果表明,重组N蛋白主要存在于菌体沉淀中,分子质量约为16.7ku;Western blot结果显示,带His标签的重组表达蛋白能被His单克隆抗体识别,显色后条带约为16.7ku,与SDS-PAGE蛋白电泳的条带大小一致。     

达乌尔黄鼠线粒体Cyt b基因序列特征及其系统进化分析

在甘肃省天祝藏族自治县采集12只达乌尔黄鼠(Spermophilus dauricus),PCR产物直接测序获得Cyt b基因1140bp序列,采用Clustal X 1.84、MEGA 6.0、Dna SP 5.0等生物信息学软件进行了序列特征和系统地位分析。结果显示,达乌尔黄鼠Cyt b基因含116个多态信息位点,群体中多态位点类型有转换、颠换,Cyt b基因T,C,A,G碱基含量分别为33.7%,25.9%,27.6%,12.9%。基于Kimura双参数的遗传距离显示,属内种间大黄鼠(Spermophilus major)与新疆黄鼠(Spermophilus fulvus)间遗传距离最小(0.034),高加索黄鼠(Spermophilus musicus)与达乌尔黄鼠最大(0.172),达乌尔黄鼠群体内遗传距离为0.140,种群分化较大,基于NJ法构建的系统进化树符合传统分类标准,研究为达乌尔黄鼠Cyt b基因标记的种群遗传学应用提供了参考。     

黄羊河种业发展的构想与展望

简述了黄洋河集团种业有限责任公司的发展现状,分析了目前发展中存在的问题,对今后的发展思路进行了探讨,提出了创新人才队伍、加大资金投入、创建精品基地、加快土地流转、健全营销网络等10个方面的建议。     

多元化农业技术推广体系建设浅议

着重分析了当前农业科技推广的背景和存在的问题,并就如何建设多元化农业科技推广服务体系作了深入探析.     

日立EX200—2挖掘机液压系统故障二例

一、故障原因发动机烧机油就是发动机的润滑油经有关机件配合缝隙 ,窜入燃烧室内烧蚀的异常现象。主要有以下原因 :1 .活塞环磨损、断裂 ,使之刮油性能下降 ;2 .活塞环的倒角装反 ,会使机油泵入燃烧室内燃烧 ;3 .环槽磨损过甚 ,活塞环开口未按规定错开 1 80°;4.气门杆与气门导管配合间隙过大 ,气门杆油封漏装、错装或损坏失效。当气缸内部高压气体窜入曲轴箱后 ,迫使机油从曲轴箱与进气岐管相连接的气管进入燃烧室 ;5 .曲轴箱通风不良 ,导致机油被吸入燃烧室 ;6.发动机温度过高 ,造成机油蒸发损失。二、故障检查方法1 .加大油门 ,发动机高…     

利用弯管测量管道流量的理论分析与实验研究

本文从分析弯曲管道内水流运动规律出发，推导了弯管水流流量压差关系的基本公式，并进行了实验验证。     

不透土层上均质土壤中溶质浓度分布的解析解

从溶质扩散方程出发，针对不透水层上均质土壤的液体饱和状态，在顶层含有大量饱和溶质（如养分等）维持着扩散的条件下，进行严密的数学推证，给出均质土壤中溶质浓度分布的解析解，并分析了解的合理性，讨论了解的正确性。此解对土壤改良等类似问题具有实际应用价值，也具有重要理论意义。     

句容市政府发通告对非法拼装机强行报废农机部门因势而上抓协调新上省目录机

一、政府搭台,农机唱戏,把专项整治变为政府行为 句容市的非法拼装机的营运市场,由来已久,在过去交叉管理时代,交通部门管过,公安部门管过,在场(厂)区内安全部门管过,但都未能有效地管住。非法拼装机的存在是一些职能管理部门最头疼的事,农机部门抓住大家想“管”又管不了的     

微机交流采样系统的研制

交流电量测量是水电站自动化中的基本环节。文章作者在湖南省嘉禾县调塘水电站实现微机监控系统中研制了基于8098单片机的交流采样,通过初步调试证明:用微机来直接采集交流电量可使系统结构得以简化,采集数据稳定性及精度均较高,便于现场调试,可以充分利用8098芯片的功能,满足中小型电站测量要求,具有实用价值。     

猪场环境大肠杆菌qnrA和aac(6’)-Ib基因检测

为了解质粒介导的喹诺酮类抗生素耐药基因qnrA、aac(6’)-Ib-cr在猪场环境大肠杆菌的流行分布及变异情况,从贵州省规模养猪场空气、污水、粪便和土壤样本中分离、鉴定大肠杆菌57株,PCR检测qnrA和aac(6’)-Ib基因,测序分析aac(6’)-Ib-cr基因变异体,并用药敏纸片琼脂扩散法测其对喹诺酮类和氨基糖苷类的耐药性。结果表明:57株大肠杆菌均未携带qnrA基因;8株检出aac(6’)-Ib基因,分别来自污水、粪便和土壤样本,且介导对喹诺酮类和氨基糖苷类抗生素的广泛耐药性。E.coli3和E.coli4在第75(A)、76(G)或488位(A)碱基缺失;E.coli5在第222位(A→T)变异,E.coli1、E.coli2、E.coli3、E.coli4、E.coli5、E.coli7和E.coli8在223位(T→C)和454位(G→T)变异;E.coli3、E.coli4在第492位有A、C碱基增添。说明贵州省规模养猪场肠杆菌科细菌qnrA基因携带率较低,但存在aac(6’)-Ib-cr基因。