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优化反向PCR法分离转基因油菜外源T-DNA侧翼序列的研究(英文) 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]优化反向PCR(IPCR)条件分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列。[方法]以单拷贝的转基因油菜FS4为研究材料,用SDS法和改良CTAB法(包括低温操作、增加酚氯仿的抽提次数以及延长低温沉淀时间等)提取转基因油菜总DNA,并进行酶切、纯化、自连接,再使用普通聚合酶与热启动高保真的ExTaqHS聚合酶进行两轮巢式PCR扩增,进行序列对比。油菜数据库比对搜索采用BBSRCBrassicaDB上WU-BLAST2.0工具,拟南芥数据库比对分析采用TAIR数据库中WU-BLAST2.0工具。为验证FS4转基因中T-DNA插入位点的真实性,根据序列比对分析结果在T-DNA插入位点的左右两端分别设计引物FS4-L与FS4-R。分别采用3对引物pS2/FS4-L、pA2/FS4-R、FS4-L/FS4-R同时对T1代转基因FS4杂合体和非转基因对照植株的基因组进行PCR验证。[结果]两轮巢式PCR扩增得到1个大小为4.0kb的片段,其序列与油菜数据库中BH652424和BZ044084两序列同源性分别高达97.8%和63.4%。根据序列比对结果设计特异引物对进行PCR验证的结果,也证明了FS4转基因油菜中T-DNA的确插入在该位点。[结论]优化后的IPCR条件能成功分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列。 相似文献
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木材过热蒸汽干燥过程中的收缩应力(Ⅰ)--径向收缩应力特征 总被引:4,自引:0,他引:4
试验研究了日本柳杉在120—180℃高温高压过热蒸汽条件下,干燥过程中所伴随的收缩应力的发生发展特征,以及温度和相对湿度对径向收缩应力的影响。试验采用夹具束缚试件在干燥过程中的收缩变形,利用应力传感器连续测定饱水试件在高温高压过热蒸汽条件下,从试件达到环境平衡条件开始直到全干状态或明显开裂为止的径向收缩应力。对温度80—180℃,相对湿度0—80%干燥条件下收缩应力的研究结果表明,温度140℃、相对湿度60%以上的条件下,收缩应力得到有效抑制。在温度140℃以上的条件下,即使相对湿度达到100%仍然存在收缩应力,此收缩应力的发生与木材细胞壁组成的结构变化有关。 相似文献
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