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51.
口蹄疫病毒受体猪源β1亚基基因的克隆和分子特征 总被引:1,自引:0,他引:1
首次从FMDV试验感染康复猪的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白β1亚基的基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列以及蛋白结构进行了分析。猪整联蛋白β1亚基基因的编码区含有2 397个核苷酸,编码798个氨基酸残基,含有10个潜在的糖基化位点(NXTX/NXSX),2个表皮生长因子相似结构域和3个半胱氨酸丰富区。其信号肽由20个氨基酸组成,胞外域由708个氨基酸组成,跨膜区由29个氨基酸组成,胞浆域由41个氨基酸组成。猪β1基因与牛、猩猩、猫、犬、人、小鼠和鸡的β1基因的核苷酸序列一致性分别为99.5%,90.0%,91.8%,90.7%,90.2%,86.5%和77.4%,推导的氨基酸序列一致性分别为99.9%,93.9%,97.5%,96.7%,94.2%,92.4%和94.9%。通过生物学软件分析发现β1亚基形成复杂的二、三级结构,其中1~20位、729~757位氨基酸区段疏水性较强,分别是该亚基的信号肽和跨膜区。为进一步深入研究FMDV嗜性、与宿主细胞的相互作用、病毒的侵入机制等问题奠定了基础。 相似文献
52.
口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因的克隆及3AB基因的原核表达 总被引:16,自引:1,他引:15
从感染口蹄疫病毒 (foot- and- m outh disease virus,FMDV)的细胞中提取总 RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT- PCR)获得了长度约为 14 0 0 bp的核酸片段 ,与预期长度相符。扩增产物经克隆后 ,测序证明其含有完整的 3ABC基因。该序列与国外参考序列 0 1K/ 6 6相比 ,同源性在 99%以上。亚克隆 3ABC基因至表达载体 p Tri Ex- 4 Neo中 ,通过序列分析发现 ,克隆到 p Tri Ex- 4 Neo载体上的片段于 3ABC基因 70 9~ 72 5 bp之间有 17bp的缺失 ,碰巧在 3AB基因后形成一终止密码子 ,但 3AB基因的阅读框架完整。选出含有 3AB基因完整阅读框架的阳性克隆 ,用 IPTG诱导表达 ,收集菌液进行 SDS- PAGE电泳、Western blotting分析 ,结果表明 ,3AB基因在大肠杆菌中成功表达 ,其表达产物为分子质量 33.5 ku的融合蛋白 ,并能被口蹄疫病毒阳性血清识别。经薄层扫描分析 ,表达的目的蛋白占总蛋白量的 2 6 %以上。该项研究为应用重组 FMDV非结构蛋白为抗原建立感染和免疫的鉴别诊断方法提供了依据 相似文献
53.
采用常规的病理学诊断方法,对一例羊传染性胸膜肺炎进行了确诊。结果发现该病例具有胸膜肺炎的典型病理变化,呈现纤维素性肺炎和淋巴细胞性间质肺炎,纤维素性物质的渗出和炎性细胞的浸润很明显,肺胸膜增厚,同时在肺间质还可见水肿、出血、血栓和淋巴栓的形成;另外心、肝、肾也均有不同程度的变性,淋巴结呈反应性增生。同时还检验出其病原为支原体。 相似文献
54.
为了研究口蹄疫病毒(FMDV)重组蛋白3D对病毒表位抗原的免疫调节功能,笔者克隆了Asia 1型FM-DV的3D蛋白基因,并实现了重组蛋白在E.coli的表达及纯化.将纯化的重组蛋白3D与重组抗原按1∶2混合,并与等体积的ISA 206佐剂混合,制备免疫原(每毫升含50 μg3D重组蛋白和100 μg重组抗原).按每只豚鼠1 mL剂量经后腿肌肉多点接种250~300 g健康豚鼠5只,免疫后28 d用相同剂量的免疫原进行加强免疫;分别于免疫后0、21、28和42 d采血检测血清中和抗体效价,并进行淋巴细胞增殖试验.于加强免疫后14 d用103的50%豚鼠感染量(GPID50)的Asia1型FMDV进行攻击,评价免疫原效力.同时,设立重组抗原/ISA 2061(每毫升含100 μg重组抗原)、Asia 1型灭活疫苗(1mL)和PBS/ISA 206(1 mL)作为对照.结果表明,3D重组蛋白能显著提高表位重组抗原的中和抗体水平和淋巴细胞的增殖水平(P<0.05),但与灭活疫苗组没有差别(P>0.05);PBS对照组未检测到中和抗体和淋巴细胞增殖.结果提示,重组蛋白3D可显著提高重组表位抗原的免疫潜能,是一种十分重要的免疫调节蛋白,对开发新型疫苗具有重要的意义. 相似文献
55.
以间接免疫组化法(IHA)检测口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)整联蛋白αvβ6在健康绵羊(Ovis aries)不同组织器官中的表达分布。研究结果表明,在舌、鼻、唇、软腭、咽、喉头、气管、肺脏和蹄冠状带组织上皮细胞的细胞膜及细胞质内均出现了棕黄色的特异阳性反应物。结果表明,整联蛋白受体αvβ6受体广泛存在于健康绵羊体内的组织器官中,在呼吸系统以及蹄冠状带等多种FMDV易感组织器官的上皮细胞中表达量较高,且主要在细胞膜和细胞质中表达。 相似文献
56.
57.
58.
59.
[目的]分离微生物发酵菌液中耐热的芽孢杆菌,并分析几种常用消毒技术对环状芽孢杆菌的效果评价。[方法]通过100 ℃热处理30 min的方法从微生物发酵菌液中筛选耐热菌株,采用观察菌落形态与培养性状、革兰染色、生化鉴定及分子生物学鉴定等技术对其进行鉴定,构建系统发育树进行基因序列比对分析,并采用热空气处理、紫外线照射、过氧乙酸消毒技术对其进行消毒处理。[结果]从微生物发酵菌液中分离筛选出1株耐热细菌,经鉴定该菌株为环状芽孢杆菌;比较不同消毒技术对微生态制剂中环状芽孢杆菌的消毒效果发现,120 ℃干热条件下处理菌液60 min,120 ℃湿热条件处理菌液10 min,紫外线(辐射强度达到110 μW/cm2)照射时间超过140 min,过氧乙酸体积分数大于2.75%的情况下,均可有效抑制环状芽孢杆菌生长。[结论]从微生物发酵菌液中成功分离到环状芽孢杆菌,其消毒效果试验为后续安全生产微生态制剂、优化菌种发酵条件提供了参考数据。 相似文献
60.
A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达·纯化及活性检测(英文) 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]表达口蹄疫病毒结构蛋白VP1,并对其进行纯化和相关活性的检测。[方法]以A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1重组质粒pGEM-VP1为模板,用特异性表达引物扩增其编码区,经酶切后与pGEX-4T-1、pPROExHTb等原核表达载体相连,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS表达菌株,经IPTG诱导表达,以实现VP1蛋白的表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达并对2种载体重组菌进行超声裂解,取上清和沉淀电泳,用金属螯合亲合层析法对His-VP1进行纯化。[结果]SDS-PAGE电泳分析显示pPRO-VP1诱导后目的条带为33Ku,与预期结果相符;目的蛋白纯化后,在电泳图片上显示较为清晰的单一条带;His-VP1可与A型口蹄疫病毒豚鼠灭活阳性血清发生特异性的反应。[结论]表达及纯化了具有高特异性的A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1,为深入研究结构蛋白VP1在口蹄疫病毒致病机制中的作用奠定了基础。 相似文献