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在新一代Bt作物以及Bt作物安全性研究方面, Bt毒蛋白在植物特定发育阶段的表达特性渐受关注。本研究构建了植物表达载体pGBI121.A1Bt, 其携带棉花arf1启动子驱动Cry1A基因的表达盒, 启动子后面有一个Ω序列; 对照载体pGBI121.4AB携带P2E35S启动子(增强子加倍的修饰CaMV 35S启动子)驱动Cry1A基因的表达盒, 在启动子后面也有一个Ω序列。利用根癌农杆菌介导法, 将植物表达载体pGBI121.4AB和pGBI121.A1Bt转化烟草, 分别获得44株和42株转基因烟草再生植株。ELISA检测表明, 在pGBI121.A1Bt转基因烟草的蒴果、蒴果壳、花瓣和叶中Cry1A基因的平均表达水平分别为pGBI121.4AB的1.5、1.5、1.4和0.3倍。棉花arf1启动子在烟草中表达, 证明了该启动子在植物生殖器官中具有优势表达特性, 为arf1启动子应用于转基因抗虫棉, 在棉花蕾铃中优势表达Bt毒蛋白, 提高转基因棉花蕾铃抗虫性的新一代抗虫棉研究提供了依据。 相似文献
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双价杀虫基因植物表达载体的构建及其在烟草中的表达 总被引:18,自引:1,他引:17
本文报道了抗虫植物基因工程研究中的新进展-转双价杀虫基因烟草的获得。用PCR方法来自豇豆的胰蛋白酶抑制基因进行了修饰,在基因5‘及3’端分别加入了克隆所需地PstI和SacI限制性酶切位点,去除了原基因5‘端非翻译区序列,并进一步定点突变了基因内存存在的EcoRI位点。 相似文献
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融合杀虫基因植物表达载体的构建及转基因烟草的获得 总被引:6,自引:0,他引:6
构建了人工合成的 GFM Cry IA杀虫基因和经过修饰的 Cp T 基因的融合杀虫基因高效植物表达载体p GBIF4 ABC。通过农杆菌介导的叶盘法转化烟草 ,获得 4 2株卡那霉素抗性植株 ,经棉铃虫杀虫试验表明 ,3株表现高抗 ,14株表现中抗 ,2 5株感虫。对其中 7株烟草植株进行 PCR和 Southern印迹 ,4株烟草基因组中有融合杀虫基因的整合 ,为转基因植株。其中 2株的抗虫性为高抗 ,1株中抗 ,1株不抗 相似文献
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1选育经过湖南省棉花科学研究所以具有自主知识产权的转基因“国抗棉1号”选系为父本,以本省选育的高产、优质、抗病棉花品种选系为母本,1997年从138个抗虫杂交棉组合中筛选出高优势组合湘K-5,1998年进行多点不同处理的田间试验。1999年参加湖南省抗虫棉预备试验,2000-2001年参加国家长江流域区试。2000年进入国家“863”专项计划中的“国家转基因植物研究与产业化开发专项”。2002年参加长江流域棉花生产试验,2001年申报安评生产性试验,2003-2004年完成安全性评价试验,2004年获得湖南、湖北省安全证书,2005年3月通过国家农作物品种审定委… 相似文献
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植物monellin甜蛋白基因的细菌化改造合成及其在大肠杆菌中的表达 总被引:12,自引:0,他引:12
根据西非植物Dioscoreophyllum cumminisii果实中分离到的monellin甜蛋白的氨基酸序列,首次按照细菌优化密码子,人工合成了全长294bp的monellin甜蛋白基因。克隆后序列分析表明,所获得基因与设计相符。构建了该基因的表达载体pGESP9。经42℃诱导表达,发现所合成甜蛋白基因可在大肠杆菌BL21中高效表达,表达量占菌体可溶性蛋白的22.8%。分离纯化monellin,经测定其甜度是相同重量蔗糖的1100倍,且甜味纯正持久。 相似文献
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The Study on the Transformation and Selection of Insect-resistant Cotton Harboring Double-gene 总被引:2,自引:0,他引:2
采用花粉管通道法,将人工合成的GFMCryIA和修饰的CpTI杀虫基因导入棉花优良品种(系)中棉所23、中棉所27、中9409和中90系。经田间选择和室内生物鉴定,已获得了转基因抗虫植株。依据生物鉴定结果,对所获得的抗虫材料进行了PCR分析,结果证明Bt和CpTI基因均整合于相应的抗虫材料染色体基因组中,通过自交选育,双价抗虫基因能够传递至ZGK9708抗虫材料R3代。抗虫鉴定表明,双价抗虫基因能够遗传,后代抗虫性稳定;在获得的R1代植株中,不同转化体对棉铃虫的抗性存在着差异。 相似文献
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将人工合成的、密码子优化后的透明颤菌血红蛋白(VHb)基因(vgbM)与含有融合杀虫基因(GFMcryIA和CPTI)表达载体pGBIF4ABC构建成双价基因植物高效表达载体pGBIF4ABCVHB,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化烟草(Nicotiana tabacum),经PCR及Southernblot检测,证实了双价基因在32株转基因烟草基因组中整合。Westernblot检测证实了vgbM基因的表达,杀虫实验表明,融合杀虫基因表达的毒蛋白具有杀虫活性,转基因烟草平均每株干重高于非转基因烟草植株8%。表明VHb基因和融合杀虫基因烟草在烟草中的表达可使烟草可增产,又具抗虫性。 相似文献
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中国转基因抗虫棉研究又取得新进展 总被引:11,自引:0,他引:11
中国是世界产棉大国,由于虫害的连年发生,给棉花生产造成了巨大的经济损失。为解决制约棉花生产发展的这一重大难题,笔者承担了国家“863”棉花抗虫基因工程研究课题。目前取得的新进展如下。1.转Bt杀虫基因抗虫棉研究根据Bt杀虫蛋白质的氨基酸序列,按照植物... 相似文献
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根据透明颤菌血红蛋白(VHb)的氨基酸序列,按照植物偏爱密码子,对透明颤菌血红蛋白基因(vgb)进行优化改造,同时考虑到可实现分别克隆拼接的酶切位点,设计并合成了22条单链DNA短片段,通过拼接获得了全长450 bp的透明颤菌血红蛋白基因vgbM,并将其克隆至pUC19上,获得重组质粒pGSVHB。利用设计的引物,通过PCR在vgbM基因的5′端引入NcoⅠ位点,将其克隆到原核生物高效表达载体pBV221上,获得质粒pBV221SVHB。转化E.coli. BL21并经热激诱导表达后,在培养物中检测到了约16 kD的VHb蛋白。经CO差示光谱分析测定,该蛋白具有生物活性。为透明颤菌血红蛋白基因vgbM在植物基因工程研究中的应用奠定了基础。 相似文献