家蚕组织蛋白酶L(BmCathepsin L)基因鉴定、表达及其功能分析

【目的】鉴定克隆家蚕组织蛋白酶L基因BmCathepsin L(BmCat L),分析其序列和表达特征。分析家蚕组织蛋白酶L在大肠杆菌诱导下m RNA表达量的变化趋势,为进一步研究家蚕组织蛋白酶L的功能打下基础。【方法】基于家蚕基因组数据库(Silk DB)中序列BGIBMGA006893设计引物,利用RACE技术克隆家蚕组织蛋白酶L基因的cDNA全长序列,通过在线工具对基因结构和蛋白质分子量及等电点进行预测;在NCBI数据库下载其他物种组织蛋白酶L同源序列,利用Clustalx(1.83)和MEGA 6.0软件进行同源比对并构建进化树。运用RT-PCR和qRT-PCR对其时空表达特征进行分析。选取该基因的特异性片段,经PCR扩增,测序验证后将其连接至pET-28载体,转化至Rosseta感受态表达菌株,经IPTG在适宜温度条件下诱导,获得组织蛋白酶L重组蛋白。然后再利用镍离子亲和层析法对该蛋白进行纯化,获得纯度较高的重组蛋白。最后利用大肠杆菌对家蚕血液系统进行攻毒,检测家蚕组织蛋白酶L基因的表达水平。【结果】通过查询家蚕基因组数据库和生物信息学分析得出,家蚕组织蛋白酶L基因定位于家蚕第10号染色体上,基因编号为BGIBMGA006893,nscaf2860。基因开放阅读框全长687 bp,编码228个氨基酸,含有保守的Pept_C1结构域。通过在线网站预测,得出该蛋白酶的分子量为26.132 k D,等电点为4.57。进化分析表明该基因与同为鳞翅目昆虫的草地贪夜蛾和黑脉金斑蝶亲缘关系最为接近。RT-PCR显示该基因集中表达于血细胞,在血液不同龄期也较高表达。用His抗体检测经纯化后的蛋白,最终成功孵育出纯化后的蛋白条带;大肠杆菌个体攻毒免疫试验检测显示,其mRNA表达水平随攻毒时间呈现抛物线式的显著性变化规律,从而揭示出BmCat L与家蚕免疫系统的关联性。【结论】克隆获得家蚕组织蛋白酶L基因的cDNA序列,发现其特异性高表达于血细胞。通过原核表达和蛋白纯化成功获得了该基因的重组蛋白。大肠杆菌的刺激能够显著上调其表达,推测组织蛋白酶L可能参与家蚕免疫反应。     

走向二十一世纪城市园林绿化发展的对策几点意见

城市在国民经济中具有举足轻重的地位和作用。特别是本世纪末实现翻番以后,城市化的进程、规模的发展将会加快,人民的生活方式必将随着温饱型转变为小康水平而变化。应该肯定,在坚持四项基本原则、建设中国特色的社会主义道路上,我国的城市建设和各项基本基础设施,将会日臻完善,环境质量有所好转,城市将根据自己的政治、经济、交通、文化、历史、地理和自然条件等塑造自己的特色和风格;人民的素质     

目前农药生产流通应用中存在问题调查

农药是农业生产中不可缺少的生产资料．也是病虫害防治中不可替代的重要物资。但目前国内在农药生产、流通领域和农民的使用上还存在很多问题。五莲县是山东省粮棉油及林果生产大县。每年都有人畜中毒、作物药害等事故发生。事故小的死亡几只鸡鸭、毁坏几份农作物。事故大的人中毒住院。轻者经济上受损失。重者丧失性命。针对这些问题我们进行了调查研究。并结合我县的现有情况及我们多年的生产实践经验提出相应的对策．以供广大农民和果农朋友们参考。     

谈我市农村养鸡中的用药问题

我市作为浙江省沿海地区传统的养鸡大市，２０００年养鸡数量超过６００万羽。随着养鸡业的迅速发展，养鸡用药出现的问题也越来越多，本文就我市养鸡中使用抗菌药物所出现的问题及对策谈谈一些看法。１不明病因用药鸡类疾病种类繁多，新的鸡病也不断出现，正确的诊断、确认病因是合理用药的第１步。然而，许多专业户在自身知识水平有限的情况下，未作出正确诊断前就匆匆投药；治疗无效时，又频繁地更换药物，结果鸡病不但未能控制，反而增大药费开支，造成较大的经济损失。２０００年４月，我市镇海乡某专业户饲养肉鸡８００羽，３５日龄发…     

四大家鱼养殖方案设计

长期以来，四大家鱼作为水产市场的主导品种，价格一直不算太高。如何才能提高养殖效益呢?笔者认为，搞好养殖，不仅仅跟技术挂钩，跟方案的设计和管理也有着很大的关系。现将笔者设计的养殖四大家鱼亩产值在1000～2000元的方案介绍给大家供参考．     

地黄多糖对创面愈合小鼠脾脏的影响

为了观察地黄多糖对创面愈合小鼠脾脏的影响,试验采用将60只昆明种小白鼠按随机数字表法分为3组:正常对照组、创伤模型组和地黄多糖治疗组;末次给药后1 h,取各组小鼠脾脏称重,计算脾指数;分离单细胞悬液碘化丙啶染色,采用FACSAria流式细胞仪进行检测,ModFit软件进行脾细胞增殖指数分析;并进一步检测脾脏淋巴细胞亚群的比例,60只小鼠,实验结果全部符合要求。结果表明:①与对照组比较,模型组脾指数明显降低;而治疗组脾指数升高。②与对照组比较,模型组脾细胞的增殖指数降低;治疗组可提高小鼠脾细胞的增殖指数。③与对照组比较,模型组CD3+CD4+与CD3+CD8+比值降低;治疗组CD3+CD4+与CD3+CD8+比值升高。说明地黄多糖通过提高创伤小鼠脾指数,促进脾淋巴细胞的增殖,纠正CD4+与CD8+比值,提高创伤小鼠脾脏免疫功能,进而促进创面愈合。     

猴头菇长菇阶段管理要点

正一、调节温度气温超过23℃时,猴头菇子实体发育缓慢,会导致菌柄不断增生,菇体散发成花菜状畸形菇,或不长刺毛的光头菇,超过25℃还会出现菇体萎缩。猴头菇出菇期最佳温度为16～20℃。出菇阶段要特别注意控制温度,若超过规定温度,可采取空间喷雾化水、畦沟灌水增湿、覆盖遮阳网等方法来降低温度。同时要错开通风时间,实行早晚揭膜通风,中午打开罩膜两头,使气流通顺,创造     

乳酸菌在苹果酒中的应用研究进展

通过添加乳酸菌,苹果酒在主发酵后能继续进行二次发酵,即苹果酸-乳酸发酵,该过程具有增加苹果酒风味多样性的作用。论述在苹果酒中添加乳酸菌的菌种要求、发酵条件对乳酸菌诱导苹果酸-乳酸发酵的影响,及乳酸菌与苹果酒感官和风味的关系。     

食管鳞癌组织中nm23的表达及临床意义

目的探讨食管鳞癌组织中nm23的表达及其与各临床病理学参数之间的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测74例食管鳞癌标本及22例癌旁正常黏膜组织中nm23的表达,并分析其与各临床病理参数之间的关系。结果①食管癌组织中nm23的表达显著低于正常组织(P<0.05);②nm23蛋白的表达与食管癌的分化程度、有无淋巴结转移明显相关(P<0.05),而与年龄、性别及浸润深度无关。结论 nm23的表达下降与食管癌的发生密切相关,nm23可作为评价食管癌预后的独立指标。     

“二调”总体蓄积量抽样精度几种抽样方法的比较

文章通过3个地州4县(区)森林资源调查数据的分析,比较系统抽样、分层抽样等群抽样3种抽样方法在总体蓄积量调查中的运用,比较哪种抽样方法在资源分布差异较大的县域抽样精度更高,更适用、更高效。根据实测数据,在山地、坝子交错分布,资源分布不均的县(区),分层抽样法是精度最高、操作可行、节约成本的抽样方法。