鹅肌球蛋白重链1基因MyHC1全长cDNA克隆、序列及胚胎期表达特征分析

肌球蛋白是组成肌原纤维粗丝的主要成分,在肌肉生长发育和运动收缩过程起重要作用。本研究采用反转录PCR和快速扩增cDNA末端(rapid amplification cDNA ends,RACE)方法,从太湖鹅(Anser anser)肌肉中克隆到肌球蛋白重链1基因(myosin heavy chain 1,MyHC1)的全长cDNA,并运用生物信息学的方法对其进行分析,实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)检测MyHC1基因在鹅胚胎期的表达情况。研究结果表明,鹅MyHC1基因(Gen Bank登录号:KM675469)cDNA全长6028 bp,包含5 823 bp的开放性阅读框,57 bp的5’端非编码区和148 bp的3’端非编码区,共编码1 940个氨基酸。经预测,鹅MyHC1基因编码的蛋白质由31 478个原子组成,分子式为C9746H15817N2753O3096S66,相对分子质量为223 kD,等电点为5.62,平均亲水性为-0.786,属于不稳定亲水蛋白。在线预测鹅和鸡(Gallus gallus)的MyHC1蛋白质三维结构呈高度相似,由多螺旋和折叠片聚集成球状头部,并带有长纤维状α-螺旋尾部。鹅MyHC1的编码区(coding sequence,CDS)序列与鸡的同源性最高,为92.86%,与哺乳类同源性多数在84%左右,与两栖类同源性相对较低。鹅与鸡氨基酸同源性最高,为96.45%,与哺乳类的同源性多数在90%左右,与非洲爪蛙(Xenopus laevis)同源性较低,为78.13%。系统进化树分析表明,哺乳动物形成一个大分支,两栖类自成一支,鹅和红原鸡聚成一支,分子进化地位的关系最近,验证了鹅和鸡属于近缘物种。qRT-PCR检测到MyHC1基因在胚胎期第7天开始表达,以后表达量逐渐升高,在15d表达量达到高峰后下降,25d之后逐渐趋于平稳,表明,MyHC1基因在鹅胚胎期mRNA水平的表达量呈先上升再下降的趋势。本研究首次获得了鹅MyHC1的全长cDNA序列、分子的结构特点和表达特征,显示该基因在鹅肌肉生长发育过程起重要作用,为该基因的功能及鹅肉质性状研究提供了基础资料。     

莱芜猪和杜洛克猪背最长肌肌球蛋白重链组成

【目的】比较莱芜猪和杜洛克猪背最长肌肌球蛋白重链（MyHC）Ⅰ、Ⅱa、Ⅱx、Ⅱb的组成差异,探讨莱芜猪肉质优良的机理。【方法】选择体重100 kg的莱芜猪10头和杜洛克猪7头,测定肉质性状,并用实时荧光定量RT-PCR方法检测背最长肌4种MyHC亚型mRNA的表达量,分析品种间差异。【结果】莱芜猪肌肉大理石纹评分和肌内脂肪含量显著高于杜洛克猪,肌肉失水率、剪切值和肌纤维直径显著低于杜洛克猪（P＜0.01）;莱芜猪背最长肌MyHCⅡa、Ⅱx mRNA表达量显著高于杜洛克猪,MyHCⅡb mRNA表达量则显著低于杜洛克猪,而MyHCⅠmRNA表达量无明显变化。【结论】莱芜猪背最长肌氧化型肌纤维比例高于杜洛克猪,酵解型肌纤维比例低于杜洛克猪。表明莱芜猪背最长肌利用脂肪转化为能量的能力较高,即莱芜猪背最长肌氧化代谢功能高于杜洛克猪,这可能与其肌内脂肪含量较高、肉质细嫩多汁相关,这一结果可为通过肌纤维类型的选育提高肉品质的研究工作提供思路。     

猪背最长肌肌纤维类型的发育性变化及品种与营养影响特点

选用荣昌（RC）猪和杜×长×大（DLY）杂交猪为试验动物,采用相对定量RTPCR测定10～120kg体质量时背最长肌中I、2a、2x和2b4种MyHC的基因表达,以探讨猪背最长肌肌纤维类型的发育性变化,并分析品种及营养对它的影响特点。结果表明：（1）10～20始,2个品种的背最长肌肌纤维类型的百分组成发生显著改变,MyHCI和2x型纤维比例显著降低,而2b型纤维比例显著提高;（2）20～120kg,背最长肌肌纤维的变化规律因品种和纤维类型而异,除MyHC2b外,2个品种的MyHCI、2a和2x型肌纤维的发育规律存在一定差异;（3）背最长肌肌纤维类型的百分组成在10～50kg阶段未见品种间显著差异,但在80kg,RC猪的MyHC2b型纤维比例显著低于DLY猪,而2a型纤维比例则正好相反;（4）饲粮营养水平对2个品种猪背最长肌肌纤维类型的百分组成均无显著影响。以上结果提示,2个品种的背最长肌肌纤维类型的发育性规律及组成存在差异,且纤维组成差异主要表现在80kg,RC猪的MyHC2b型纤维比例显著低于DLY猪,可能与其优良肉质相关。     

相对饲养水平对绵羊肌肉组织结构及肌纤维组成相关基因的影响

【目的】提高肉品质是现代肉羊生产的主要目标之一,研究不同饲养水平对阿勒泰羊背最长肌肌肉组织结构及肌纤维组成相关基因的影响,为通过饲养水平调控肉脂型绵羊肉品质,提高生产效益提供参考。【方法】选择出生日龄接近（（3.0±0.5）月龄）、体况良好、体重相近（（19.16±0.54）kg）、臀型一致的阿勒泰羊30只,随机分为3组,自由采食60 d后,分别按照50%（0.25 MJ/W^0.75×d^-1）（NL组）、100%（0.5 MJ/W^0.75×d^-1）（NM组）、150%（0.75 MJ/W^0.75×d^-1）（NH组）的维持代谢能饲喂30 d后屠宰,取背最长肌分别进行苏木精—伊红(H.E.)染色和2%醋酸铀-枸橼酸铅双染色法染色,光学显微镜和透射电镜观察肌肉组织结构,并通过免疫组化法测定肌球蛋白重链I (myosin heavy chain,MyHC I)和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（preoxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ）蛋白表达量。【结果】(1) 阿勒泰羊摄入50%、100%和150%的维持代谢能时,三组试验羊的平均日增重分别为-90.67 kg、13.33 kg和203.00 kg,差异显著(P<0.05);背最长肌肌纤维直径NH组、NM组显著大于NL组（P<0.05）;肌内膜厚度NH组显著小于NL组（P<0.05）;肌束肌纤维数量、肌束纤维面积、肌束膜厚度以及肌纤维面积、肌纤维密度差异不显著（P>0.05）。(2) 饲养水平对肌质网终池面积、脂滴面积以及肌质网终池、肌原纤维、肌质的面积比都有影响,肌质网终池面积和面积比NH组显著大于NM和NL组（P<0.05）,脂滴面积NH组显著大于NL组（P<0.05）;肌质面积比NM组显著大于NH和NL组（P<0.05）;线粒体、糖原三组之间无显著差异（P<0.05）。(3) 饲养水平对肌纤维组成相关基因蛋白的表达有影响,PPARγ的蛋白表达强度、阳性面积和阳性率NL和NM组显著低于NH组（P<0.05）;MyHCⅠ蛋白表达强度随能量摄入水平的增加而增大,但是三组间差异不显著（P>0.05）。【结论】不同饲养水平对阿勒泰羊背最长肌肌肉组织结构和肌纤维类型相关基因蛋白的表达具有显著的影响,在育肥期可通过饲养水平控制肌肉组织结构和肌纤维类型组成,从而按照生产需要调控肉品质。     

瘤背石磺肌球蛋白重链(MyHC)基因的克隆与表达分析

肌球蛋白是动物体内重要的功能性马达蛋白,调控机体的信号传导、肌肉收缩和细胞器运动,为探究肌肉在瘤背石磺(Onchidium struma)由海洋向陆地进化过程中发挥作用的分子机制,实验以石磺科4种贝类转录组数据为基础,采用RACE方法从瘤背石磺肌肉中首次克隆到肌球蛋白重链(Myosin heavy chain,MyHC)基因cDNA的全长并进行组织表达分析。研究结果显示,瘤背石磺MyHC基因cDNA全长为7566 bp,包括5895 bp的开放阅读框,228 bp的5'端非翻译区,1443 bp的3'端非翻译区,共编码1964个氨基酸。预测该基因编码的蛋白质由31713个原子组成,分子式为C_(9765)H_(15897)N_(2849)O_(3150)S_(52),分子量约为225.28 kDa,理论等电点为5.56,N端信号肽具有29个氨基酸长度。瘤背石磺MyHC具有2个保守结构域MYSc_class_Ⅱ和Myosin_tail_l,且亲水性氨基酸集中在Myosin_tail_l区。系统进化树分析显示,瘤背石磺MyHC与光滑双脐螺(Biomphalaria glabrata)MyHC的亲缘关系最近。RT-PCR结果显示,MyHC基因在各个组织中均有表达,腹足和背部皮肤表达量最高,腹部皮肤、口球、肺囊中高表达,肝胰腺、蛋白腺、两性腺中微量表达(P0.05)。MyHC基因在瘤背石磺的主要运动器官腹足中高表达,说明肌肉运动对瘤背石磺湿地环境的两栖适应性具有至关重要的作用。实验结果为今后进一步研究瘤背石磺肌球蛋白重链基因进行原核表达及多克隆抗体的制备奠定了良好基础,更为深入探讨海洋无脊椎动物从海洋向陆地进化的研究提供有参考意义的分子依据。     

Correlation between skeletal muscle fiber type and responses of a taste sensing system in various beef samples

The difference of muscle fiber type composition affects several parameters related to meat quality; however, the relationship between muscle fiber types and meat taste is unclear. To elucidate this relationship, we determined the taste of various beef samples using a taste sensor (INSENT SA402B) and analyzed its correlation with different muscle fiber type composition. We used 22 kinds of beef samples and measured nine tastes, including the relative and change of membrane potential caused by adsorption (CPA) values, using six sensors (GL1, CT0, CA0, AAE, C00, and AE1). The taste sensor analysis indicated positive value outputs for the relative C00, AAE, and GL1 values as well as for the CPA value of AAE, which corresponded to bitterness, umami, sweetness, and richness, respectively. We found significant positive correlations of the myosin heavy chain 1 (MyHC1) composition with umami taste, and with richness. This result suggests that high levels of slow MyHC1 can induce strong umami taste and richness in beef. We expect that our results will contribute to the elucidation of the relationship between muscle fiber types and meat palatability.     

早期限饲对肉鸡肌肉生长及肌纤维类型的影响

采用隔日限饲的方式对1～14日龄三黄肉鸡仔鸡进行早期限饲处理,后恢复自由采食直至63日龄试验结束,以分析早期限饲对肉鸡肌肉生长和肌纤维类型的影响。分别于14和63日龄随机选取对照组和早期限饲组肉仔鸡各20羽,屠宰后采样,记录腓肠肌外侧头重量并采用相对定量RT-PCR的方法检测其不同类型肌纤维肌球蛋白重链mRNA基因表达。结果表明,早期限饲组体重及腓肠肌外侧头重均低于对照组(P<0.05,n=20)。14日龄早期限饲组慢肌及快红肌肌球蛋白重链mRNA表达水平显著高于对照组(分别为P<0.01和P<0.05,n=10),快白肌肌球蛋白重链基因表达显著低于对照组(P<0.05,n=10)。63日龄早期限饲组慢肌肌球蛋白重链mRNA基因表达显著低于对照组(P<0.05,n=10),快红肌和快白肌肌球蛋白重链与对照组相比均无差异(P>0.05,n=10)。结果提示:(1)早期限饲阻碍了肌纤维类型的转化,延缓了肌肉的发育及增重,最终引起整体体重的下降;(2)早期限饲对肌肉肌纤维成分具有持久影响,其影响一直持续到63日龄上市。     

皖南花猪骨骼肌AdpR和MyHCmRNA表达的发育性变化

摘要：为探讨皖南花猪骨骼肌组织中脂联素受体（AdpRl、AdpR2）和不同类型肌球蛋白重链（MyHC）mRNA的发育性变化及性别差异,选择0（出生当天）、30、45、90、180日龄的皖南花猪公母各5头,以B～Actin为内标,采用△△Ct相对定量实时荧光PCR方法对背最长肌和半腱肌中AdpRl、AdpR2、MyHCI、MyHC2a、MyHC2b和My-HC2xmRNA进行定量分析。结果显示,背最长肌和半腱肌AdpRl、AdpR2、MyHCl、MyHC2a、MyHC2b和My—HC2XmRNA的表达都有显著或极显著的发育变化规律（P〈0．05或P〈0．01）。总体上AdpRl、AdpR2、My—HC2a、MyHC2b和MyHC2XmRNA在背最长肌显著或极显著高于半腱肌（P〈0．05或P〈0．01）;MyHClmRNA在背最长肌极显著低于半腱肌（P〈0．01）。半腱肌MyHClmRNA在母猪显著大于公猪（P〈0．05）,而MyHC2amRNA在母猪显著小于公猪（P〈0．05）。背最长肌和半腱肌AdpR2mRNA的表达分别与MyHCl正相关（P〈0．05）,半腱肌AdpRlmRNA的表达与MyHC2x正相关（P〈0．05）。结果表明,皖南花猪骨骼肌组织中AdpR和MyHC的基因表达有特定的发育模式和组织特异性,且有一定性别差异。