京海黄鸡IGF-IR基因外显子3多态性及遗传效应分析

结合PCR-SSCP与PCR-RFLP技术,检测分析了京海黄鸡母鸡IGF-IR基因第3外显子SNPs的特点及其对京海黄鸡母鸡生产性状的遗传效应。结果在该段序列检测到2个点突变:P1(G11 0996C)、P2(C11 1014A),2位点均表现出3种基因型,其中P1位点偏离Hardy-Weinberg平衡状态。最小二乘方差分析表明,P2位点AA型个体初生重显著高于CC、CA型个体(P<0.05)。联合基因型分析表明,GC/AA基因组合型母鸡开产较晚但开产蛋重较高;CC/CA型个体,其12周龄、300日龄体重极显著低于CC/AA型个体(P<0.01),初生重、4周龄、12周龄、16周龄和300日龄体重显著低于其他基因组合型个体(P<0.05);CC/AA型个体12周龄、300日龄体重极显著高于GC/CC、CC/CA型个体(P<0.01),16周龄体重显著高于GC/CC、GC/CA、GC/AA、CC/CA型(P<0.05)。利用基因组合型GC/AA、CC/CA、CC/AA与生产性能间的关联特性指导京海黄鸡,能够为利用分子标记加快京海黄鸡的保种和育种进程提供有益参考。     

Immunolocalization of insulin-like growth factor-I (IGF-I) and its receptors (IGF-IR) in the equine epididymis

Insulin-like growth factor plays a paracrine/autocrine role in regulating testicular function in the stallion, but its presence in the equine epididymis remains unknown. The aim of this study was to test the hypothesis that insulin-like growth factor-I (IGF-I) and IGF-I receptor (IGF-IR) are localized in the caput, corpus, and cauda of the epididymis in an age-dependent manner. Immediately after castration, epididymal tissue was fixed, paraffin-embedded, and processed for immunohistochemistry (IHC). Western blot was also performed using equine epididymal extracts to verify the specificity of the antibodies against IGF-I and IGF-IR. Immunolabeling of IGF-I was observed in the cytoplasm of principal and basal cells in the caput, corpus, and cauda at the pre-pubertal (3–7 months), pubertal (12–18 months), post-pubertal (2–4 years), and adult stages (4.5–8 years). Immunolabeling of IGF-IR was observed in the cytoplasm of principal cells in all regions of the epididymis in each age group. Immunolabeling of IGF-IR was also detected in the cytoplasm of basal cells from animals of all ages. Bands observed by Western blot corresponded to the molecular weights of IGF-I and IGF-IR, ~23 kDa and 95 kDa, respectively. These results suggest that IGF-I might function as an autocrine and/or paracrine factor during the development, maintenance and/or secretions of the stallion epididymis.     

绵羊肌肉IGF-IR基因表达的发育性变化研究

[目的]为绵羊的生长发育研究提供基础资料。[方法]以2、30、60、90、120日龄雄性哈萨克羊和2、30、60、90日龄新疆细毛羊为试验动物,对其肌肉IGF-IR基因进行PCR扩增,并对扩增产物进行电泳检测和序列分析。[结果]绵羊肌肉IGF-IR基因PCR扩增产物在琼脂糖凝胶上出现了287和379 bp2条带,该基因与牛IGF-IR基因序列的同源性为98.59%;在整个研究过程中,哈萨克羊IGF-IRmRNA表达量较低、较稳定,仅在30日龄时略有上升;新疆细毛羊IGF-IRmRNA表达量在2日龄时较高,30日龄时略有下降,60日龄时达到最高峰,90日龄时降到最低水平,且各日龄表达量差异显著;哈萨克羊mRNA表达量在2~60日龄时显著低于新疆细毛羊,而90日龄时显著高于新疆细毛羊。[结论]绵羊肌肉IGF-IR基因表达存在较大的品种间差异。     

草鱼胰岛素样生长因子1受体基因cDNA全序列的克隆及功能

本研究采用cDNA末端快速扩增法(RACE)克隆了草鱼(Ctenopharyngodon idellus)IGF-IR基因全长cDNA序列, 并对该基因在草鱼不同时期胚胎和成鱼不同组织中的表达进行了分析。序列分析表明, 草鱼IGF-IR基因cDNA序列全长5 741 bp, 包括5′端非翻译区822 bp, 3′端非翻译区581 bp, 开放阅读框4 338 bp, 共编码1 445个氨基酸。序列比对结果显示, 草鱼IGF-IR可能属于a型, 该基因编码的氨基酸序列与鲤(Cyprinus carpio)IGF-IRa、斑马鱼(Danio rerio)IGF-IRa和人类(Homo sapiens)IGF-IR的相似性分别为95%、93%和66%, 具有较高的同源性, 表明该基因在长期进化中具有较高的保守性。RT-PCR结果表明, 该基因从16 hpf(hours post fertilization)胚胎期到出苗期都有表达, 在成鱼大部分组织中均有表达。原位杂交结果显示, 草鱼IGF-IR mRNA在不同时期胚胎组织中广泛存在, 其中在脑部、脊索和尾部等生长旺盛组织的细胞中表达量较高。本研究为进一步探索草鱼IGF-IR基因在生长发育信号通路中的作用和育种提供了基础资料。

     

高植物蛋白饲料中不同水平低分子水解鱼蛋白对大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)幼鱼生长及肝脏IGF-I受体表达的影响

本研究利用低分子水解鱼蛋白设计了4组等氮等能的高植物蛋白饲料,研究不同水平低分子水解鱼蛋白对大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)幼鱼[(4.16±0.01)g]生长性能、鱼体组成及肝脏中类胰岛素生长因子Ⅰ受体(Insulin-like growth factor receptor,IGF-IR)表达的影响.水解鱼蛋白分别替代总蛋白的5％(UF-5)、10％(UF-10)、20％(UF-20)的鱼粉,无添加FPH组为对照组(UF-0),用这4种饲料饲喂大菱鲆幼鱼84 d,结果显示,UF-0、UF-5和UF-10组的增重率、特定生长率无显著差异(P＞0.05),但显著高于UF-20组(P＜0.05);UF-0、UF-5组的饲料效率、蛋白质效率和蛋白质沉积率无显著差异(P＞0.05),而显著高于UF-10、UF-20组(P＜0.05);UF-0、UF-5和UF-10三组鱼体粗蛋白、粗脂肪含量无显著差异(P＞0.05),但显著高于UF-20组(P＜0.05);UF-5组必需氨基酸含量及必需氨基酸与非必需氨基酸比值显著高于其他3组(P＜0.05),其他3组间无显著差异(P＞0.05);肝脏中IGF-IR mRNA的表达随着水解鱼蛋白替代水平的增加而升高,且UF-20组与其他3组差异显著(P＜0.05).结果表明,适当添加低水平水解鱼蛋白(UF-5)可促进大菱鲆幼鱼的生长、提高饲料效率及促进肌肉必需氨基酸的积累;高水平添加低分子水解鱼蛋白(UF-20)会抑制其生长及饲料利用等;低分子水解鱼蛋白可提高大菱鲆肝脏中IGF-IR基因的表达量.     

水牛初乳粉对新生仔猪肠道黏膜和肝脏IGF-I及IGF-IR基因表达的影响

水牛初乳富含免疫球蛋白和生长因子等活性物质,对新生哺乳动物具有良好的营养作用.选用新生仔猪为试验对象,分别饲喂水牛初乳粉（SCR组）、水牛常乳粉（SC组）、葡萄糖盐水（PY组）,并以0日龄新生仔猪作为对照（XD组）.研究水牛初乳粉对新生仔猪肠道粘膜及肝脏IGF-I、IGF-IR表达量的影响.结果表明,水牛初乳粉使新生仔猪在最初发育的3d内,肠道粘膜和肝脏中IGF-I基因表达量大幅度增加,IGF-I mRNA/β-actin比值高于XD组且P＜0.01;通过IGF-IR基因表达的研究发现,水牛初乳粉能增加肠粘膜中IGF-IR的表达量,但增幅小于IGF-I表达量;在肝脏中,水牛初乳粉使IGF-IR基因表达量略有降低,但与其它两个试验组相比,降低值最小,PY组次之,SC组降低值最大.水牛初乳能显著促进新生仔猪肠道和肝脏IGF-I基因表达,而对IGF-IR基因表达的影响表现为肠粘膜中表达量增加,脏脏中表达量降低.     

酪蛋白酶解产物对仔猪肠道黏膜IGF-I及其受体基因mRNA水平的影响

研究了酪蛋白酶解产物对新生仔猪肠道黏膜胰岛素样生长因子I（IGF-I）及其受体基因mRNA水平的影响。从五窝仔猪中选出10头仔猪，每窝选2头，分别分至酪蛋白饲喂组（对照组）和酶解酪蛋白饲喂组（试验组）。两组仔猪均以牛乳为基础日粮，并分别加入1．59，6的酪蛋白和酪蛋白酶解液取代10％体积的牛乳，人工饲喂3d后屠宰取样。试验结果表明，试验组仔猪空肠黏膜IGFI受体基因和IGFI基因mRNA水平分别显著（P〈0．05）和极显著（P〈0．01）高于对照组仔猪。说明酪蛋白酶解产物促进肠道发育可能与提高IGFI及其受体基因的mRNA水平有关。     

二花脸猪和大白猪睾丸IGF-I和IGF-IR基因表达发育变化的研究

为了研究生长轴激素对猪繁殖性能发育的影响,随机选取0、3、20、30、90、120、180日龄纯种二花脸公猪和大白公猪各4头,屠宰并采取睾丸组织样,以18S rRNA为内标,用相对定量RT-PCR法研究睾丸IGF-I和IGF-IRmRNA的表达及发育性变化。结果表明,二花脸猪与大白猪睾丸IG-FI mRNA表达的发育模式在30日龄前完全相同,即随着日龄的增加而呈极显著增加(P<0.01);二花脸猪睾丸IG-FI mRNA相对表达量在30~180日龄无显著变化;大白猪睾丸IGF-I mRNA相对表达量在90日龄有所下降,而在120和180日龄又恢复到30日龄水平。二花脸猪睾丸IG-FI mRNA相对表达量显著高于大白猪(P<0.05)。二花脸猪与大白猪睾丸IGF-IR mRNA表达的发育模式不同。二花脸猪睾丸IG-FIR mRNA相对表达量在90~120日龄呈显著下降趋势(P<0.05);大白猪IG-FIR mRNA相对表达量在0日龄较高,随后显著下降(P<0.05),并在观察期内持续保持较低水平。二花脸猪IG-FIR mRNA相对表达量显著高于大白猪(P<0.05)。睾丸IGF-I mRNA和IG-FIR mRNA相对表达丰度呈极显著正相关(r=0.575,P<0.01)。结论:(1)不同品种猪睾丸IGF-I和IG-FIR mRNA表达具有特定的发育模式;(2)猪睾丸中IGF-I和IG-FIR mRNA的协同表达可能对猪繁殖性能的发育有重要调节作用。