菲莱氏温扬球虫(Wenyonella philiplevinei)受精和卵囊壁形成的超微结构研究

本文利用透射电镜研究了寄生于家鸭小肠上皮细胞的菲莱氏温扬球虫的受精和卵囊壁的形成过程。作者在感染后96 h 的样品中发现一例大、小配子已受精;小配子已进入大配子中,大配子胞质中有一根纵切的鞭毛,小配子的核呈流体状,位于大配子核附近。卵囊壁是由成囊颗粒内含物进入合子表面的膜之间沉积成层而形成。成囊颗粒Ⅰ形成外层卵囊壁,成囊颗粒Ⅱ形成内层卵囊壁。沉积于膜之间的成囊颗粒Ⅰ内含物逐渐浓缩,堆积成颗粒状,使卵囊壁外层外表面形成颗粒状突起。成熟的卵囊壁由三层组成:即薄的外周膜、外层和内层。其内的合子原生质还被两层单位膜包裹。     

一株罹病草地贪夜蛾成虫莱氏绿僵菌的分离鉴定及其致病力

从草地贪夜蛾成虫尸体中分离获得一株杀虫真菌。经形态和分子鉴定,确定该虫生真菌为莱氏绿僵菌,并命名为Nr Sfadult202104。生物学特性的研究结果显示,该菌株在SMAY+0.5%草地贪夜蛾蛹粉培养基上生长速率和分生孢子产量最佳;在28℃时菌落生长速率最快,20℃时产孢最为适宜;在全光照条件下该菌株产孢量最高。对草地贪夜蛾成虫和3龄幼虫的致病力测定结果显示,该菌株对草地贪夜蛾雌、雄成虫以及3龄幼虫都具有一定的毒力效果。当孢子浓度为1.0×10⁸孢子/m L时,其感染雌、雄成虫校正死亡率分别为61.2%和58.1%;菌株接种3龄幼虫后,随孢子悬浮液浓度的升高,幼虫的感病死亡率也随之增加,当浓度达到1.0×10⁸孢子/m L时,3龄幼虫的致死中时(LT₅₀)为5.30 d,接种8 d后3龄幼虫的校正死亡率为66.12%。综合以上结果,莱氏绿僵菌Nr Sfadult202104菌株对草地贪夜蛾具有潜在的生防作用,值得深入研究。     

外源糖类和维生素对莱氏绿僵菌Metarhizium rileyi孢子萌发的促进作用

莱氏绿僵菌Metarhizium rileyi是重要的昆虫病原真菌,对鳞翅目害虫有很好的防治效果,但存在杀虫速度慢的缺点。为了提高莱氏绿僵菌孢子的萌发速度,缩短对寄主的致死时间,在孢子悬液中分别添加不同糖类和维生素类,以测定外源营养对莱氏绿僵菌孢子萌发的促进作用。配制含有不同浓度糖和维生素的SMY液体培养基后,接种M.rileyi孢子,25℃、180 r/min振荡培养,每隔24 h,用血球计数板镜检孢子萌发率。结果表明:接种24 h后,以10 g/L甘露糖、5 g/L维生素B_6和5 g/L维生素C对孢子萌发的促进作用较好,孢子萌发率分别为3.50%、3.67%和0.83%;随着培养时间延长,10 g/L甘露糖、5 g/L维生素C依然对孢子萌发有较好的促进作用,5 g/L维生素B_6对孢子萌发的促进作用逐渐降低;进一步测定甘露糖和维生素C对孢子萌发的浓度效应,甘露糖浓度为25.0 g/L时对孢子萌发的促进作用最好,维生素C浓度为0.2 g/L时最好。以上结果表明,对M.rileyi孢子萌发促进效果最好的外源营养是甘露糖和维生素C,最适浓度分别是25.0 g/L和0.2 g/L。     

广州地区一株绿僵菌的鉴定及其对草地贪夜蛾的致病力测定

[目的]寻找草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)致病性昆虫病原真菌,以丰富广东省本地的昆虫病原真菌资源库,为开展草地贪夜蛾微生物防治提供研究材料.[方法]对采自广东省广州市增城区荔城镇玉米地的感菌草地贪夜蛾幼虫体表病原真菌进行微生物常规分离纯化,采用形态学和ITS-rDNA序列分析相结合的方法对病原真菌进行鉴定,通过3种不同培养基(PDA、SMAY和添加草地贪夜蛾蛹壳PDA培养基)测定病原真菌菌落生长速率和产孢量,并采用浸虫法研究病原真菌对草地贪夜蛾2龄幼虫的致病力.[结果]从感菌草地贪夜蛾幼虫上分离获得病原真菌,编号GZSF-1,经鉴定为莱氏绿僵菌(Metarhizium rileyi).培养基类型对菌株GZSF-1菌丝生长和产孢存在显著影响(P<0.05),菌株在各培养基上的生长速率为0.76~2.10 mm/d,产孢量为0.33×106~21.67×106孢子/mL,其中在添加蛹壳PDA培养基上的生长速度最快且可获得最大产孢量.菌株GZSF-1接种草地贪夜蛾2龄幼虫后,随孢子悬浮液浓度的升高,幼虫的感病死亡率增加,当浓度达1×109孢子/mL时,幼虫的致死中时(LT50)为3.030 d,接菌7 d后幼虫的累计校正死亡率达100.00%.应用Probit模型,得到菌株GZSF-1对草地贪夜蛾2龄幼虫的致病力回归方程y=-4.426+0.737x,菌株GZSF-1对草地贪夜蛾2龄幼虫第7 d的致死中浓度(LC50)为1.02×106孢子/mL.[结论]从田间感菌草地贪夜蛾上分离获得的病原真菌菌株GZSF-1为莱氏绿僵菌,该菌株对草地贪夜蛾幼虫具有较好的生防潜力,具有进一步研究的价值.     

农用多抗霉素对不同地域莱氏野村菌的抑制效果

为研究农用多抗霉素对来自山东、安徽、河南的3株莱氏野村菌的抑菌效果。采用生长速率法测定多抗霉素对莱氏野村菌的EC50值,并通过EC50值进行抑菌效果对比。结果表明:多抗霉素对3株莱氏野村菌都有抑制效果,其中对来自山东的莱氏野村菌Nr13的抑制效果最佳,EC50值为0.437 7 mg/m L。     

精氨酸霉形体和莱氏无（需）胆甾醇霉形体在鸡胚细胞内增殖的比较…

将精氨酸霉形体和莱氏无（需）胆甾醇霉形体，分别接种于鸡胚细胞，电镜下观察结果如下：（１）此２种霉形体在形态、细胞内分布、增殖形式和吞噬功能以及对培养细胞的选择性等方面是相同的；（２）此２种霉形体引起培养细胞的病理学过程不同。接种ＭＡ的鸡胚细胞，早期即出现髓模样结构和脂质体等退行性变化，晚期在细胞质内才能见到空泡出现；而接种ＡＬ的鸡胚细胞，早期即可出现细胞质内的空泡化现象，晚期细菌质内才可见到髓膜样     

莱氏野村菌CQNr01对斜纹夜蛾幼虫的侵染研究

以莱氏野村菌Nomuraea riley CQNr01菌株接种斜纹夜蛾Spodoptera litura 2龄和4龄幼虫,观察感病率,并利用荧光染色观察菌株在幼虫离体表皮上的孢子萌发和附着胞产生情况。结果显示,菌株CQNr01孢子悬液浓度为1×10^8、1×10^9孢子·mL^-1时斜纹夜蛾2龄幼虫的累计死亡率分别为86.58%和89.91%,而4龄则只有13.33%和16.67%。菌株CQNr01的孢子能够成功附着在斜纹夜蛾幼虫的离体表皮上,但孢子在2龄幼虫表皮的粘附能力优于4龄幼虫;接种24 h起两个龄期的离体表皮上均开始有孢子萌发现象并有附着胞和芽管产生,并随着接种时间的增长芽管不断伸长,但相同接种时间下孢子在2龄幼虫表皮上的萌发率和附着胞产生数量明显多于4龄幼虫表皮。研究证明菌株CQNr01对斜纹夜蛾高龄和低龄幼虫的致病力差异显著,其差异主要源于斜纹夜蛾幼虫体壁的屏障作用。     

化学杀虫剂和莱氏野村菌的生物相容性研究

[目的]研究10种化学杀虫剂和莱氏野村菌Nomuraea rileyi的相容性。[方法]用营养液萌发法测定了10种常用化学杀虫剂与莱氏野村菌Nomuraea rileyi分生孢子的生物相容性,以24、48和72 h的孢子萌发率作为指标,供试杀虫剂常用浓度及其10倍和100倍稀释液对活孢率的影响。[结果]莱氏野村菌分生孢子在阿维菌素、高效氯氰菊酯、三氟氯氰菊酯和灭扫利常规使用浓度以及10倍和100倍稀释液中的萌发率均在85%以上,有较好的相容性。[结论]在供试的10种化学杀虫剂中阿维菌素、高效氯氰菊酯、三氟氯氰菊酯和灭扫利与该菌的相容性相对较好,其他6种化学杀虫剂较差。     

营养物质对莱氏野村菌MZ060806生长的影响

【目的】了解不同营养物质对莱氏野村菌生长的影响,为其开发利用奠定基础。【方法】以查氏培养基为基础培养基,研究不同碳源(葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、果糖、木糖、甘露醇、可溶性淀粉)、氮源(酵母浸粉、尿素、牛肉蛋白胨、硝酸钠、硝酸钾、硫酸铵、水解酪蛋白、胰蛋白胨、硝酸铵)、维生素(抗坏血酸、硫胺素、烟酸、吡哆醇、核黄素、生物素、泛酸)及不同碳氮比(5∶1,10∶1,15∶1,30∶1,60∶1,120∶1,240∶1,480∶1)对莱氏野村菌MZ060806菌株菌落直径、菌丝干质量和产孢量的影响。【结果】适宜莱氏野村菌MZ060806菌落生长的最佳碳源是蔗糖,氮源是水解酪蛋白,碳氮比是15∶1,维生素是生物素;有利于菌丝生长的最佳碳源是可溶性淀粉,氮源是酵母浸粉,碳氮比是15∶1,维生素是泛酸、核黄素和抗坏血酸;明显促进产孢量增加的最佳碳源是葡萄糖,氮源是水解酪蛋白,碳氮比是15∶1,维生素是硫胺素。【结论】明确了促进莱氏野村菌MZ060806菌落扩展、菌丝生长和产孢的最佳碳源、氮源、维生素种类及碳氮比。     

环境因子对莱氏野村菌MZ060806菌株生长的影响

研究温度、光照、pH值、湿度及紫外线对莱氏野村菌MZ060806菌株菌落直径、孢子萌发率和产孢量的影响.结果表明,温度对该菌的菌落生长、产孢量和孢子萌发率具有相似的效应,其中27 ℃是最适温度,温度过低或过高则抑制生长;分生孢子致死温度为50 ℃、10 min;全光照有利于产孢,而全黑暗有利于菌落扩展;最适菌落生长和孢子萌发的pH值为6～7;最适孢子萌发湿度为70 %,萌发率为92.1 %;该菌对紫外线(25 W、40 cm)较为敏感,当照射时间为2 min,24 h后孢子萌发率为84.4 %,而照射10 min,孢子萌发率为0.