小鼠H-Y单克隆抗体ELISA检测方法的建立

以纯系 BAL B/ c雄性小鼠脾细胞腹腔注射免疫同系雌性小鼠 9次 ,获得的抗血清经雌、雄鼠脾细胞吸收后用于精子细胞毒性试验 ,测得 H- Y抗血清效价为 1/ 16 0。选取免疫应答最好的雌鼠脾细胞与 SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,用精子细胞毒性方法筛选效价较高的细胞株制备腹水 ,建立优化的 EL ISA反应条件。优化后的 EL ISA反应条件为 :抗原4℃过夜 ,加 H- Y抗血清 37℃反应 12 0 m in,加 HRP- Ig G 37℃反应 30 min,加 TMB 2 5℃ 30 min。优化后的 EL ISA与常规 EL ISA比较 ,可以明显降低阴性吸光值 ,检测灵敏度从 1/ 32 0上升为 1/ 12 80     

桑悬浮细胞原生质体培养的研究

采用继代培养三个月后的桑子叶悬浮细胞为材料,进行了原生质体的分离和培养。桑悬浮细胞在纤维素酶、果胶酶、半纤维素酶的混合溶液中,酶解获得产量高、活力强的原生质体。原生质体在K8p(附加6—BA、NAA、2,4—D、LH)液体培养基中,再生细胞经多次分裂,得到肉眼可见的小愈伤组织。再通过增殖继代培养,获得浅黄色、具有明显颗粒结构的愈伤组织,转至各种激素含量的MSB固体培养基中,尚未获得绿苗分化。     

生长抑素(SS)与硫氧还原蛋白(Thioredoxin)相融合生成的2种基因工程化融合蛋白SS-N/X和SS-N/S的表达特性

对基因工程化生长抑素（somatostatin,SS)-硫氧还原蛋白（Thioredoxin)融合蛋白SS－N／X和SS－N／S的表达产量、水溶性、Triton X-100对SS融合蛋白水溶性的影响、包涵体的溶解和复性特点以及SS的抗原性与免疫原性等特性进行了研究。结果显示，在30℃的低温下用IPTG诱导表达，SS－N／X融合蛋白主要以可溶性形式存在，占75．8％，色涵体仅占24．2％；而SS－N／S融合蛋白则主要以包涵体的形式存在，占81．1％，可溶性蛋白仅占18．9％；32C载体（pEG-32C)蛋白则居二者之间，可溶性蛋白与包涵体大约等比例出现。SS－N／S在低温下诱导可超量表达SS融合蛋白，其表达量约占菌体总蛋白的40．94％。0．5％ Triton X-100对融合蛋白的不溶性有非常显著的影响，几乎可使所有的SS－N／X融合蛋白和大部分SS－N／S融合蛋白及32C硫氧还原蛋白变成水溶性的。32C硫氧还原蛋白包涵体在尿素中的溶解度明显高于SS－N／S包涵体，2mol/L尿素可使近一半的32C硫氧还原蛋白包涵体溶解，而SS－N／S包涵体只有27．5％溶解；但在5mol/L尿素时，两者均可基本全部变为可溶性的。在SS融合蛋白包涵体溶解时加入还原剂二硫苏糖醇，可明显降低SS的抗原性。SS融合蛋白（水溶性融合蛋白和复性后的包涵体）具有良好的SS抗原性和免疫原性。由SS融合蛋白与弗氏不完全佐剂制成试验用疫苗，免疫BALB／c小鼠、仔猪和羔羊等动物，可显著提高免疫动物的增重。     

草莓悬浮细胞原生质体培养再生愈伤组织

以草毒品种宝交早生的花药愈伤组织建立的悬浮细胞系为试材,对原生质体分离和再生进行研究。结果表明:酶液的渗透压、浓度和配比对悬浮细胞原生质体产量和活力有重要的影响。悬浮细胞在CPW+1.0％ Cellulase R-10+0.5 Macerozyme R-10+0.05％Pectolyase Y-23+0.6mol/L甘露醇+0.5％PVP的酶液中酶解12h,原生质体产量和活力最高,分别达16.35×10~6/g和84.6％。采用液体浅层培养法对原生质体进行培养获得了再生愈伤组织。     

茶薪菇原生质体制备及诱变的研究

对茶薪菇原生质体的分离及再生进行研究 ,结果表明以溶壁酶的去壁效果最好 ,不同酶组合可提高去壁效果 ,酶解液在 2 0 %时原生质体释放量很高。酶解适宜温度为 30℃ ,培养 4～ 5d的菌丝酶解 3h释放的原生质体最多。以甘露醇作为渗透压稳定剂 ,原生质体的释放量及再生率均较高 ,再生率达到 5 %左右 ,经紫外线照射 2 0s,致死率即达 70 %以上     

家鸡Leptin成熟肽cDNA的克隆、重组蛋白表达及纯化

从 18周龄鸡卵巢组织中抽提总 RNA,使用六聚体随机引物反转录后 ,用鸡 L eptin(瘦素 )特异性引物扩增出鸡L eptin编码区第 5 2～ 4 6 0 bp的长度为 4 0 9bp的 c DNA片段。根据鸡 L eptin的 3′端第 4 6 0～ 4 92 bp序列设计了 3条部分相互重叠并且顺序串联延伸的下游反义引物 ,并在最后 1条引物 3′端连接上 Eco R 切点 ;在以上用于反转录扩增的 5′端引物的 5′端连接一 Bam H 切点。用该 5′端引物分别与 3个 3′端引物配对 ,利用反转录扩增出的 4 0 9bp的L eptin c DNA片段作为第 1模板进行扩增 ,扩增产物再作为模板与下一引物对再次扩增。经 3次扩增得到编码鸡 L ep-tin成熟肽的全长 4 5 1bp的 c DNA序列。将该 4 5 1bp的 L eptin c DNA序列经 Bam H 和 Eco R 双酶切后 ,克隆入表达质粒 p RSET A的 Bam H 和 Eco R 两酶切位点之间 ,构建成表达质粒 p L ep- SCAU。转化有重组表达质粒 p L ep-SCAU的大肠杆菌 BL 2 1(DE3)在 L B培养基中培养后 ,经 IPTG诱导表达出相对分子质量为 2 0 10 0的鸡 L eptin融合蛋白和少量 4 0 2 0 0的 L eptin融合蛋白。L eptin融合蛋白的表达在 IPTG浓度为 0 .0 5 mmol/ L 时达到最高 ,占总菌体蛋白的 32 .6 %。用 Ni- NTA凝胶从 7L 发酵培养菌裂解液中纯化出 180 m g左右     

基于分数阶微分视频融合的森林烟火检测算法

森林火灾检测是国内外林业应用研究的重要课题之一。及时准确地检测到森林火灾，对于森林健康及环境安全意义重大。现有的利用视频技术检测森林火灾的方法大多针对单一波段，如可见光波段或红外波段的视频信息进行分析，然而在实际应用过程中，由于森林环境复杂，基于单一波段视频信息检测火灾的结果欠佳。现阶段，基于多个波段的森林火灾检测方法非常少。本文综合利用红外及可见光视频特征，提出了一种基于分数阶微分视频融合的森林烟火检测算法，将分数阶微分理论引入红外视频和可见光视频融合中，利用分数阶微分算子对两个波段视频进行融合，然后利用背景去除法检测融合视频中的异常帧，且对异常帧图像及其与背景帧的差分图像分别进行图像分割，最终得到检测出的森林烟火区域。采用空间频率、平均梯度、森林火灾检测准确率和森林火灾检测时间误差度4个测度对本文算法和基于区域能量融合算法、基于窗口方差融合算法、基于HSI变换融合算法进行定量分析和比较。结果表明，本文算法的融合视频的融合效果最佳，并且森林火灾检测准确率和森林火灾检测时间误差均明显优于其他3种算法，说明本文提出的算法具有较好的有效性和准确性，为森林火灾检测提供了有利的新途径。      

三种融合标签对大熊猫轮状病毒结构蛋白VP6-VP7可溶性表达的影响

大熊猫轮状病毒(giant panda rotavirus,GPRV)是引起幼龄大熊猫腹泻的主要病原,对圈养大熊猫产生了较大的危害。轮状病毒结构蛋白VP6是一种载体蛋白,可介导黏膜免疫反应。VP7是轮状病毒结构蛋白中主要的中和抗原。因此,VP6-VP7的融合表达作为候选抗原对该病的防治具有重要的意义。传统大肠埃希菌原核表达存在表达量低、可溶性差以及纯度低等弊端。本研究使用醛缩酶(EDA)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、麦芽糖结合蛋白(MBP)3种融合标签,以实现获得表达量高和纯度高的GPRV-VP6-VP7重组表达蛋白。将扩增的VP6、VP7基因片段利用同源重组酶构建到含3种融合标签的表达载体pET21b上,将重组质粒转化至大肠埃希菌Rosetta(DE3)感受态细胞中进行低温诱导表达。用Ni-柱亲和层析法纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Image J分析蛋白表达量和可溶性,Western blot分析得到表达的重组表达蛋白正确且具有蛋白活性。实验结果证明,EDA标签能显著促进VP6-VP7蛋白的原核可溶性表达,提高VP6-VP7蛋白表达量。     

被征地农民的群体分化与社区融合——以重庆为例

在对重庆市进行实地调研的基础上，从群体、社区以及社会工作者3个方面来探寻影响被征地农民社区融合的原因，在分析不同类型被征地农民社区融合的需求的基础上，探讨不同层次的社会工作介入被征地农民社区融合的路径。