雏鸡不同组织TLR1、TLR2、TLR4、TLR5和TLR15 mRNA转录水平相对定量研究

参考GenBank登录的ChTLRs基因序列设计实时定量PCR特异性引物,建立检测鸡Toll样受体(ChTLR)mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法,分析ChTLR1、ChTLR2、ChTLR4、ChTLR5和ChTLR15在雏鸡不同器官组织中的转录水平。结果显示5种ChTLRs在脾脏、法氏囊、胸腺和各段肠道组织中均有转录。其中,ChTLR1 mRNA在法氏囊、肾脏和盲肠组织中转录水平较高;ChTLR2 mRNA在脾脏、法氏囊和肝脏等组织中转录水平较高,在肾脏、肺脏和皮肤未检测到转录;ChTLR4 mRNA在所检测组织中转录水平差异较小,在脾脏、十二指肠和胸腺转录水平较高;ChTLR5 mRNA在肾脏、脾脏和空肠中的转录水平较高;ChTLR15 mRNA在法氏囊中转录水平最高,其次为脾脏和盲肠。本研究建立了检测ChTLRs mRNA在不同器官组织中表达水平的实时定量PCR方法,ChTLRs mRNA在雏鸡各器官组织中转录水平差异较大,可能与雏鸡各器官组织对病原的识别和抵抗能力有关。     

金定鸭不同组织和血液中TLR1、TLR2、TLR4、TLR5的表达差异分析

试验旨在研究不同Toll样受体（Toll-like receptor,TLR）在鸭不同组织中的表达情况,选取300日龄雄性金定鸭10只,解剖后采集其血液及脾脏、肝脏、睾丸、肺脏、下丘脑、垂体、皮肤、腿肌、心脏、肾脏、胸肌、盲肠、小肠、胸腺,采用Primer Premier 5.0软件设计特异性引物,并用实时荧光定量PCR法检测TLR1、TLR2、TLR4、TLR5在不同组织中的相对表达情况。结果显示,各基因扩增产物的熔解曲线均有一特异性的单峰,无其他杂峰,说明引物的特异性较强,可以准确定量。4种目的基因与内参基因的扩增效率在101.4%~105.0%之间,均接近100%,相关系数（R²）为0.98~1.000。TLR1、TLR2、TLR4、TLR5 4种TLRs在金定鸭不同组织和血液中均有表达,但每种TLR受体在各组织中表达水平略有差异,其中TLR1在下丘脑中表达量最低,在胸肌中最高;TLR2在小肠中的表达量最低,在肺脏中最高;TLR4、TLR5在睾丸中的表达量最低,在皮肤中最高。以上结果说明,鸭TLRs在多种组织中能够广泛表达,本试验结果可为TLRs在鸭源感染过程中的作用机理研究提供科学依据。     

蒙古马不同组织器官TLR1、TLR2、TLR4和TLR6 mRNA转录水平研究

根据GenBank中马Toll样受体基因序列设计特异性引物,建立检测马Toll样受体（TLRs）mRNA转录水平的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,检测TLR4、TLR2、TLR1和TLR6在蒙古马不同组织器官中的转录水平。4种TLRs在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、十二指肠、空肠、盲肠和骨髓中均有转录。其中,TLR4mRNA除在空肠和肝脏外,在其他组织器官中的表达水平均高于TLR2、TLR1、TLR6。免疫器官中,TLR4、TLR1mRNA在骨髓中表达量高于脾脏,而TLR2、TLR6mRNA在脾脏中表达量高于骨髓。各肠段,TLR4、TLR2、TLR1、TLR6mRNA表达水平之间在空肠的差异不是很大,而在十二指肠和盲肠中差异很大。结果表明,TLRs mRNA在马各组织器官转录水平差异较大,可能与其对病原体的识别和抵抗能力有关。     

中国蒙古马不同组织器官TLR3、TLR7、TLR8和TLR9 mRNA转录水平研究

为探讨中国蒙古马不同组织中TLR3、TLR7、TLR8和TLR9的表达情况,采用SYBR GreenⅠ荧光定量RTPCR方法对心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、十二指肠、空肠、盲肠和骨髓中TLRs基因的转录水平进行测定。结果表明:4种TLRs基因在被检测的10个组织中均有转录。其中,TLR3在肾脏中的表达量最高,在脾脏中的表达量最低;与TLR3相反,TLR7、TLR8和TLR9均在脾脏中的表达量最高,TLR7和TLR8在胃中的表达量最低,TLR9在空肠中的表达量最低。在不同免疫器官中,TLR7、TLR8和TLR9在脾脏中的表达量高于骨髓,而TLR3在骨髓中的表达量高于脾脏。在各肠段中,TLR3、TLR7、TLR8和TLR9在盲肠中的表达量高于十二指肠和空肠;并且均是TLR3和TLR8的表达量高于TLR7和TLR9的表达量。综上所述,TLRs基因mRNA转录水平在蒙古马各组织器官中差异较大,可能与其对病原体的识别和抵抗能力有关。     

食物中毒马不同组织器官中TLR3、TLR7、TLR8和TLR9 mRNA转录水平的研究

为了探讨食物中毒马不同组织器官中TLR3、TLR7、TLR8和TLR9基因的表达情况,试验采用SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法检测食物中毒马和健康马(对照组)胃、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠、盲肠和骨髓中TLRs基因的转录水平。结果表明:在食物中毒马胃、肝脏和十二指肠中的TLR3、TLR7、TLR8、TLR9基因相对表达量均显著高于对照组(P0.05),在所检测的食物中毒马的9个组织器官中(除肺脏外)TLR9基因表达量与对照组相比差异显著(P0.05)。说明食物中毒可引起马胃、肝脏和十二指肠的变化,推测TLR9基因在机体抵御食物中毒中发挥着重要作用。     

鸡TLR3、TLR4和TLR21单核苷酸多态性的生物信息分析

试验旨在筛选鸡TLR3、TLR4和TLR21基因中的功能性nsSNPs。利用SIFT、PolyPhen-2、PANTHER、PMut和PROVEAN五种软件方法分析引起的氨基酸替换nsSNPs是否可能影响基因的功能。进一步对三个基因氨基酸序列进行翻译后修饰位点及进化位点保守性的预测,使用easymodeller和SWISS-MODEL构建了其野生型及突变型蛋白质的空间结构,并计算突变前后的RMSD。结果表明:TLR3的K240T、T767S、D849N,TLR4的F427V、K714R和TLR21的T455A、Y553H、L602P、W926S可能严重影响蛋白质的结构功能。     

雏鸡不同组织TLR3、TLR7和TLR21 mRNA转录水平研究

参考GenBank登录的ChTLRs基因序列设计实时定量PCR特异性引物,建立检测鸡T011样受体（ChTLR）mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法,分析ChTLR3、ChTLR7和ChTLR21在雏鸡不同器官组织中的转录水平。3种ChTLRs在脾脏、法氏囊、胸腺和各段肠道组织中均有转录。其中,ChTLR3 mRNA在肾脏、胸腺、盲肠、空肠、肝脏和十二指肠转录水平较高,在皮肤中未检测到转录;chTLR7 mRNA在脾脏、肾脏、盲肠、胸腺和十二指肠转录水平较高,在肝脏和皮肤中转录水平很低;ChTLR21 mRNA在所检测组织中均有转录,其中在脾脏转录水平最高,其次为法氏囊、胸腺和十二指肠。结果表明,ChTLRs mRNA在雏鸡各器官组织中转录水平差异较大,可能与雏鸡各器官组织对病原的识别和抵抗能力有关。     

兔TLR2、TLR3和TLR4部分cDNA序列的克隆及分析

用RT-PCR技术从日本大耳白兔脾脏组织克隆出兔Toll样受体2、3、4基因（拟命名为RTLR2、R TLR3和RTLR4）的cDNA序列并进行测序,获得的3个Toll样受体基因序列长分别为128、150和139bp,并将其测序结果与GenBank中登录的穴兔（Oryctolagus cuniculus）的Toils核苷酸序列进行比对,发现本次克隆到的RTLR2与穴兔TLR2的基因序列（NM_001082781）相似性为99％,而RTLR3与TLR3（NM_001082219）和RTLR4与TLR4（NM_001082732）相似性均为100％。Protein Blast同源性结果显示,RTLR2、RTLR3和RTLR4的氨基酸序列与穴兔TLR2、TLR3和TLR4的同源性皆为100％,与马、人、野猪等其他8种动物TLRs的比较,与RTLR2同源性最高的是马的80％,其他的只有61％～78％;与RTLR3同源性最高是马和野猪的97％,其他也较高达93％～95％;而RTLR4与其他8种动物的同源性均较低75％以下。结果表明：RTLR2、RTLR3和RTLR4分别为免TLR2、TLR3和TLR4的部分cDNA基因序列;TLRs在不同物种的进化过程中存在种属特异性。     

肠炎沙门菌感染对济宁百日鸡盲肠TLR2、TLR4、NOD1、NALP3基因表达的影响

为分析肠炎沙门菌感染后不同时间点济宁百日鸡盲肠TLR2、TLR4、NOD1和NALP3基因表达的变化规律,试验选用2日龄肠炎沙门菌阴性济宁百日鸡为试验动物,接种肠炎沙门菌,应用荧光定量PCR分别检测接种后第1、3、7、14、21、28和35天试验组与对照组盲肠组织TLR2、TLR4、NOD1、NALP3 4个基因的表达变化。结果:肠炎沙门菌感染后第3、7、21、28和35天,试验组和对照组盲肠TLR2的表达量差异显著(P0.05),除感染后第3天TLR2的表达量显著降低外,其他各时间点TLR2的表达量均显著升高(P0.05);感染后第3、21、28天TLR4的表达量显著升高,分别为对照组的1.79、1.52、1.21倍(P0.05);感染后第7天,试验组NOD1和NALP3的表达量均显著低于对照组,分别为对照组的0.37和0.61倍(P0.05);感染后第21天,试验组NALP3基因的表达量显著升高,为对照组的1.27倍(P0.05)。研究结果表明:TLRs和NLRs基因在肠炎沙门菌感染后被激活,且表现出协同调控作用,这种协同调控在感染后第7天最为明显。     

产后1周胎衣不下奶牛子宫内膜TLR2、TLR4和CD14的mRNA表达变化

为了探讨奶牛胎衣不下对子宫内膜先天免疫相关基因表达的影响,在产后第1天和第7天,对9头胎衣不下的奶牛和10头正常分娩的奶牛进行子宫内膜活检;每周收集子宫内容物进行需氧菌分离培养;在产后第1天和第7天,检测所有奶牛子宫内膜TLR1/6、TLR2、TLR4、TLR5、TLR9、NOD1、NOD2、CD14和MD2的基因表达。结果表明:无论奶牛有无胎衣不下,在产后21 d内大肠杆菌是子宫内容物中最常见的细菌;产后第7天与第1天相比,胎衣不下的奶牛子宫内膜TLR2、TLR4和CD14的基因表达水平明显降低(P0.05),而正常分娩的奶牛在相同时间段上述受体基因表达无明显差异,说明产后1周胎衣不下的奶牛子宫内膜TLR2、TLR4和CD14的基因表达减少可能与子宫感染炎症有关。     

猪感染肺炎支原体后肺组织TLR2、TLR4及促炎症因子TNF-α、IL-1β基因表达的变化

<正>Toll样受体(TLR)作为一种重要的模式识别受体,在动物的天然免疫中发挥重要作用,是机体抵抗感染的第1道屏障。该研究通过建立猪肺炎支原体感染模型,探讨猪感染肺炎支原体后肺组织TLR2、TLR4及促炎症因子TNF-α、IL-1β mRNA的表达及意义。选取80日龄无注射气喘病疫苗苏钟猪14头,随机分为攻毒     

民猪、长白猪TLR5基因变异的比较分析

为了进一步研究Toll样受体5(TLR5)基因与疾病抗性/易感性的关系,试验以抗病性具有明显差异的民猪和长白猪为试验材料,采用PCR产物直接测序的方法,比较分析TLR5基因的变异情况。结果表明:猪TLR5 c.834 T>G点突变在2个品种间的分布具有极显著差异(P<0.01),民猪以G为优势等位基因,长白猪以T为优势等位基因,在该群体中没有发现GG纯合体。TLR5 c.834 T>G点突变很可能与民猪抗病性强有关。     

不同鸡种TLR1和TLR2基因SNP检测分析

本研究利用DNA直接测序技术对9个地方鸡种(北京油鸡、白耳鸡、溧阳鸡、河南斗鸡、泰和乌骨鸡、大骨鸡、狼山鸡、仙居鸡、茶花鸡)和1个引进品种(白来航蛋鸡)鸡Toll样受体1(chTLR1-1、chTLR1-2)、Toll样受体2(chTLR2-1、chTLR2-2)基因的全部外显子、部分内含子及5′调控区的序列进行单核苷酸多态性(SNPs)检测。结果共发现了27个SNP位点,96%的SNPs位于编码区,其中33%的SNPs为错义突变。chTLR2-1基因在所有品种中均未发现SNP位点,chTLR1-1、chTLR1-2和chTLR2-2基因在9个地方品种中突变位点较为丰富,且不同品种间SNP数量差别较大,但在白来航蛋鸡中均未发现SNPs位点。本试验为进一步开展地方鸡种chTLR1和chTLR2基因多态性与抗病研究提供了理论依据。     

鸭TLR2基因的克隆、序列分析及其结构预测

参考鸡Toll样受体2(TLR2)基因序列设计6对特异引物,采用PC R方法从鸭基因组中扩增得到鸭TLR2基因全序列。结果表明:克隆的鸭TLR2基因编码区全长2 382 bp,由1个开放阅读框组成,编码793个氨基酸,其中亮氨酸为14.2%,含有24个氨基酸的信号肽序列,属于I型跨膜受体,具有富含亮氨酸的重复序列(LR R)和Toll/IL-1R(TIR)同源区结构域;与鸡、人、猪、鼠和牛TLR2基因的同源性依次为80.0%、63.5%、61.4%、60.0%和58.4%,表明该基因是一个比较保守的基因。     

家禽TLR5的研究进展

Toll样受体(TLRs)是最早发现的哺乳动物天然免疫模式识别受体家族,也是研究最广泛的模式识别受体(PRRs),其研究极大地丰富了免疫生物学内涵。TLRs和其他PRRs识别病原相关分子模式(PAMPs),可以激活细胞信号通路,产生各种炎症细胞因子,趋化因子和Ⅰ型干扰素(IFNs),从而迅速触发一系列抗微生物免疫反应。文章主要讨论家禽TLR5基本结构特点、信号通路及其抗感染作用,以为家禽TLR5的深入研究提供新的科学线索。     

兔TLR2 TLR4部分cDNA克隆及其在组织中的分布

从日本大耳白兔的脾脏组织克隆出Toll样受体基因2(RTLR2)和Toll样受体基因4(RTLR4),并对其在兔的17种组织中的表达分布进行了检测。RTLR2和RTLR4核苷酸序列与GenBank中登载的穴兔(Oryctolagus cuniculus)TLR2序列(NM_001082781)、TLR4序列(NM_001082781)的相似性分别为99%和100%;推导氨基酸序列的同源性比对发现,与人、马、野猪、猫、猩猩、牛、绵羊和鼠等8种动物相比,RTLR2与马的同源性最高,为80%,与鼠最低,为61%,而RTLR4与这几种动物的同源性在62%~75%之间;兔的胸腺、盲肠、睾丸等15种组织中均检测到TLR2和TLR4 mRNA的转录产物,但骨骼中未发现TLR2和TLR4,TLR4在皮肤中也未见表达。     

不同温度条件下斑马鱼精巢TLR2和TLR4的表达分布

斑马鱼是重要的新型模式动物,在动物免疫、生殖、畜牧兽医等生命科学领域具有重要研究价值。本文应用免疫组织化学反应,探究低温(16℃)和常温(30℃)条件下,斑马鱼精巢TLR2和TLR4的表达分布特征。结果显示,斑马鱼精巢为成对的狭长器官,生精小管的生殖上皮由生精细胞和支持细胞组成,它们构成不同的精囊,每个精囊的精子发生过程为同步进行。低温条件下精巢生精小管边缘的间质及支持细胞TLR2阳性反应强烈;精原细胞、间质细胞与支持细胞中呈现TLR4阳性反应。但常温下斑马鱼精巢TLR2/4阳性反应微弱。从细胞形态学角度表明,低温能够诱导斑马鱼精巢及其细胞表达TLR2和TLR4,进而可能增强斑马鱼精巢的固有免疫力。     

TLR4与脂代谢的研究进展

Toll样受体4(TLR4)是人类最早发现的一种Toll样受体相关蛋白,普遍分布于多种免疫细胞的膜表面,通过识别脂多糖等外源性配体激活My D88依赖性和非依赖性信号通路,参与炎症反应和免疫应答。近年来,诸多学者对TLR4信号通路介导的炎症反应、脂代谢调控及其相互作用关系进行了系统研究,相关研究表明,TLR4除了在先天性免疫过程中扮演重要角色外,还参与着机体脂代谢的调节过程。文章主要通过阐述TLR4的结构、分布、配体、信号通路及其与脂代谢的相互关系来介绍TLR4的最新研究进展。     

猪TLR3基因变异位点分析

为了研究TLR3基因突变对介导机体天然免疫和获得性免疫能力的影响及各等位基因在猪群体间的分布规律,试验采用PCR产物克隆测序的方法在TLR3基因外显子3上寻找多态位点,并利用PCR-SSCP和PCR-RFLP方法对选定的突变位点进行群体遗传学分析.结果表明:在所检测出的8个SNPs中,有A1116T和C1647T 2个...