42种常见中药对猪链球菌的体外抑菌试验

为了观察中药对猪链球菌的体外抑菌效果,试验将所选的42种常见中药按照常规法制备水提物,采用平板打孔法和试管二倍稀释法测定中药水提物对猪链球菌的体外抑菌作用。结果表明:在42种中药中有29种中药对猪链球菌有一定的抑菌作用,其中黄连水提物的抗菌活性最强,MIC为0.98 mg/m L;其次是黄柏、黄芩、丹参,MIC为3.91 mg/m L;有13种中药对猪链球菌无抑菌作用。说明不同中药对猪链球菌有不同的抑菌作用,其中黄连、黄柏、黄芩等抗菌活性较强的中药可进一步用于研究。     

5种中药提取物及其组合对嗜水气单胞菌的体外抑制作用

试验旨在探讨大黄、诃子、五倍子、黄连、黄芩5种中药及其组合对嗜水气单胞菌的体外抑制作用。试验测定了5种中药的水提物和醇提物对3株嗜水气单胞菌的抑菌圈、最低抑菌浓度（MIC）、最低杀菌浓度（MBC）及对嗜水气单胞菌生长的影响，采用棋盘交叉法测定了5种中药联合抑菌作用。结果显示，大黄和黄芩醇提物的抑菌圈显著高于其水提物（P<0.05），诃子和黄连水提物的抑菌圈显著高于其醇提物（P<0.05），五倍子水提物和醇提物抑菌圈大小相近。五倍子抗菌作用最强，其水提物和醇提物MIC为7.81～15.63 g/L，大黄醇提物和诃子水提物抗菌作用次之，MIC均为15.63～31.25 g/L。选择抑菌作用更强的提取物两两组合，五倍子水提物与其他4种中药提取物组合、大黄醇提物与黄连水提物组合均为协同作用；黄连水提物与黄芩醇提物组合为相加作用；大黄醇提物与黄芩醇提物、诃子水提物与黄连水提物组合均为无关作用；诃子水提物与黄芩醇提物组合为拮抗作用。研究表明，5种中药对嗜水气单胞菌均具有抑制作用，五倍子作用最强，五倍子水提物与其他4种中药提取物两两组合、黄连水提物与黄芩醇提物组合均可增强抗菌活性。     

6种中药醇和水提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抗菌效果评价

本文针对甘草、黄连、板蓝根、黄芩、黄芪、大青叶6种中药醇和水提取物,研究其对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抗菌作用效果。采用醇提法和水提法获得6种中药醇和水提取物;通过药敏试验,筛选对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有抑菌效果的中药提取物;通过试管2倍稀释法探明该中药提取物对金黄色葡萄球菌或大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC);进而探明该中药提取物对金黄色葡萄球菌或大肠杆菌的最低杀菌浓度(MBC)。结果表明,6种中药醇水提取物中仅黄连醇提物和水提物对金黄色葡萄球菌表现较强的抑菌效果,浓度在0.5 mg/mL时,黄连醇提物和水提物对金黄色葡萄球菌分别达高敏和极敏。黄连醇提物和水提物对金黄色葡萄球菌的MIC分别为0.08 mg/mL和0.04 mg/mL,MBC结果显示,黄连醇和水提取物对金黄色葡萄球菌均表现杀菌作用,MBC分别为0.16 mg/mL和0.08 mg/mL。表明黄连醇提物和水提物对金黄色葡萄球菌具有抑制作用,且黄连水提物的抑菌效果优于黄连醇提物。     

应用MABA法与试管法测定蛇床子素和8-甲氧基补骨脂素体外抗结核活性的研究

为筛选有开发价值的抗结核中草药,本研究通过MABA(Microdilution MABA Assay)与试管法分别测定蛇床子素和8-甲氧基补骨脂素对结核分支杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的体外抗菌活性,即最低抑菌浓度(MIC),同时比较两种方法的检测结果;并以MTT法研究蛇床子素和8-甲氧基补骨脂素对Balb/C小鼠的脾细胞和肝细胞的细胞毒性试验。蛇床子素和8-甲氧基补骨脂素对这两种结核菌的最低抑菌浓度分别均为32μg/mL和128μg/mL,并且对BALB/c小鼠的脾细胞和肝细胞均无毒性。MABA法与试管法相比较,完全符合率为90%(9/11),具有较好的一致性。本研究为蛇床子素和8-甲氧基补骨脂素作为抗结核药物的开发及它们的抗菌机制研究奠定了基础。     

6种中药水溶性粗提物对鸡源耐药奇异变形杆菌的抑菌活性研究

对获得的91株鸡源奇异变形杆菌进行了11种抗生素敏感性测定,从中筛选出5株耐药性较高的耐药奇异变形杆菌。以奇异变形杆菌标准菌株为模型,进行了31种中药水溶性粗提物抑菌活性研究。以庆大霉素和青霉素为参照,采用管碟法对6种中药水溶性粗提物的抑菌活性进行效价估算。最终将6种中药水溶性粗提物作用于筛选出的耐药奇异变形杆菌,验证其抑菌活性。结果表明,31种中药中地榆、虎杖、大黄、黄芩、大青叶和绵马贯众对奇异变形杆菌标准菌株的抑菌效果最佳,对耐药奇异变形杆菌抑菌效果明显优于试验的11种抗生素。     

MABA法与二倍稀释法测定齐墩果酸体外抗结核菌活性

为筛选有开发价值的抗结核中草药,通过儿拉姆兰微板分析法(MABA)与二倍稀释法分别测定齐墩果酸对结核分支杆菌H37Rv(ATCC 27294)和H37Ra(ATCC 25177)的体外抗菌活性,测定最低抑菌浓度(MIC),同时对两种方法的检测结果进行了比较;以噻唑蓝(MTT)法进行了齐墩果酸对Balb/c小鼠的脾细胞和肝细胞的细胞毒性试验。结果表明,齐墩果酸对这两种结核菌的最低抑菌浓度均为16μg/mL,对Balb/c小鼠的脾细胞和肝细胞均无毒性。MABA法与试管法相比较,完全符合率为90%(9/10),具有较好的一致性。本研究结果为齐墩果酸作为抗结核菌药物的开发及其抗菌机制研究奠定了一定的基础。     

中草药对犊牛腹泻主要病原菌体外抑菌试验

选取E.coli 08、魏氏梭菌B型、魏氏梭菌C型与鼠伤寒沙门氏菌四种致病菌,用黄连、黄芩、黄柏、乌梅等13味中药及其部分复方对其进行纸片法体外抑菌试验,结果表明:乌梅的水提药液,调节pH后的黄连水提药液,醇提黄连药液对四种细菌都有较好的抑制作用,乌梅与黄连等药物混合提取可改变其药液pH过低的缺陷,同时不影响抑菌效果.这一结果为防治犊牛腹泻的中药筛选和科学配方提供了有力的试验依据.     

黄连水提物盐酸小檗碱及黄连碱对猪链球菌生物被膜的体外干预作用

通过微量稀释法、结晶紫染色法、生物被膜内活菌计数及生物被膜的形态学观察,探讨黄连水提物、盐酸小檗碱及黄连碱对猪链球菌生物被膜的体外干预作用。结果显示,黄连水提物、盐酸小檗碱、黄连碱对猪链球菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为:100μg/mL、62.5μg/mL、62.5μg/mL。亚抑菌浓度的黄连水提物、盐酸小檗碱和黄连碱均可抑制生物被膜的形成,盐酸小檗碱作用后生物被膜内活菌数较阴性对照组明显减少(P0.05),电镜观察可见与阴性对照组相比,黄连水提物、盐酸小檗碱和黄连碱试验组生物被膜结构被破坏,菌量明显减少。研究表明,50μg/mL黄连水提物、31.25μg/mL盐酸小檗碱和31.25μg/mL黄连碱对猪链球菌体外生物被膜的形成具有显著的干预作用。     

甘草等五味中药对猪链球菌Ⅱ型的抗菌活性试验

为验证清热解毒类中药对猪链球菌的抗菌活性。采用不同的提取方法验证甘草、黄连、秦皮、黄柏、金银花的水提物和乙醇提取物对猪链球菌Ⅱ型的抗菌活性。结果表明,甘草醇提物的效果最理想,最小抑菌浓度(MIC)为4.13 mg/mL,而水提物对猪链球菌Ⅱ型的MIC为40.63 mg/mL,表明甘草的醇提物对猪链球菌Ⅱ型的体外抑菌效果比其水提物显著。黄连醇提物对猪链球菌Ⅱ型的MIC为28.13 mg/mL,显著低于水提物对猪链球菌Ⅱ型的MIC为87.50 mg/mL。秦皮水提物为68.75 mg/mL,秦皮醇提物为175.0 mg/mL,表明秦皮的水提物比其醇提物对猪链球菌Ⅱ型效果显著。而黄柏、金银花的不同提取物对猪链球菌Ⅱ型的抑制作用差异性不显著(P>0.05)。     

中药单味药及复方对嗜水气单胞菌的体外抑菌作用

本试验用煎煮法提取中药有效成分,采用琼脂平板扩散法探讨了黄连、五倍子、大黄、诃子等中药单味药及中药复方对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的体外抑菌作用,测定了抑菌圈大小.采用双倍试管稀释法测得了最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC).试验结果表明,16种中药提取物对嗜水气单胞菌有不同程度的抑制作用,其中五倍子、黄连、诃子、大黄的水提物的抑菌效果最好,MIC值分别为7.81 mg/mL、15,63 mg/mL、31.25 mg/mL、62.50 mg/mL.五倍子作为主药,分别与诃子、黄连、大黄接一定比例组成的复方的MIC分别为3.906 mg/mL、7.813 mg/mL、15.625 mg/mL.通过对筛选的复方与市场上销售的3种成品复方的体外抑菌活性的比较,发现本实验室筛选的复方对嗜水气单胞菌的体外抑菌活性更强.     

应用Alamar Blue法与试管法测定α-倒捻子素和8-甲氧基补骨脂素体外抗结核杆菌活性

选取传统中药提取单体化合物α-倒捻子素和8-甲氧基补骨脂素,通过2种药物敏感性实验方法MABA(Microdilution Alamar Blue Assay)分析与试管法分别测定了两种化合物对结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的体外抗菌活性,同时还测定了9种阳性抗结核药物对这两种结核菌的最低抑菌浓度(MIC),比较2种方法的检测结果。结果表明:α-倒捻子素对结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的最低抑菌浓度均为6.25μg/mL,而8-甲氧基补骨脂素对结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的最低抑菌浓度均为128μg/mL。Alamar B1ue法与试管法相比较,完全符合率是90%(9/11),具有较好的一致性。本研究结果表明Mamar B1ue法是一种快速、简便测定药物对结核分枝杆菌MIC的方法。本研究为α-倒捻子素和8-甲氧基补骨脂素的进一步开发利用和抗分枝杆菌机制研究打下了基础。     

中药单体化合物光甘草定的体外抗菌活性研究

选取传统中药甘草提取单体化合物光甘草定,通过MABA药物敏感性实验方法研究其对结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的体外抗菌活性,并通过NCCLS标准方法测定了光甘草定对金黄色葡萄球菌ATCC25923和ATCC29213、粪肠球菌ATCC29212和大肠杆菌ATCC25922的最低抑菌浓度(MIC)。结果表明:单体化合物光甘草定对结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)有很好的抗菌活性,最低抑菌浓度均为25μg/m;光甘草定对实验中检测的金黄色葡萄球菌、粪肠球菌和大肠杆菌也有抗菌活性,并且对革兰氏阳性杆菌的抗菌活性高于革兰氏阴性杆菌。本研究为光甘草定的进一步开发利用和抗菌机制研究打下了基础。     

不同中药与盐酸恩诺沙星联用对大肠杆菌耐药菌株体外抑菌作用研究

本试验旨在研究不同中药与盐酸恩诺沙星联用对大肠杆菌耐药菌株的体外抑菌作用。采用微量肉汤法测定临床上一种常用药物盐酸恩诺沙星和不同中药对大肠杆菌耐药菌株及其联合使用的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。结果发现,单味中药水提物中侧柏叶、金樱子和五味子的抑菌效果较好,其MIC值分别为3.91、3.91和7.81 mg/mL;单味中药的醇提物中,侧柏叶、马齿苋抑菌效果较好,其MIC值分别为7.81和3.91 mg/mL。盐酸恩诺沙星分别与五味子和金樱子水提物联合作用后,对大肠杆菌耐药菌株的MIC值分别降低到0.0078和0.0039 mg/mL;与马齿苋、赤芍、侧柏叶和金樱子的醇提物联合后,对大肠杆菌耐药菌株MIC值均明显降低。盐酸恩诺沙星分别与鱼腥草水提物、赤芍水提物、椿皮水提物、马齿苋醇提物、苍术醇提物、三颗针醇提物、赤芍醇提物、薤白醇提物、拳参醇提物、侧柏叶醇提物、金樱子醇提物和败酱草醇提物联合作用后,对大肠耐药菌株呈现相加或协同抑菌作用,其FIC值分别为0.75、0.62、0.62、0.27、0.75、0.75、0.31、0.62、0.50、0.53、0.28和0.62。初步认为不同中药中含有能有效降低大肠杆菌耐药性的中药,也含有与盐酸恩诺沙星组合,具有协同或相加作用的中药,为寻找有效防治大肠杆菌病的药物组合来对抗多重耐药菌提供了可能。     

中草药提取物对多重耐药猪胸膜肺炎放线杆菌体外抑菌试验及抑菌效果研究

为筛选对猪接触传染性胸膜肺炎放线杆菌多重耐药菌株有较好抑菌作用的中草药。挑选了穿心莲、黄芩、苦参、白头翁、芒果叶和百里香6种中草药,采用水提取和65%乙醇提取相结合的方法制备单剂中草药的提取液,然后浓缩至含原生药物1g/mL。采用二倍稀释法分别测定这6种中草药对传染性胸膜肺炎放线杆菌多重耐药菌株的最小抑菌浓度(minimal inhibition concentration, MIC)和最小杀菌浓度(minimal bacteriocidal concentration, MBC)。以筛选出体外抑菌效果较好的中草药。结果表明,胸膜肺炎放线杆菌多重耐药菌株抑菌圈最大的是百里香和芒果叶,其抑菌圈直径分别为40 mm和35 mm.,其次为白头翁、黄芩、穿心莲和苦参,其抑菌圈直径在8~16 mm。百里香、芒果叶、白头翁、黄芩、穿心莲和苦参的最小抑菌浓度分别为0.198 mg/mL、0.198 mg/mL、0.396 mg/mL、0.396 mg/mL、25 mg/mL和25 mg/mL。百里香、芒果叶、白头翁、黄芩、穿心莲和苦参的最小杀菌浓度分别为0.396 mg/mL、0.396 mg/mL、0.792 mg/mL、0.792 mg/mL、50 mg/mL和50 mg/mL。说明除穿心莲和苦参外,其余4种中草药对胸膜肺炎放线杆菌多重耐药菌株有很多好的抑菌和杀菌效果,其中百里香和芒果叶效果最佳。本结果为由传染性胸膜肺炎放线杆菌多重耐药菌引起的猪接触传染性胸膜肺炎的防控和治疗奠定了基础,为开发中草药相关无抗产品以及防治由多重耐药菌引起的猪接触传染性胸膜肺炎提供了参考。     

石榴皮水提物对猪源多重耐药大肠杆菌的抑菌作用研究

【目的】筛选腹泻仔猪中携毒力基因且多重耐药的大肠杆菌菌株,评估中药水提物对该菌株的抑菌活性,并探索中药抑菌机制。【方法】通过PCR方法与Kirby-Bauer （K-B）药敏纸片法评估临床大肠杆菌菌株的肠毒素基因携带情况和耐药性;通过微量肉汤稀释法评估中药水提物对多重耐药大肠杆菌菌株的抑菌活性,确定最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）和最小杀菌浓度（minimal bactericidal concentration,MBC）;通过电导率仪以及相关试剂盒检测评估石榴皮水提物对多重耐药菌株作用不同时间后菌液电导率、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,AKP）含量及菌体内ATP含量的变化;通过SDS-PAGE和蛋白含量检测评估菌体内可溶性蛋白的含量变化;通过扫描电镜观察大肠杆菌形态变化。【结果】PCR检测14株临床大肠杆菌中肠毒素基因携带率达到78.57%,抗生素药敏试验结果显示,所有菌株至少对2种抗生素耐药,均属于多重耐药菌株。中药药敏试验结果显示,黄连、黄芩、石榴皮水提物对多重耐药菌株抑菌活性较好,其中石榴皮水提物的MIC和MBC分别为31.25和62.5 mg/mL。石榴皮水提物在1/2MIC和MIC浓度下能显著抑制质控菌株和多重耐药菌株的生长繁殖。在石榴皮水提物作用大肠杆菌3 h内,菌液电导率相比于对照组极显著上升（P<0.01）。AKP与ATP检测结果显示,与对照组相比,石榴皮水提物在作用大肠杆菌6 h内,菌液中AKP含量极显著增加（P<0.01）,菌体内ATP含量极显著降低（P<0.01）。SDS-PAGE和蛋白含量检测结果显示,随着石榴皮水提物刺激时间增加,菌体内可溶性蛋白含量减少。扫描电镜结果显示,石榴皮刺激后菌体形态发生碎裂和溶解。【结论】本研究结果表明,石榴皮水提物能显著抑制多重耐药且携带肠毒素基因的大肠杆菌生长,为临床治疗大肠杆菌性仔猪腹泻提供理论参考和药物开发依据。     

结核分支杆菌HSP65 DNA疫苗的制备和重组蛋白的原核表达

结核分支杆菌分子量为65ku的热应激蛋白(HSP65)是一种非常重要的抗原，为了研制结核病核酸疫苗，构建编码HSP65DNA，并将其分别克隆到原核和真核载体中进行了表达。以标准结核分支杆菌H37Rv基因组DNA为模板，用PCR法扩增出HSP65基因，经限制性内切酶消化后，插入真核表达栽体pJW4303中，获得重组质粒pJW-HSP65。同时将HSP65基因插入原核表达栽体pET-22b( )，获得重组质粒pET22b-HSP65。将pET22b-HSP65重组质粒转化大肠杆菌蛋白酶缺陷型菌株BL21(DE3)／PolysS，用IPTG诱导，进行蛋白表达。结果表明，经酶切鉴定和序列测定证实插入片断为目的基因HSP65，构建成功了真核重组质粒pJW-HSP65即可作为结核病DNA疫苗。经SDS-PAGE检验证明可以在大肠杆菌细胞中高效表达，将表达蛋白进行纯化，作为保护性结核杆菌抗原以便检测HSP65DNA疫苗的免疫效果。     

抗菌中草药筛选试验方法研究

采用常规中药敏感试验打孔法、平皿稀释法及试管法,选用地榆、黄连、知母、板蓝根、藿香等12种中药,对鸡O5型大肠杆菌、鸡未定型大肠杆菌和猪链球菌进行体外抑菌试验。结果表明:地榆、板蓝根、黄连、大黄、乌梅对猪链球菌效果比较好。地榆、乌梅、大黄、黄连、蒲公英对鸡未定型大肠杆菌效果比较好,地榆、乌梅、大黄、知母、黄芩、对鸡O5型大肠杆菌效果比较好。其它药物对鸡未定型及O5型大肠杆菌和猪链球菌效果较差或无抑制作用。     

基于中草药提取方法差异对鸡源变形杆菌的体外抑菌作用比较

为探究中草药提取液对临床分离鸡源变形杆菌抑菌效果,本试验对野菊花、穿心莲等9种中草药,采取水提法和醇提法提取中草药的有效成分,并采用试管二倍稀释法测定中草药提取液对鸡源变形杆菌的最小抑菌浓度(MIC),采用微量肉汤稀释棋盘法对抑菌效果较佳的黄芩等5种水提液与虎杖等3种醇提液分别进行体外联合药敏试验,测定其FIC指数。结果表明:水提液中,黄芩抑菌效果最佳,MIC为62.5 mg/mL,穿心莲、虎杖、黄连、香薷次之,MIC均为125 mg/mL;醇提液中,虎杖、穿心莲、香薷抑菌效果较好,MIC均为125 mg/mL;体外联合药敏试验中,本试验各组合均无协同作用;说明黄芩水提液对鸡源变形杆菌抑菌效果最佳,其余药物水提液抑菌效果一般或较差;醇提取液抑菌效果为一般或较差;本试验各联合用药的效果不佳。