禽流感血凝抑制试验的质量控制

禽流感血凝抑制试验（HI试验）的原理是禽流感病毒在适宜的条件下对鸡的红细胞具有凝集作用,这种凝集作用可被特异性抗体所抑制,抗体与病毒结合后,可使血凝素不能吸附于红细胞表面的受体上,红细胞将进行自然下落,利用这种特性检测血清中禽流感抗体的试验就叫禽流感血凝抑制试验。禽流感血凝抑制试验的方法是将受检血清与标定好的抗原发生充分反应,再加入红细胞作用,因为其快捷、成本较低、便于操作、能够处理大量的样品,所以成为基层动物疫病实验室对禽流感诊断及免疫状态监测的重要手段,但禽流感血凝抑制试验能否成功,影响因素很多,如果不加强质量控制,极易造成试验结果偏差,甚至误判,给禽流感的防止工作带来不便。笔者在长期的实验室检测中积累了一些经验,愿与大家分享探讨。 1试验器材的质量控制     

禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验抗原国家参考品的研制

按照国家一级标准物质要求和禽流感病毒（H5亚型）血凝抑制试验抗原制造及检验规程规定的抗原制备方法,研制了一批禽流感病毒（H5亚型）血凝抑制抗原国家参考品,用于检测禽流感病毒（H5亚型）制品生物效价和血凝抑制操作过程中的校验。该批抗原经过8家单位对其协作标定后对结果进行统计学分析,确定该批禽流感抗原的血凝效价为1：80。另对所研制的禽流感抗原均一性、稳定性、无菌检验、剩余水分测定、真空度测定等各项指标进行检测,结果均符合禽流感病毒（H5亚型）血凝抑制试验抗原制造及检验规程和国家一级标准物质要求。说明该禽流感病毒（H5亚型）血凝抑制抗原可以作为国家参考品。     

动物疫情快递

德国发生高致病性禽流感 2009年3月10日，德国Werner Zwingmann博士／教授向OIE通报了高致病性禽流感疫情。疫情始于2009年1月10日，于3月6日确诊。此次疫情不是临床发病，病原是H5N1高致病性禽流感病毒，依靠实验室检测作出诊断，Friedrich—Loeffler研究所（国家实验室）通过PCR试验确诊为高致病性禽流感。疫区位于巴伐利亚州Starnberg地区Pocking的帕森霍芬（靠近施塔恩贝尔格），涉及的易感动物为野生动物，     

影响血凝试验结果的主要因素

血凝和血凝抑制试验是新城疫、禽流感等疾病的诊断和研究工作中普遍应用的方法。某些病毒（如禽流感病毒和新城疫病毒）能凝集禽类的红细胞,这个现象称为病毒的血凝,可以用来检测样品中病毒的有无和含量的多少,并排特异性反应。因此,血凝和血凝抑制试验可用于鉴定病毒,流行病学调查,检测血清中抗体效价．动物群体疫情的监测等。     

禽流感的实验室诊断技术

禽流感是危害世界养鸡业的主要疫病之一。对该病的实验室诊断技术进行了介绍。从传统的禽流感病毒分离技术、血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验以及琼脂扩散（AGP）试验,到目前发展很快的酶联免疫吸附试验（ELISA）,都各具特点,互有利弊。     

禽流感的实验室诊断技术

禽流感是危害世界养鸡业的主要疫病之一。对该病的实验室诊断技术进行了介绍。从传统的禽流感病毒分离技术、血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验以及琼脂扩散（AGP）试验,到目前发展很快的酶联免疫吸附试验（ELISA）,都各具特点,互有利弊。     

动物疫情快递：老挝发生高致病性禽流感

2009年2月26日,老挝KHAMBOUNHEUANG BOUNKHOUANG博士向OIE通报了高致病性禽流感疫情。疫情始于2009年1月30日,于2月9日确诊。此次疫情是临床发病,病原是H5N1高致病性禽流感病毒,依靠临床检测、实验室检测和尸体剖检作出诊断,国家动物卫生中心的（国家实验室）Real-time PCR和快速检测结果均为阳性。疫区位于丰沙里省Khoua地区的Ban Meuang Khoua村,     

动物疫情快递

1．菲律宾发生禽流感 2005年7月12日菲律宾向OIE报告了发生在布拉干省卡伦皮特市的禽流感疫情。病原为低致病力的H5禽流感病毒。样品报告时已送往设在澳大利亚维多利亚Geelong的OIE禽流感参考实验室——澳大利亚动物健康实验室以确认毒株情况。疫情发生在1个小养殖场，涉及230只鸭、20只鸡和30只2日龄雏鸡。首先是在例行的常规检测中用血凝抑制实验发现了鸭的感染，随后在2005年7月7日经RT-PCR确诊。未在该养殖场鸡群发现感染，感染仅限于鸭，且未出现临床症状和死亡。     

禽流感检测方法研究进展

禽流感不仅对世界养禽业带来巨大的经济损失，而且可以感染人，公共卫生意义重大。由于其病毒亚型众多，抗原性变异极快，毒株的致病性也相差很大，早期快速诊断和血清学检测就成为预防和控制禽流感的前提条件。禽流感病毒的传统诊断方法是分离病毒和检测抗体。近年来，又相继建立了血凝抑制试验、神经氨酸酶抑制试验、酶联免疫吸附试验等血清学诊断技术及分子诊断技术。文章对禽流感检测方法快速诊断进行了概述。     

自主活动鸟类禽流感及新城疫的生态学与流行病学调查分析

在2004年初H5亚型禽流感在中国内地引起暴发前后，于湖北、广西二疫区市县的生态系中，自健康的鹰、鸽子、野鸭和鹌鹑中采集了54份血清，应用血凝抑制试验（HI）对其进行了血清学检测，并将获得的血清学检测数据进行了统计学分析。分析结果显示，在总共采集的54份血清样品中，抗新城疫病毒（NDV）抗体、抗It6亚型禽流感病毒（H6）抗体、抗H9亚型禽流感病毒（H9）抗体、抗H5亚型禽流感病毒（H5）抗体阳性率分别为64．8％、64．8％、75．9％、29．6％。推断这一时期新城疫病毒（NDV）、H6亚型禽流感病毒（H6）、H9亚型禽流感病毒（H9）和H5亚型禽流感病毒（H5）共循环于该生态系中，其中新城疫病毒、H9、H6亚型禽流感病毒长期、稳定循环于该生态系中，为该生态系主要流行血清型。血凝抑制试验检测结果发现，抗H5亚型禽流感病毒抗体效价较低，最高仅为640，其阳性率为29．6％，推断其可能为新近传入的病毒或新近重组变异出现的新病毒、与该次流感暴发相关的新病毒，这一推断还有待于通过对病毒基因序列的分析而做进一步验证：另外，新城疫病毒在该生态系中的稳定循环，构成了对家禽持久、潜在的威胁。对于自1994年以来，长期稳定循环于我国生态系及家禽中的H9亚型禽流感病毒则仍然是以G9-like为优势亚组。本研究结果还提示我们，对我国自主活动鸟类的生态系中抗禽流感病毒抗体的监测是预警、预报我国家禽流感暴发的有效途径，也是十分必要的，同时，血清学的检测结果为我们进一步的分子水平的分析研究提供了明确的靶向。     

胶体金免疫层析试纸条法与血凝抑制试验、琼脂扩散法检测禽流感病毒抗体的比较

用本实验室建立的胶体金免疫层析试纸条法检测了鸡血清中的禽流感病毒抗体，并与传统的血凝抑制试验、琼脂扩散法检测结果进行了比较。结果表明，胶体金免疫层析试纸条具有特异性强、灵敏度高、方法简便、快速等优点，适合于鸡禽流感病毒抗体的现场快速检测。     

鹅禽I型副粘病毒病的快速鉴别诊断

用禽流感免疫胶体金试验诊断一发病率高、死亡快、疑似禽流感或禽I型副粘病毒感染的鹅病例，结果为禽流感阴性；取病鹅肝、脾混合病料进行病毒分离，分离鸡胚尿囊液能凝集鸡红细胞（RBC），HA滴度为6log2，并可被康复鹅血清、抗鸡新城疫（NDV）阳性血清所抑制，而不能被禽流感（H5、H9）标准阳性血清抑制。分离病毒人工感染易感雏鹅，引起100％的发病和死亡，并有与自然病例相似的症状和病变；人工感染42日龄SPF鸡出现100％的发病和死亡。根据临床症状和病变情况、免疫胶体金试验以及病毒分离和鉴定，证明该鹅群患禽I型副粘病毒病。说明用禽流感免疫胶体金试验可以实现对禽流感、禽I型副粘病毒病的快速鉴别诊断。     

2006年9-10月全球重大动物疫情综述

2006年9-10月全球通报发生的重大动物疫情主要是禽流感新城疫、口蹄疫等。印尼疫情形势严峻,人感染禽流感及死亡病例继续增加;埃及又发现家禽和人禽流感病例;美国再次检测到野鸭感染低致病性禽流感病毒。1印尼人禽流感病例继续增加,疫情仍未得到控制9月22日印尼确认在东爪哇省死亡的11岁男孩感染了H5N1病毒;9月24日一名9岁男孩确认死于禽流感;9月27日万隆市一名20岁男子感染了禽流感,并于28日死亡;9月29日一名21岁女孩感染H5N1型禽流感病毒;10月11日万隆地区的1名67岁妇女禽流感病毒检测呈阳性,正在医院接受治疗;10月14日晚一名11岁男童感…     

2006年8-9月全球重大动物疫情综述

2006年8-9月全球通报发生的重大动物疫情主要有禽流感、疯牛病、新城疫和蓝舌病。东南亚地区继续发生禽流感疫情;美国检测到低致病性禽流感病毒;非洲再次发生禽流感疫情;欧洲北部地区首次发现蓝舌病。1东南亚地区的禽流感疫情仍在继续越南多次在家禽中检测到禽流感病毒,禽流感暴发的风险性逐渐加大。8月26日越南再次在湄公河三角洲地区槟知省盛富县(ThanhPhu)的鸭群中检测到H5N1型禽流感病毒。8月28日在河内郊区新潮县(Thanh Tir)Tcm Tricn市场出售的2只鸭子中检测到H5型禽流感病毒。9月1日同奈省(Dong Nai)100多只鸭子疑似感染禽流感…     

动物疫情快递

老挝发生高致病性禽流感 2008年2月13日，老挝Khambounheuang Bounkhouang博士向OIE报告了高致病性禽流感疫情。2008年2月1日，琅南塔省Long地区Namma村发生高致病性禽流感，于2月8日得到确诊。本次疫情属于临床发病，病原是H5N1亚型高致病性禽流感病毒。依靠临床、实验室检查和剖检作出诊断，国家兽医中心（国家实验室）的快速检测和RT—PCR结果均为阳性。     

朗德鹅禽流感病毒的分离与鉴定

用禽流感病毒ELISA试剂盒对某朗德鹅养殖场的病鹅气管粘液进行了检测，发现5份粘液样本均呈禽流感阳性；随后取相应气管组织材料接种于9～11日龄鸡胚分离病毒．发现尿囊液能使鸡红细胞发生凝集，用禽流感病毒H5、H7、H9标准阳性血清和新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊炎病毒抗血清作HI试验，结果禽流感病毒H5亚型抗血清的血凝抑制滴度达到2^7，而禽流感病毒H7、H9亚型及其他病毒抗血清无血凝抑制滴度，说明从朗德鹅分离到的病毒为H5亚型禽流感病毒。     

深圳出入境检验检疫局动检实验室禽流感检测情况与分析

通过深入分析深圳出入境检验检疫局动检实验宣对禽流感开展的病原学检测方法和血清学检测方法，系统总结了目前动物检疫实验室禽流感检测与监测过程中常用的方法。在病原学检测方面，比较了鸡胚病毒分离鉴定方法、实时荧光PCR检测方法和乳胶凝集试验检测方法的优劣，提出了适合本实验室的病毒快速鉴定方法。鉴于生物安全的要求，对禽流感病毒检测采用施实时荧光RT-PCR，同时不断开展新的检测方法。在血清学检测方面，全面总结了在常规的HA和HI检测中的注意事项，并对近年来深圳出入境检验检疫局的血清学检测数据进行了分析。     

2019年山东省兽医系统实验室检测能力比对

2019年山东省动物疫病预防控制中心组织全省98个兽医系统实验室开展检测能力比对工作,比对项目包括非洲猪瘟病毒核酸检测、禽流感病毒核酸检测、H5亚型禽流感病毒抗体检测和口蹄疫非结构蛋白抗体检测。比对结果显示:总体实验室正确率为70.41%(69/98),其中市级兽医系统实验室正确率为93.75%(15/16),国家动物疫情测报站正确率为68.75%(11/16),县级兽医系统实验室正确率为65.15%(43/66);非洲猪瘟病毒核酸检测、禽流感病毒核酸检测、H5亚型禽流感病毒抗体检测以及口蹄疫非结构蛋白抗体检测结果正确率分别为87.76%、85.71%、93.88%和97.96%。比对结果提示基层兽医系统实验室应提升检验人员的素质,加大实验室设施设备的投入和管理,结合开展社会化服务来推进实验室建设,确保检测结果客观准确。     

血凝和血凝抑制试验及易出现问题的原因分析

某些病毒能够与动物的红细胞发生凝集,即为红细胞凝集反应（HA）。这种凝集反应易被加入的特异性血清所抑制,即为红细胞凝集抑制试验（HI）。在禽病中目前这2种方法较常用作新城疫病毒、禽流感病毒等的诊断和血清学监测。     

抗禽流感病毒H5和H9亚型血凝素特异性单克隆抗体的研制及应用

以禽流感题H5和H9亚型病毒分别免疫Balh／c小鼠，取其脾细胞与SP2／0的骨髓瘤细胞融合，用血凝抑制试验(HI）检测细胞培养上清，结果获得了6株特异性单克隆抗体，其中抗禽流感题亚型病毒血凝素特异性单克隆抗体细胞株3株，分别命名为4B6、4A3、3H1；抗H9亚型病毒血凝素单克隆抗体细胞株3株，命名为6E6、6B6和5B4。这些单克隆抗体小鼠腹水HI效价为2^13-15，细胞培养上清抗体HI效价为2^7-8。研究结果表明，所有这些单克隆抗体仅与试验的相应题或ID亚型病毒株发生特异性反应，而不能与鸡新城疫病毒、鹅新城疫病毒、鹅腺病毒和鸡产蛋下降综禽征病毒(EDS76)等反应。实验室检测结果证明，应用这些单克隆抗体能在24h内迅速检测出相应的禽流感病毒。所有这些单克隆抗体将在禽流感的预警预报工作中发挥重要作用。