齐墩果酸和熊果酸对MC3T3-E1细胞增殖及OPG蛋白表达影响的机制研究

为了研究齐墩果酸和熊果酸对成骨细胞作用机制,试验以MC3T3-E1细胞为模型,采用一定浓度的齐墩果酸(或熊果酸)、雌激素受体(ER)、蛋白激酶C(PKC)和核因子κB(NF-κB)通路抑制剂(ICI 182780、RO 318220和PDTC)及齐墩果酸(或熊果酸)加抑制剂的混合药液作用细胞72 h后,用CCK-8法和ELISA法检测细胞活性及细胞上清液中骨保护素(OPG)蛋白水平。结果表明:与对照组相比,齐墩果酸(或熊果酸)组和齐墩果酸(或熊果酸)+PDTC混合组细胞活性显著上升,齐墩果酸(或熊果酸)+ICI 182780混合组、齐墩果酸(或熊果酸)+RO 318220混合组和三种抑制剂组细胞活性显著下降,PDTC组细胞活性无显著变化。齐墩果酸(或熊果酸)组的OPG蛋白水平显著上升,三种抑制剂组的OPG蛋白水平均显著下降,齐墩果酸(或熊果酸)+三种抑制剂混合组的OPG蛋白水平显著下降;而且ICI 182780与熊果酸联合使用会显著下调OPG蛋白分泌水平。说明齐墩果酸和熊果酸可通过ER和PKC通路发挥促MC3T3-E1细胞增殖的作用,通过ER、PKC和NF-κB通路发挥细胞OPG蛋白表达的作用。     

骨碎补水提液对大鼠成骨细胞OPG mRNA表达的影响

通过探讨骨碎补水提液对大鼠成骨细胞中OPG mRNA水平表达的影响,来研究骨碎补对成骨细胞产生作用的分子机制。细胞培养48h后,应用荧光定量RT-PCR方法检测不同浓度骨碎补水提液及雌激素受体抑制剂ICI 182780作用后,细胞中OPG mRNA水平表达的变化。结果显示,骨碎补水提液作用于大鼠成骨细胞48h后,与对照组相比,高浓度骨碎补水提液显著上调OPG mRNA的比值,而低浓度组与对照组无显著差异。加入雌激素受体抑制剂ICI 182780后,骨碎补对OPG mRNA水平的促进作用消失。表明骨碎补水提液能上调OPG mRNA水平的表达,且呈剂量依赖性。上述促进作用能被雌激素受体抑制剂阻断,因而可以推测这个过程与雌激素受体通路有关。     

制何首乌水提液对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化及OPG-RANKL mRNA表达的影响

为研究制何首乌水提液对小鼠成骨细胞MC3T3-E1的影响,将不同浓度的制何首乌水提液作用于MC3T3-E1细胞,采用噻唑蓝(MTT)法、碱性磷酸酶(ALP)活力检测试剂盒和实时荧光定量PCR法对细胞增殖、ALP蛋白分泌及骨保护素(OPG)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达水平进行检测。结果显示,药物作用2d和3d后,各浓度制何首乌水提液均可促进MC3T3-E1细胞增殖;药物作用6d后,各浓度制何首乌水提液均可促进MC3T3-E1细胞分泌ALP;药物作用1d后,较高浓度制何首乌水提液可上调MC3T3-E1细胞OPG/RANKL mRNA表达比。表明制何首乌水提液具有促进成骨细胞增殖、分化和上调成骨细胞OPG/RANKL mRNA表达比的作用。     

特女贞苷对MC3T3-E1细胞氧化损伤的保护作用及相关通路研究

研究特女贞苷对氧化应激诱导的成骨细胞模型的保护作用及作用机制。试验采用H₂O₂刺激MC3T3-E1细胞诱导氧化损伤作为细胞模型，不同浓度的特女贞苷(50μM、10μM、1μM)作用于细胞24 h后，分别检测细胞活性、细胞上清液中碱性磷酸酶(ALP)水平以及骨保护素(OPG)和核因子κB受体活化剂配体RANKL蛋白分泌量。结果显示，与H₂O₂模型组相比，50μM和10μM特女贞苷组的细胞活性显著升高(P<0.05),1μM特女贞苷组的OPG蛋白分泌显著升高(P<0.05)。随后以特女贞苷(50μM)和P38MAPK通路抑制剂(1μM)混合作用于细胞24 h，结果显示，添加抑制剂后细胞活性、ALP水平和OPG蛋白分泌均呈现显著的抑制趋势。结果提示，特女贞苷在一定浓度范围内对氧化应激状态下的成骨细胞具有保护作用，并且其保护作用可能与P38MAPK信号通路相关。     

二苯乙烯苷对成骨细胞抗氧化损伤的保护机制

为探索二苯乙烯苷(THSG)保护成骨细胞抗氧化损伤的作用机制，本试验使用不同浓度THSG预处理MC3T3-E1成骨样细胞1 h,加入0.3 mmol/L过氧化氢(H₂O₂)共同培养细胞，采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞生存活力；实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)法检测细胞Bcl-xL/Bcl-2相关死亡启动因子(Bad)、骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和β-连环蛋白(β-catenin)mRNA表达水平；Western blot法检测细胞OPG和β-catenin蛋白水平。结果显示，与对照组相比，H₂O₂组细胞生存活力显著下降(P<0.05),Bad和RANKL mRNA表达水平显著上升(P<0.05),OPG和β-catenin mRNA和蛋白水平均显著下降(P<0.05);与H₂O₂组相比，THSG(10^-4mg/mL)保护组细胞生存活力显著上升(P<0.05),Bad和...     

自噬在骨保护素对破骨细胞及其前体凋亡过程的调控机制

为了探讨骨保护素(osteoprotegerin,OPG)对破骨细胞及其前体自噬与凋亡的影响,本研究以RAW264.7细胞诱导分化形成的破骨细胞(osteoclasts,OCs)及其前体(osteoclast precursors,OCPs)为研究对象,通过自噬促进剂雷帕霉素(rapamycin,RAP)或自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)分别预处理1h和30 min后,再添加80ng·mL-1OPG作用细胞6h,试验分为对照组(Con)、OPG、CQ、CQ+OPG、RAP和RAP+OPG组,利用免疫印迹法(Western blot)检测细胞自噬相关蛋白;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率。结果显示,与对照组相比,OPG组OCPs的Atg5和Beclin-1水平极显著或显著上调(P0.01或P0.05),但LC3-Ⅱ无显著差异(P0.05);与OPG组相比,RAP+OPG组OCPs中的LC3-Ⅱ水平极显著上调(P0.01);与对照组相比,OPG组OCs中LC3-Ⅱ、Atg5和Beclin-1水平极显著下调(P0.01);与OPG组相比,RAP+OPG组OCs的Atg5和Beclin-1水平极显著下调(P0.01)。与对照组相比,OPG处理组和RAP+OPG组OCPs凋亡率极显著上升(P0.01),CQ+OPG组凋亡率无显著差异(P0.05);RAP+OPG比OPG组OCPs凋亡率极显著增加(P0.01);与对照组相比,OPG组OCs凋亡率极显著降低(P0.01),CQ+OPG组凋亡率极显著下降(P0.01),RAP+OPG组凋亡率极显著下降(P0.01)。表明OPG能够促进OCPs发生自噬,而自噬的激活促进了OCPs的凋亡;OPG抑制OCs自噬的发生,并且抑制和激活自噬都能抑制OCs的凋亡。     

补骨脂水提液对成骨细胞OPG-RANKL mRNA表达的影响

为了探讨补骨脂水提液对体外培养大鼠成骨细胞核因子-KB受体活化因子配体(RANKL)和骨保护素(OPG) mR-NA表达的影响,选取出生24 h内的SD大鼠颅盖骨,依次用胰酶和胶原酶消化分离培养成骨细胞,用不同浓度的补骨脂水提液(10-1,1.0 mg/mL和10 mg/mL)作用第三代细胞,分别在药物作用24、48 h和72 h后提取细胞总RNA,用实时荧光定量PCR法检测细胞中RANKL和OPG mRNA.结果显示,补骨脂水提液各浓度均能不同程度地促进成骨细胞OPG mRNA的表达、抑制RANKLmRNA的表达,从而上调OPG/RANKL mRNA比值,其中1.0 mg/mL和10 mg/mL的补骨脂水提液作用显著.说明补骨脂水提液通过调节成骨细胞分泌OPG和RANKL的量来促进骨形成、抑制骨吸收,从而治疗骨质疏松.     

乳果糖和富氢水对采食镰刀菌污染玉米的仔猪血液指标和肝脾形态的影响

旨在探讨乳果糖(LAC)和富氢水对饲喂镰刀菌污染玉米的仔猪肝脾组织形态和血液生理生化指标的影响。将20头单栏饲养的断奶母仔猪,随机分为4组:对照组(NC),霉菌毒素污染日粮组(MC),污染日粮+LAC组(MC+LAC)和污染日粮+富氢水组(MC+HRW)。试验期为25 d。结果表明:第14天,MC组直接胆红素、总胆汁酸水平和谷丙转氨酶活性显著高于其他3组(P0.05);与MC组相比,MC+HRW组平均血红蛋白量显著增加(P0.05),谷草转氨酶活性显著降低(P0.05)。试验第25天,MC组的嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、血红蛋白、尿素、肌酐、总胆红素、直接胆红素、总胆汁酸水平和谷丙、谷草转氨酶活性显著高于其余3组(P0.05);与MC组相比,MC+LAC组血小板计数显著升高(P0.05),碱性磷酸酶活性显著降低(P0.05);MC+HRW组超敏C反应蛋白含量显著降低(P0.05)。MC组胆囊指数显著高于NC组(P0.05);与MC组相比,MC+LAC组心脏和胆囊指数显著下降(P0.05)。病理学观察MC组的肝细胞出现较为严重的空泡变性,血管变粗且扩张,MC+LAC和MC+HRW组损伤情况不明显。MC组脾脏白髓区显著减小,红细胞增多,红白髓区域分界不明显。研究表明,乳果糖和富氢水可以一定程度上缓解霉菌毒素对断奶仔猪的血液生理生化指标以及肝脏、脾脏等器官产生的不利影响。     

油松叶水提液对高羊茅的化感效应研究

采用室内生物测定法比较油松(Pinus tabulaeformis)生活叶、凋落叶以及凋落叶腐解物的水提液对高羊茅(Festuca arundinacea)种子萌发、幼苗生长及生理的影响。结果表明:油松生活叶、凋落叶、凋落叶腐解物水提液对高羊茅种子发芽率和发芽势的抑制率分别为6.14%~69.30%和3.23%~96.77%;对高羊茅幼苗根长和苗高的抑制率分别为-1.92%~45.90%和0.39%~29.83%。高羊茅对3种水提液化感效应敏感性依此为:生活叶水提液凋落叶水提液凋落叶腐解物水提液。3种水提液对高羊茅幼苗SOD,POD和CAT活性表现出不同程度的促进或抑制作用;MDA含量随处理浓度升高显著升高;除0.075g/mL凋落叶水提液处理外,其余处理可溶性蛋白含量降低。试验表明,3种油松叶水提液对高羊茅均有一定的化感效应,以生活叶的作用最强,其次为凋落叶,凋落叶腐解物最弱。     

骨碎补水提液对大鼠成骨细胞的影响

为观察骨碎补水提液对体外培养大鼠成骨细胞增殖、分化的影响,用体外培养新生SD大鼠颅盖骨分离的成骨细胞,将不同浓度的骨碎补水提液分别与第3代大鼠成骨细胞进行体外共同培养,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力,对硝基苯磷酸盐法(PNPP法)测定细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性.结果显示,与对照组相比,作用48 h、72 h,骨碎补水提液均能显著促进大鼠成骨细胞的增殖,且与时效有关;作用48 h ,10-3、10-2 mg/mL骨碎补水提液浓度组可显著升高细胞ALP活性(P<0.05).表明骨碎补水提液中存在较高活性的促大鼠成骨细胞增殖和分化的物质.