河北省保定地区雏鸡鸡白痢沙门菌的分离鉴定及耐药性检测

为了有效防控雏鸡白痢沙门菌病,试验自保定某蛋种鸡场疑似为鸡沙门菌病雏鸡采取肝脏病料进行细菌的分离培养、生化鉴定、鸡白痢沙门菌多价血清学鉴定及沙门菌inv A基因PCR鉴定,并对分离菌进行致病性检测及对7种抗菌药物的耐药性检测。结果表明,10株分离菌的形态特征、生化特性、血清学鉴定结果符合鸡白痢沙门菌的特征,说明从病死雏鸡组织中分离出的细菌为鸡白痢沙门菌。沙门菌inv A基因PCR扩增出373 bp目的片段,进一步证实分离菌为鸡沙门菌。用分离菌株接种雏鸡,其死亡率高达90%,表明该菌株有很高的致病性。10株分离菌株对阿莫西林和青霉素耐药率达100%,对阿齐霉素的耐药率达90%,而对阿米卡星、头孢唑林和庆大霉素耐药性较弱、对氧氟沙星较为敏感。3耐菌株多重耐药比例为42.86%,4耐菌株多重耐药比例为57.14%,5耐菌株多重耐药比例为71.43%,说明雏鸡沙门菌分离株对所试抗菌药物均表现出不同程度的耐药性,且表现出多重耐药现象。本试验为鸡白痢沙门菌病的防治提供参考。     

鸭源奇异变形杆菌的分离鉴定及其16 S rRNA基因序列分析

从山东潍坊不同鸭场发病雏鸭肝脏、肺脏病料中分离到3株致病菌,通过培养特性观察、革兰氏染色、生化试验,初步鉴定为奇异变形杆菌。用PCR方法扩增分离菌株的16 S rRNA基因,获得大小为1 504 bp的目的片段。经BLAST比对分析表明,与其同源性最高的均为奇异变形杆菌各株系的16 S rRNA序列,同源性高达98%以上,与14株参考菌的同源性为98.9%~99.8%,在系统发育树上聚为同一枝,表明分离菌株为鸭奇异变形杆菌。动物接种试验表明分离菌株对鸭均具有较强致病性。药敏试验结果显示分离株对头孢吡肟、哌拉西林、氨曲南等8种药物敏感,对米诺环素、头孢曲松、环丙沙星等23种药物有耐药性。     

大肠杆菌分离鉴定及其耐药性试验

为了确定采集自内蒙古地区某牧场的病料内的病原菌,对其进行细菌的分离培养。将分离培养出的2株病原菌进行16S rDNA扩增、细菌生化鉴定、致病性试验以及细菌耐药性试验。结果表明,分离菌在伊红美蓝琼脂培养基上可生长出暗红色或黑色并且带有金属光泽的菌落;镜检可见,分离菌为革兰阴性杆菌;分离菌生化鉴定结果与大肠杆菌标准菌株ATCC 25922测定的结果相一致;分离菌的16S rDNA与大肠杆菌标准菌株16S rDNA PCR扩增结果相一致;分离到的2株大肠杆菌均具有致病性,对多种抗生素均有耐药性。结果提示,该次分离得到的病原菌主要为具有多重耐药性的致病性大肠杆菌。     

眼镜蛇腐皮病病原菌分离鉴定与药敏试验

为了研究眼镜蛇腐皮病的致病菌,试验采用细菌分离培养的方法,在无菌条件下,从患腐皮病眼镜蛇皮肤溃烂处挑取少许内容物划线接种于普通琼脂平板、兔血平板、SS琼脂平板及真菌培养基上,继而选取优势菌落进行分离、纯培养。结果表明:得到9种细菌,没有发现真菌。根据细菌形态、菌落生长特征和生化特性得出,这9种细菌分别为:黏质沙雷菌1株、奇异变形杆菌3株、铜绿假单胞菌3株、克氏耶尔森菌1株、肺炎克雷伯菌1株、雷极普鲁威登斯菌1株、嗜麦芽假单胞菌1株、金黄色葡萄球菌1株和腐生葡萄球菌3株。经致病性试验证实,奇异变形杆菌、铜绿假单胞菌、克氏耶尔森菌、雷极普鲁威登斯菌、嗜麦芽假单胞菌和金黄色葡萄球菌具有致病性,黏质沙雷菌、肺炎克雷伯菌和腐生葡萄球菌无致病性。药物敏感性试验证实:在15株致病菌中,除克氏耶尔森菌外,均对妥布霉素和庆大霉素高度敏感;嗜麦芽假单胞菌对妥布霉素不敏感,对庆大霉素高度敏感;除金黄色葡萄球菌外,均对阿米卡星高度敏感;15株致病菌均对头孢类抗生素不同程度敏感;哌拉西林、氨曲南和卡那霉素对大部分菌有抑制作用。说明眼镜蛇腐皮病主要由致病性细菌引起,敏感药物治疗后有良好效果。     

一例鸡源金黄色葡萄球菌的分离鉴定与耐药性分析

采集关节肿胀、关节囊内有浆液性渗出物患病鸡肝脏及骨髓进行细菌分离,对分离菌进行形态学观察、革兰氏染色、生理生化试验、PCR鉴定、16S rDNA序列测定和药敏试验。结果从病鸡样品中分离出一株在普通琼脂平板上形成湿润、表面光滑、隆起的圆形菌落,菌落在血琼脂平板上能产生β溶血;分离菌为革兰氏阳性,符合金黄色葡萄球菌生化培养特性;PCR检测结果显示金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因呈阳性,细菌16S rDNA核酸序列Blast比对结果显示为金黄色葡萄球菌;分离菌对阿莫西林、四环素、青霉素G、氯霉素、复方新诺明和氨苄西林具有耐药性。结果为云南鸡源金黄色葡萄球菌病的临床诊断和防治提供了依据。     

1株奶牛源松鼠葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

为确定奶牛垫料中是否含有病原菌并深入了解垫料中优势生长菌的类型、耐药性及致病性等情况,本试验进行了细菌分离培养、革兰染色镜检、生化试验鉴定、16S rDNA序列分析及同源性比对、药敏试验、小鼠致病性试验。结果显示,分离菌在普通营养琼脂平板上形成圆形、表面光滑的白色菌落,血琼脂平板上形成黏稠、较大的白色菌落。革兰染色镜检结果显示,分离菌为革兰阳性,球型,呈葡萄串状排列,或单个散落。生化试验结果显示,分离菌对木糖、葡萄糖、麦芽糖、果糖、乳糖、硝酸盐还原等呈阳性反应,而蜜二糖、木糖醇、山梨醇、尿素、V-P反应等呈阴性反应。16S rDNA序列分析结果显示,扩增的16S rDNA序列长度为1 298 bp,与松鼠葡萄球菌的核苷酸同源性达99.85%~100%;系统进化树结果显示,分离菌与松鼠葡萄球菌处于同一分支。动物试验结果表明,分离菌株对试验小鼠有较强的致病性,以0.2 mL/只（7.9×10⁸ CFU/mL）菌液的剂量接种小鼠,在48 h内死亡率为60%（3/5）。药敏特性分析结果显示,分离菌株对复方新诺明、氨苄西林等7种药物敏感,对克林霉素、头孢噻肟和头孢呋辛中度敏感,对青霉素、红霉素和林可霉素耐药。本研究为奶牛源松鼠葡萄球菌的分离鉴定及防控提供了参考依据。     

雏鸡源致病性奇异变形杆菌的鉴定与药敏试验

为了鉴定致雏鸡死亡病原菌,从无菌采集病死雏鸡肝脏组织中分离到1株病原菌。采用常规鉴定方法、16S rRNA PCR和致病性试验等方法,分离菌株被鉴定为致病性奇异变形杆菌。采用K-B药敏纸片法对分离菌株进行药敏试验,结果显示,分离菌株对头孢克肟、头孢曲松、环丙沙星、丁胺卡那霉素、林可霉素5种药物高度敏感;对其他药物有不同程度耐药性。     

鹅源奇异变形杆菌的分离鉴定及药敏试验

从某鹅场病死鹅脏器中分离到一株细菌,进行生化鉴定试验、16 S rDNA鉴定、动物致病性试验、动物回归试验和药敏试验。结果表明:初步鉴定为鹅奇异变形杆菌,应用PCR方法扩增出1 465 bp的16 S rDNA基因片段,经BLAST比对分析,与奇异变形杆菌参考株同源性为99.5%~100%,其中与KT216564(巴基斯坦)、KF051774(中国深圳广州)同源性为100%,从分子水平进一步证明该菌是鹅奇异变形杆菌;以0.2 mL/只(3.5×109cfu/mL)菌液的剂量接种小白鼠,其发病率为100%,死亡率为80%,表明分离菌具有较强致病性;药敏试验结果显示,在5类14种常用抗菌药物中,分离菌仅对β-内酰胺类抗生素头孢哌酮与氨基糖苷类抗生素丁胺卡那高度敏感,而对喹诺酮类抗生素氟哌酸、环丙沙星,大环内酯类抗生素红霉素、克拉霉素以及磺胺类抗菌药复方新诺明均产生耐药性。     

一株藏猪源奇异变形杆菌的分离鉴定及药敏试验

本研究从某藏猪场发病仔猪病料中分离细菌，对分离菌进行形态学、染色特性、生化特性鉴定，并分析16S rDNA基因同源性，同时进行了药敏试验。分离鉴定结果得出：分离菌呈多形性，多为革兰氏阴性短杆菌，少数为长杆状，在SS培养基上形成中心黑色、边缘白色的单菌落；生化反应对鸟氨酸脱羧酶、尿素酶、葡萄糖、柠檬酸盐、山梨醇、硫化氢等呈阳性反应；分离株16S rDNA基因的PCR扩增目的条带约为1 410 bp，在GenBank上进行同源性比对，与奇异变形杆菌的相似度为99%。从形态学、生化特性和16S rDNA序列分析结果鉴定出所分离的菌株为奇异变形杆菌。药敏试验结果显示：菌株的耐药性很强，只对头孢他啶、氧氟沙星、庆大霉素、阿米卡星、氟苯尼考、左氧氟沙星、麦迪霉素等敏感。     

3株鸽源奇异变形杆菌的分离与鉴定

对从江苏省某鸽场病死鸽脏器中分离的细菌进行分离鉴定。通过细菌培养、革兰染色镜检及生化特性测定等对分离株进行初步鉴定;扩增分离株的16S rDNA片段并测序,Blast搜索比对确定细菌的种属;通过动物致病性试验和药敏试验来检测分离株的致病力及耐药性。结果:3株细菌的16S rDNA序列测定和Blast分析表明与奇异变形杆菌参考株的同源性达99.4%～99.8%,确定为奇异变形杆菌;致病性试验显示奇异变形杆菌对鸽子和小鼠均有致病力;药敏试验表明奇异变形杆菌对头孢菌素类抗生素和氟苯尼考敏感,对青霉素类和磺胺类抗生素等有耐药性。结果表明,从鸽子脏器中所分离的细菌为奇异变形杆菌,具有较强的致病力和多重耐药性。     

1株羊源溶血性曼氏杆菌的分离鉴定、药敏试验及致病性研究

[目的] 对某养殖场由呼吸道症状引发的山羊死亡病例进行病原学诊断,并对分离到的病原进行药敏试验及致病性分析。[方法] 无菌条件下剖检并采集死亡羊只肺脏及气管组织,接种于TSA固体培养基,37 ℃培养22~24 h;挑取疑似菌落,纯化后进行革兰染色镜检和生化鉴定;对经表型鉴定的分离菌株进行16S rDNA PCR扩增、测序,并进行遗传进化树构建和同源性分析;采用微量肉汤稀释法对分离菌株进行药敏试验;利用动物攻毒试验确定分离菌株对羔羊的致病性。[结果] 从临床样本中分离到1株细菌,命名为DMQ-Y-Mh。纯化后的分离菌株镜检为革兰阴性短杆菌,经生化鉴定以及16S rDNA PCR扩增、测序、同源性分析,将分离菌株鉴定为溶血性曼氏杆菌（Mannheimia haemolytica）。分离菌株对环丙沙星、阿奇霉素、庆大霉素敏感,对左氧氟沙星、土霉素、氟苯尼考中度敏感,对替米考星、恩诺沙星、泰乐菌素耐药。攻毒羔羊于72 h内死亡,剖检眼观气管及肺脏支气管内有黏性分泌物;肺脏组织有深红色病灶,与正常肺脏组织界限明显,可再次从死亡羔羊肺脏及气管组织分离到溶血性曼氏杆菌。[结论] 溶血性曼氏杆菌是造成该养殖场发生羊只死亡的病原菌,药敏试验结果为指导临床用药提供了参考。     

河南省鸡源结肠弯曲杆菌的分离鉴定及耐药性分析

[目的]掌握河南省鸡源结肠弯曲杆菌的分布和对抗菌药物的耐药情况。[方法]从养殖场抽取鸡泄殖腔拭子460份进行结肠弯曲杆菌分离培养,采用PCR、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行鉴定,并通过微量肉汤稀释法对分离菌株进行药物敏感性分析。[结果]共分离结肠弯曲杆菌42株,分离率为9.13%;分离的结肠弯曲杆菌对环丙沙星、萘啶酸、阿奇霉素耐药严重,耐药率分别为95.24%、90.48%、71.43%。[结论]河南省鸡源结肠弯曲杆菌耐药情况较为严重,应规范使用抗菌药物。     

内蒙古锡林郭勒盟犊牛腹泻大肠杆菌的分离鉴定及药物敏感性试验

[目的] 确定内蒙古锡林郭勒盟多伦县某养殖场犊牛腹泻的致病菌,为选择敏感药物治疗该病提供依据。[方法] 无菌采集腹泻犊牛肛拭子进行细菌培养鉴定、致病性试验及体外药物敏感试验。[结果] 肛拭子经培养后的菌落形态一致,经表型鉴定、生理生化鉴定及16S rDNA鉴定确定分离菌为大肠杆菌;大肠杆菌分型引物鉴定分离菌株为ETEC型;且分离菌株可致小鼠死亡;分离菌株对氨苄西林、氨曲南、头孢唑啉、四环素、氧氟沙星、左氧氟沙星、复方新诺明等21种药物表现为耐药,对头孢哌酮、头孢曲松、克林霉素、多黏菌素B、米诺环素等10种药物表现为中度敏感,对头孢西丁、万古霉素、环丙沙星及呋喃妥因4种药物表现为敏感。[结论] 该养殖场的犊牛腹泻是由大肠杆菌ETEC型所致,临床治疗过程中可使用环丙沙星。     

1株鸭源奇异变形杆菌的分离鉴定与毒力基因检测

试验旨在研究鸭源分离菌的耐药性及致病性,通过细菌分离鉴定、药敏试验、耐药基因和毒力基因PCR检测及动物致病性试验,成功分离到1株细菌,经纯化和革兰氏染色,显微镜下显示两种形态：短杆状以及细长如发丝,革兰氏染色为阴性菌,将其命名为GZGY2020。生化反应显示,分离菌具有明显的运动性,M-R试验、V-P试验均为阳性,生化特性符合奇异变形杆菌。分离菌16S rDNA进化树结果显示,其与奇异变形杆菌处于同一分支。药敏试验结果发现,分离菌对多种药物耐药,对18种药敏纸片中羧苄西林、头孢氨苄、苯唑西林等16种药物耐药,耐药率高达88.9%,仅对头孢他啶和环丙沙星敏感;PCR检测其含有磺胺类耐药基因基因sul1和sul2及β-内酰胺类耐药基因VIM,并含有hpmA、rsmA、atfA、ucaA、ureC、zapA、pmfA、fliL和mrpA 9种毒力基因。动物回归试验结果显示,分离菌对雏鸭致病力强,即1×10⁸ CFU/mL菌液能使雏鸭1 d内全部死亡。在药敏特性上,从病死鸭中分离到的菌株GZGY2020与以往报道的奇异变形杆菌有一定差异,表明该菌可能发生变异,导致毒力增强,而检测的10种毒力基因中仅有1种毒力基因没有出现相应的条带,表明奇异变形杆菌是引起该鸭死亡的重要致病菌,应引起高度重视。     

抗菌肽对抗生素耐药菌株的抑菌活性研究

[目的]研究抗菌肽对抗生素耐药菌株的抑菌活性。[方法]利用抗性平板划线法从腹泻病牛血便中筛选分离出1株耐药菌,通过16S rDNA序列进行鉴定,采用琼脂孔穴扩散法通过梯度盐酸壮观霉素（spectinomycin,Spe⁺）、氨苄青霉素（ampicillin,Amp⁺）、硫酸卡那霉素（kanamycin,Kan⁺）和氯霉素（chloramphenicol,Cm⁺）试验确定该菌药敏特性,并利用1种抗菌肽制剂对该菌株进行药敏试验。[结果]经BLAST比对分析该菌16S rDNA序列,鉴定该耐药菌为科氏葡萄球菌（Staphylococcus cohnii）,此菌对Amp⁺敏感,但对试验中其他抗生素均有耐药性,各梯度抗菌肽对该耐药菌均具有明显的抑菌活性。[结论]抗菌肽能有效抑制耐药科氏葡萄球菌的生长,有望在畜牧生产中代替抗生素使用。     

马乳源大肠杆菌的毒力基因检测和耐药性分析

[目的] 了解新疆伊犁地区某马场乳源大肠杆菌的毒力基因携带情况和药物敏感性。[方法] 对采集到的85份马乳进行大肠杆菌的分离纯化、染色镜检、特异性基因phoA的扩增和16S rDNA测序;采用K-B纸片扩散法药敏试验分析马乳源大肠杆菌的耐药性;采用PCR技术检测马乳源大肠杆菌携带的毒力基因、耐药基因及鉴定其所属系统发育群,对大肠杆菌进行生物被膜形成能力检测。[结果] 从85份马乳中分离得到6株大肠杆菌,其中3株为A群,3株为B1群;6株大肠杆菌均对青霉素和替米考星耐药;均携带ibeB、yijP、mat、sodA和csgA毒力基因;均未检测到耐药基因;有4株具有生物膜形成能力。[结论] 对新疆伊犁地区某马场马乳源大肠杆菌进行初步的毒力基因检测和耐药性分析,发现其对青霉素和替米考星耐药严重,并携带多种毒力基因,具有一定的潜在致病风险。     

貂源停乳链球菌似马亚种的分离鉴定

为了研究引起水貂肺炎死亡的病因,对送检的病死水貂进行剖检。从病死水貂病料中分离出了一株革兰阳性球菌,对其进行菌落形态观察、生化鉴定以及16S rDNA序列分析,构建系统进化树并进行同源性分析,同时对该菌株进行药敏试验。结果表明：根据分离菌的形态特征、生物化学特性,结合16S rDNA序列测定与进化树分析,将其鉴定为链球菌属的停乳链球菌似马亚种。药敏试验结果显示,该菌株对青霉素、阿莫西林、莫西沙星等药物敏感,但对四环素有较强的耐药性。     

犬脓皮病病原菌的分离鉴定及耐药性分析

为了研究犬脓皮病致病菌的种类及其对抗生素的敏感性,采用细菌培养、分离、革兰染色和生化试验等方法鉴别病原菌;采用Kirby-Bauer药物纸片琼脂扩散法对病原菌进行药敏试验。结果表明：病犬发病部位的病原菌为中间型葡萄球菌和金黄色葡萄球菌。中间型葡萄球菌对头孢拉啶和头孢氨苄敏感,敏感率为20%;对羧苄西林和头孢他啶中度敏感,中度敏感率为20%;对红霉素、卡那霉素、复方新诺明、哌拉西林、青霉素和苯唑西林产生耐药,耐药率为60%。金黄色葡萄球菌对头孢拉啶和头孢氨苄敏感,敏感率为20%;对羧苄西林和哌拉西林中度敏感,中度敏感率为20%;对红霉素、卡那霉素、复方新诺明、头孢他啶、青霉素和苯唑西林产生耐药,耐药率为60%。     

1株罗曼粉鸡源申氏不动杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解贵州省某养殖场罗曼粉鸡发病病原的特征及其耐药性,本试验从病死鸡中分离出一株革兰氏阴性菌,命名为GZ2019,并对其进行纯化培养、生化试验、16S rRNA序列分析、药敏试验及动物回归试验。分离菌在普通琼脂培养基上呈圆形凸起、表面光滑、半透明的灰白色小菌落,鲜血营养琼脂培养基上菌落形态与普通琼脂培养基上的一致,但不溶血;革兰氏染色结果镜检显示,分离菌为成双排列的阴性球杆菌,偶见单个存在或链状排列;生化试验结果显示,分离菌枸橼酸盐利用、过氧化氢酶反应为阳性,硝酸还原、氧化酶、葡萄糖发酵等反应为阴性,无运动性;16S rRNA序列分析结果显示,分离株与不动杆菌的核苷酸同源性在72.6%~99.9%之间,与申氏不动杆菌LUH 4760株（GenBank登录号：AJ275041）、SNSK 752株（GenBank登录号：MG584984）、MCDA01株（GenBank登录号：KY385627）及RP1株（GenBank登录号：MG461636）的核苷酸同源性高达99.9%;药敏试验结果显示,分离菌对头孢曲松和痢特灵敏感,对头孢哌酮、头孢呋辛、头孢他啶等5种药物中度敏感,对新霉素、环丙沙星、羧苄西林等17种药物耐药;动物回归试验结果显示,试验组小鼠隔离饲养1周仅死亡1只,死亡率为20%,表明该分离菌致病性较弱。本试验成功分离出1株低致病性申氏不动杆菌GZ2019,可为鸡源申氏不动杆菌病的预防和治疗提供一定的参考依据。