屎肠球菌的生物学特性及其对仔猪免疫功能的影响

屎肠球菌是动物肠道正常菌群中的菌类,对维持动物肠道菌群生态平衡起到重要作用。文章综述了屎肠球菌的生物学特性及其对仔猪免疫功能的影响。     

昆明动物园火烈鸟粪便细菌的分离、培养及鉴定

昆明动物园火烈鸟出现腹泻、急性死亡的情况,通过研究火烈鸟肠道微生物菌群,对肠道微生态健康及其调控作用进行评价,从而了解火烈鸟粪便中的细菌种属,此举可有效防治火烈鸟的肠道疾病,加强对火烈鸟的保护,此次从昆明动物园火烈鸟馆取样火烈鸟粪腹泻便,经过细菌分离培养,染色镜检、生化试验等,结果表明该粪便中分离得到细菌为屎肠球菌、藤黄微球菌、无乳链球菌;动物回归试验表明屎肠球菌、藤黄微球菌具有致病性。     

屎肠球菌的功能特性及其在养猪业中的应用

正屎肠球菌是人类和动物体内的正常菌群之一,也是仔猪生产中常用的益生菌之一,对维持猪肠道菌群平衡、调节小肠绒毛发育、促进养分吸收、增强抗病能力等有多种益生功效。目前,屎肠球菌和粪肠球菌是最常用的益生肠球菌,也是猪肠道中的主要肠球菌,粪便中以屎肠球菌为主。我国《饲料添加剂品种目录(2013)》允许使用的饲料级微生物菌种也包括这两种菌。本文主要对屎肠球菌功能特性及其在养猪生产上的应用进行综述。     

屎肠球菌的特性及其在畜牧生产中的应用研究进展

随着对畜产品需求的增加,人们越来越重视畜产品的安全性。屎肠球菌为常见乳酸菌,是近年来研究较多的益生菌,其代谢产物对病原菌的抑制、肠道菌群稳定和家畜生长具有重要意义,已广泛应用于畜牧生产中,但耐药性和致病性屎肠球菌的相继发现,引发了公众的担忧。因此,如何合理、规范应用屎肠球菌是其在畜牧生产中应用的关键。本文综述了屎肠球菌的生物学特性及其在畜牧生产中的应用研究进展,但抗生素耐药性屎肠球菌的发现,使得屎肠球菌的应用更为谨慎。     

屎肠球菌益生作用研究概述

屎肠球菌是一种益生菌,可以通过吸收动物体内的养分来维持体内肠道菌群的平衡,同时也可以调节动物小肠绒毛的发育,增强其抗病能力等。本文对屎肠球菌的生物学特性、调节胃肠道菌群作用、营养调控作用、益生作用机理、作为饲料添加剂的独特优势以及在药品和食品中的应用等进行了综述,以期为广大同行提供有益参考。     

屎肠球菌的研究进展

屎肠球菌属于肠球菌科,肠球菌属,是人类和动物体内的正常肠道菌群之一。在饲料应用上,屎肠球菌可作为应用广泛的一类益生菌,在宿主体内可以产生多种益生功效。通常情况下该菌并不会引起宿主发病,但当宿主机体免疫力下降时,便可能引起宿主动物发病。由于其具有较强的耐药性,目前并没有可以用来治疗屎肠球菌感染的特效药。本文主要针对屎肠球菌的培养特性、耐药性以及致病性等进行综述,并就目前新型快速检测方法的应用作一简单的介绍和探讨。     

广东省养禽场肠球菌耐药性及毒力因子流行分布特征

旨在调查和分析广东省养禽场肠球菌的亚型屎肠球菌和粪肠球菌耐药性及其毒力因子流行分布特征,为控制禽源肠球菌耐药性传播、保障公共卫生安全提供理论依据。作者于2018年从广东省4个养禽场采集肠道样品493份,进行屎肠球菌和粪肠球菌的分离鉴定;采用琼脂二倍稀释法测定肠球菌的最小抑菌浓度（MIC）;PCR方法检测肠球菌的耐药基因和毒力基因。结果显示：1）共分离到125株肠球菌,其中粪肠球菌84株（鸡源66株,鸭源18株）;屎肠球菌41株,均来自鸡肠道样本。2）菌株对四环素、多西环素、红霉素几乎全部耐药,对氟苯尼考和氯霉素的耐药率高达89.60%和74.40%。屎肠球菌耐药率普遍高于粪肠球菌,而粪肠球菌对环丙沙星和利奈唑胺的耐药率高于屎肠球菌;鸭源粪肠球菌对利奈唑胺的耐药率（94%）显著高于鸡源粪肠球菌（39.4%）,屎肠球菌对利奈唑胺均敏感。从鸡分离的1株粪肠球菌对万古霉素耐药。3）耐药基因在屎肠球菌中的检出率高于粪肠球菌,鸭源分离株检出率高于鸡源。耐药基因tetL、fexA、ermB最为流行,检出率均高于90%。其次是optrA基因,检出率为73.60%,poxtA和fexB的检出率均低于20%。在3株鸭源粪肠球菌中检测出cfr基因。4）已检测的毒力基因中efaA的携带率最高,为63.04%（58/92）,其他依次为gelE（54.35%,50/92）、ace（47.83%,44/92）、asa1（44.57%,41/92）。对环丙沙星及高浓度氨基糖苷类耐药的菌株及携带cfr基因的菌株,大多携带agg、asal、gelE或ace。本研究显示养殖场禽源肠球菌耐药严重,鸭源肠球菌对利奈唑胺耐药率高,耐药基因和毒力基因流行且多样,且检测出人医临床重要抗生素耐药基因,应加强对养禽场肠球菌耐药性监测。     

乌鲁木齐市宠物源粪肠球菌和屎肠球菌耐药性及耐药基因检测

为了解乌鲁木齐市宠物源粪肠球菌和屎肠球菌对临床常用抗菌药物的耐药性及其耐药基因携带情况,在乌鲁木齐市多家宠物医院、警犬基地、犬养殖基地采集宠物(犬和猫)直肠粪样449份进行粪肠球菌和屎肠球菌的分离鉴定,通过琼脂稀释法测定10种抗菌药物的最小抑菌浓度,利用PCR方法检测11种耐药基因。结果分离鉴定出宠物源粪肠球菌和屎肠球菌共计123株,其中粪肠球菌81株,屎肠球菌42株。宠物源粪肠球菌和屎肠球菌对四环素和庆大霉素的耐药率较高,对阿米卡星、恩诺沙星和环丙沙星呈不同程度耐药,对阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林、万古霉素以及利奈唑胺高度敏感,仅部分屎肠球菌对亚胺培南表现耐药。检出aac(6′)/aph(2″)、aph(3′)-Ⅲ、tetM、tetA和optrA耐药基因;其余被检耐药基因未检出。耐药粪肠球菌以同时携带aac(6′)/aph(2″)+aph(3′)-Ⅲ+tetM耐药基因为主;耐药屎肠球菌以携带tetM耐药基因为主。宠物源粪肠球菌与屎肠球菌对被检抗菌药物存在不同程度耐药,均对四环素类药物耐药最严重、对应耐药基因检出率也最高。建议临床治疗应根据细菌耐药性结果进行合理用药,并持续加强对宠物源肠球菌耐药性监测。     

鸽源屎肠球菌的分离鉴定及药敏试验

屎肠球菌属于肠球菌属中的一类,肠球菌是一种重要的条件致病菌,目前已发现的肠球菌种已经增至近32种,常见的是粪肠球菌（E.faecalis）、屎肠球菌（E.faecium）、鸟肠球菌（E.avium）、坚韧肠球菌（E.durans）等,其中具有临床意义的主要是粪肠球菌与屎肠球菌.肠球菌在动物和人的肠道中属于正常存在的菌群,但是异位寄生于各器官时也会引起相应的感染.肠球菌属中的粪肠球菌（旧称粪链球菌）以及屎肠球菌（旧称屎链球菌）一般情况下没有致病性,并且多年来一直用于微生态制剂加以利用,主要配合益生菌制成,可以替代抗生素预防和治疗动物的一些消化道疾病.但是粪肠球菌和屎肠球菌的某些菌株以及肠球菌的某些成员与动物致病性有关,如禽肠球菌（E.avium）、粪肠球菌（E.facalis）、屎肠球菌（E.faecium）、鸡肠球菌（E.gallinarum）.肠球菌可以感染各种年龄阶段的禽,其中屎肠球菌临床上能引起禽的败血症.屎肠球菌在鸡的饲养环境中也普遍存在,能够引起各种日龄的鸡发病[5].本次屎肠球菌感染鸽主要表现为精神沉郁、食欲下降、机体消瘦、腹泻、零星死亡,可初步断定为慢性感染的表现形式.     

利用RFLP分型方法鉴定牛源性链球菌和肠球菌

为分离及种属鉴定引起牛乳腺炎相关的链球菌和肠球菌,本研究于兰州及周边地区采集疑似奶牛乳腺炎乳样382份,通过THB(Todd-Hewitt Broth)固体选择培养基初步分离到67株疑似链球菌或疑似肠球菌。参照已发表文献合成链球菌属16S r RNA和16S~23S r RNA间隔区基因引物序列,扩增分离菌株16S~23S r RNA间隔区序列,产物分别利用AluⅠ和RsaⅠ单酶切消化,并以参考菌株的16S~23S r RNA酶切图谱为参考,对分离株进行限制性片段多态性(RFLP)分类分析;再选取各RFLP类群的任一菌株,扩增其16S r RNA基因并测序,并经NCBI核酸数据库进行比对,结果显示67株疑似链球菌中有53株为粪肠球菌(79.1%)、3株为屎肠球菌(4.5%)、3株为肠道肠球菌(4.5%)、8株为无乳链球菌(11.9%)。结果表明肠球菌属细菌(粪肠球菌、肠道肠球菌、屎肠球菌)与兰州市及周边地区奶牛乳腺炎的发病紧密相关,肠球菌属细菌与链球菌属细菌16S r RNA基因同源性很高,但可以通过分子生物学方法准确区分。     

野生松鼠源屎肠球菌的致病性与耐药性分析

屎肠球菌作为人及动物肠道中的机会致病菌，可在一定条件下引起宿主心内膜炎、败血症等。目前随着动物源致病屎肠球菌相关报道越来越多，其耐药性和致病性研究也日益增多，但野生动物源的相关研究仍较少。本试验为探究北京大兴野生动物园一只赤腹松鼠突然死亡的原因，对死亡赤腹松鼠进行大体剖检、病理组织切片观察、病原菌分离及其耐药性和致病性分析。结果显示，在肺和肾组织切片中观察到类圆或椭圆形呈短链状的蓝色菌丛；从肺、肝、脾以及腹腔积液中均分离出屎肠球菌；药物敏感性试验显示分离菌株均对磺胺异恶唑及泰妙菌素高度耐药；全基因组测序数据分析显示屎肠球菌均属于ST-324型，且都携带毒力基因efaAfm和耐药基因tetM、msrC,核心基因组单核苷酸多态性(SNPs)分析差异较小；小鼠致病性试验发现，分离菌株具有一定的致病性。本研究综合以上结果判断赤腹松鼠死亡原因为屎肠球菌感染导致的败血症。     

一例灰袋鼠致病性屎肠球菌的分离鉴定

为了确定导致灰袋鼠化脓性肺炎的病原,从1只灰袋鼠的肺脏脓汁、肝脏、脾脏中分离到l株革兰氏阳性球菌,并对其进行生化鉴定、16 SrRNA鉴定、药敏试验、病理学观察和小鼠致病性试验。结果表明,袋鼠肺脏支气管和肺泡充血,伴有大量炎性细胞浸润。分离到的细菌通过生化鉴定和16 srRNA鉴定为屎肠球菌,具有α溶血,对8种抗生素产生了耐药,为高水平耐庆大霉素肠球菌(HLGRE),对万古霉素敏感,对小白鼠有致病性。这是国内首次报道灰袋鼠致病性屎肠球菌。     

饲粮中添加屎肠球菌对肉鸡生长性能、血清生化指标、肠道形态和抗氧化功能的影响

本试验旨在研究饲粮中添加不同剂量的屎肠球菌对肉鸡生长性能、血清生化指标、肠道形态和抗氧化功能的影响。试验选用150只1日龄健康罗斯308肉鸡，随机分为3个组，每组5个重复，每个重复10只鸡（公母各占1/2）。对照组饲喂基础饲粮，低剂量屎肠球菌组和高剂量屎肠球菌组分别在基础饲粮中添加500和1 000 mg/kg屎肠球菌菌粉（活菌数为3.46×108CFU/g）。试验期28 d。结果表明：1）与对照组相比，饲粮中添加不同剂量的屎肠球菌对肉鸡各阶段生长性能均无显著影响（P>0.05）。2）与对照组相比，高剂量屎肠球菌组肉鸡血清总蛋白含量显著提高（P<0.05），血清磷含量有提高的趋势（P=0.054）；低剂量屎肠球菌组肉鸡血清钙含量显著降低（P<0.05）。3）与对照组相比，低剂量屎肠球菌组和高剂量屎肠球菌组肉鸡十二指肠和空肠绒毛高度与隐窝深度比值显著提高（P<0.05），十二指肠隐窝深度显著降低（P<0.05）。4）与对照组相比，低剂量屎肠球菌组和高剂量屎肠球菌组肉鸡血清和十二指肠过氧化氢含量显著降低（P<0.05），空肠过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶...     

赛马肠道屎肠球菌的分离鉴定

为初步了解赛马肠道细菌的种类分布情况,以及与赛马细菌性疾病的关系,本试验采集昆明某马场赛马粪便样品进行了细菌的分离培养及16S rRNA基因序列分析,并对筛选出的1株可疑细菌进行了药敏试验。结果显示:该菌的菌落形态、生化特性与屎肠球菌相符;16S rRNA分析表明该菌株与屎肠球菌同源性为100%,即在赛马肠道菌群中存在有屎肠球菌;药敏试验显示该菌对目前常用抗生素仍保持较高的敏感性。本文通过对赛马肠道菌群结构的研究,为赛马可能出现的病症及细菌性疾病的预防和治疗提供一定的指导。     

屎肠球菌(SF68)对小鼠免疫功能的影响

服用适宜剂量的益生菌有益于人体和动物的健康。本试验旨在观察屎肠球菌(SF68)对BALB/c小鼠肠道定植和免疫功能的影响。给6周龄雌性BALB/c小鼠经口罐服屎肠球菌(SF68)。试验结果表明,饲喂屎肠球菌小鼠粪中总厌氧菌和乳酸菌增加(P<0.05),而粪便肠杆菌数量降低(P<0.05)。饲喂屎肠球菌后,小鼠外周血液双阳性(DP)细胞比例,血浆IgG浓度和脾细胞培养上清液中白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)及干扰素-γ(IFN-γ)水平显著增加(P<0.05)。通过本试验证明屎肠球菌SF68可影响小肠微生物菌群并可调节机体的免疫反应说明屎肠球菌具有存活的益生菌特性,可有效调节机体免疫功能。     

羊源屎肠球菌的分离鉴定与生物学特性研究

某养殖场羔羊突然死亡,为了查明死亡原因,采集病死羔羊病变肺脏等进行细菌的分离培养,分离到1株革兰阳性、短链状排列的球菌,在血琼脂培养基上呈β溶血。通过对该菌的16S r RNA进行扩增和序列分析,其与屎肠球菌的同源性高达99%,应用通用引物对16S～23S rRNA的序列进行PCR扩增产生2个条带,分别为522 bp和619 bp。用Vitek 2全自动微生物分析仪鉴定为屎肠球菌,可能性为98%。该菌对万古霉素和米诺环素敏感,对青霉素、庆大霉素等药物表现耐药。结果显示,分离到的细菌为屎肠球菌,且该菌具有多重耐药性,本实验为兽医临床肠球菌的分离和鉴定提供了参考。     

屎肠球菌NCIMB11181对鼠伤寒沙门菌感染肉鸡生产性能、肠道微生物菌群和血液抗氧化功能的影响

本试验旨在研究饲粮添加屎肠球菌对鼠伤寒沙门菌感染肉鸡的生产性能、肠道微生物菌群和血液抗氧化功能的影响。试验选取432只1日龄罗斯308雄性肉鸡,随机分为4个试验组,每组6个重复,每个重复12只鸡。分别在各试验组基础饲粮中添加0、100、200、300 mg/kg屎肠球菌。在11,12日龄时,各个试验组口服鼠伤寒沙门菌(1×109CFU/m L,1 m L/只鸡)。结果:(1)与无添加组相比,饲粮中添加屎肠球菌可显著提高1~21 d,22~35 d和1~35 d日采食量和日增重(P<0.05);(2)与无添加组相比,添加屎肠球菌可显著降低感染前期有害菌大肠杆菌和沙门菌的数量(P<0.05),能显著提高感染前期和后期屎肠球菌的数量(P<0.05);(3)与无添加组相比,屎肠球菌的添加能显著降低感染前期GSH-Px和MDA含量(P<0.05);在感染后期,屎肠球菌组MDA含量显著降低(P<0.05)。表明饲粮中添加屎肠球菌可以缓解鼠伤寒沙门菌感染导致的肉鸡饲料转化效率下降、肠道菌群失调及机体的氧化应激损伤。肉鸡在沙门菌感染的情况下,饲粮中屎肠球菌的适宜添加剂量为200 mg/kg。     

饲粮中添加屎肠球菌对断奶仔猪生长性能、肠道菌群和免疫功能的影响

本试验旨在研究饲粮中添加屎肠球菌对断奶仔猪生长性能、肠道菌群和免疫功能的影响。选用255头(35±1)日龄断奶的"杜×长×大"三元杂交仔猪,随机分为5个组,每个组3个重复,每个重复17头仔猪。对照组饲喂基础饲粮(不添加抗生素和屎肠球菌);抗生素组在基础饲粮中添加8 mg/kg黄霉素和90 mg/kg阿散酸;屎肠球菌3个试验组在基础饲粮中分别添加100、300、500 mg/kg屎肠球菌。试验期为35 d。结果表明:1)与对照组相比,饲粮中添加屎肠球菌对仔猪平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)、料重比(F/G)没有显著影响(P>0.05),但添加100、300 mg/kg的屎肠球菌有提高仔猪ADFI的趋势(P>0.05),添加500 mg/kg的屎肠球菌有降低仔猪F/G的趋势(P>0.05)。与抗生素组相比,饲粮中添加屎肠球菌对仔猪ADG、ADFI、F/G均无显著影响(P>0.05)。2)与对照组相比,饲粮中添加300、500 mg/kg的屎肠球菌显著增加仔猪盲肠中乳酸杆菌的数量(P<0.05);与抗生素组相比,饲粮中添加100、300、500 mg/kg的屎肠球菌对其数量没有显著影响(P>0.05)。与对照组相比,饲粮中添加500 mg/kg的屎肠球菌显著降低仔猪结肠中大肠杆菌的数量(P<0.05),添加300、500 mg/kg的屎肠球菌显著增加仔猪结肠中乳酸杆菌数量(P<0.05);与抗生素组相比,饲粮中添加300、500 mg/kg的屎肠球菌显著增加仔猪结肠中乳酸杆菌数量(P<0.05)。3)与对照组相比,饲粮中添加300 mg/kg的屎肠球菌显著提高仔猪脾脏重量和脾脏指数(P<0.05)。与抗生素组相比,饲粮中添加300、500 mg/kg的屎肠球菌可显著提高仔猪脾脏重量(P<0.05)。4)与对照组相比,饲粮中添加300、500 mg/kg的屎肠球菌显著提高仔猪血液中淋巴细胞数量及淋巴细胞比率(P<0.05),添加100、300、500 mg/kg的屎肠球菌显著提高血清中免疫球蛋白G(IgG)含量(P<0.05),添加300、500 mg/kg的屎肠球菌显著提高血清中免疫球蛋白M(IgM)含量(P<0.05)。与抗生素组相比,饲粮中添加300、500 mg/kg的屎肠球菌显著提高仔猪血液中淋巴细胞比率及血清中IgM含量(P<0.05),添加100、300、500 mg/kg的屎肠球菌显著提高血清中IgG含量(P<0.05)。综上所述,仔猪饲粮中添加屎肠球菌可以改善仔猪生长性能,维持仔猪肠道菌群平衡,有效增强仔猪免疫力,其中以添加500 mg/kg效果最好。     

羊源肠球菌属与屎肠球菌双重PCR检测方法的建立

[目的]建立羊源肠球菌属与屎肠球菌的双重PCR检测方法,对临床分离的菌株进行快速检测。[方法 ]设计肠球菌属特异性和屎肠球菌种特异性引物,建立双重PCR反应体系;评价双重PCR反应的特异性和敏感性;利用混合菌液制备模拟感染样品,确定双重PCR反应对模拟感染样品检测的特异性和敏感性。[结果]建立的双重PCR反应能够特异性的扩增肠球菌属(294 bp)和屎肠球菌(557 bp)DNA片段;该方法对常见的动物源细菌无交叉反应,对肠球菌属的最低检测量为5.71×10-5 ng/μL,对屎肠球菌的最低检测量为5.71×10-4ng/μL;双重PCR反应能够特异性的检测模拟感染样品中的肠球菌属和屎肠球菌,对于模拟感染样品中的屎肠球菌检测量为1×101CFU/m L。[结论]建立的双重PCR检测方法具有特异性强、敏感性高的特点,为快速鉴定屎肠球菌提供了快速、准确的方法。     

鲜蛋表面屎肠球菌耐药性及万古霉素vanA基因检测

为了研究新鲜鸡蛋表面屎肠球菌耐药性和万古霉素A(vanA)基因的携带情况,试验在养鸡场收集新鲜鸡蛋,分离蛋壳表面的屎肠球菌,用16S rDNA通用引物对分离的屎肠球菌进行种属鉴定,K-B纸片琼脂扩散法进行耐药性分析,并检测耐万古霉素屎肠球菌携带vanA基因的情况。结果表明:革兰氏染色镜检可见革兰氏阳性单个、成对或短链状排列的圆形菌体,符合屎肠球菌的染色和形态特征;从200枚鸡蛋样品中分离到38株屎肠球菌,分离率为19%;分离到的屎肠球菌对14种抗生素表现出不同程度的耐药性,耐药谱广,最多发现8重耐药菌;在5株耐万古霉素的菌株中检测到了vanA基因。说明新鲜鸡蛋蛋壳表面的屎肠球菌对抗生素耐受性较高,对屎肠球菌特别是耐万古霉素屎肠球菌的监测具有公共健康意义,需要进一步调查以评估食源性传播给人类带来的风险。