猪源粪肠球菌的基因型及耐药性分析

为了解上海地区规模化猪场中粪肠球菌的耐药性和基因型,2013年3月-2014年5月从上海地区10个规模化养猪场收集到分离鉴定的粪肠球菌133株,采用微量肉汤稀释法对12种抗菌药物进行药敏试验,采用PCR技术分别检测分离株中β-内酰胺类抗生素耐药相关基因(TEM)、氨基糖苷类抗生素耐药相关基因[aac(6’)/aph(2")和aph(3’)-Ⅲ和ant(6)-Ⅰ]、四环素耐药相关基因(tetM)、红霉素耐药相关基因(ermB和mefA)和万古霉素耐药相关基因(vanA和vanB)。结果显示,在133株粪肠球菌中,耐药基因ermB、tetM、TEM、ant(6)-Ⅰ、aac(6’)/aph2"、aph(3’)-Ⅲ、vanA的检出率分别为:95.5%(127/133)、91.0%(121/133)、63.2%(84/133)、45.9%(61/133)、42.1%(56/133)、24.1%(32/133)、3.0%(4/133);未检出mefA和vanB基因的菌株。分离菌株对12种抗菌药物的耐药性较为严重,且以6~9耐为主要耐药株,占81.2%。试验表明,上海地区猪源粪肠球菌多重耐药现象严重,携带抗菌药物相关耐药基因是导致分离株耐药的主要原因。     

牛源肠球菌耐药基因与表型关系及16S rDNA同源性分析

为探究牛源肠球菌耐药性基因型与表现型之间的关系,采用微量肉汤稀释法分析62株肠球菌对7种抗生素的耐药表型,采用PCR技术检测相关的抗药基因,并分析62株肠球菌16SrDNA的同源性。结果显示,98.4%,98.4%,63.9%,6.5%,6.5%的菌株分别对万古霉素、红霉素、四环素、氯霉素和庆大霉素不敏感,100.0%菌株对卡那霉素敏感。100.0%的菌株均携带aphA3、aadA、aadE和aac6 aph2基因;98.4%,98.4%,98.4%,95.2%,88.7%,72.6%,3.2%的菌株分别携带ermB、tet(M)、tet(O)、aac、mefA、vanB和vanA基因。62株肠球菌中均未检测出catpIP基因。结果表明,红霉素的耐药性(98.4%)与ermB(98.4%)基因呈正相关,与mefA(88.7%)的相关性也较好。氯霉素的耐药表型(6.5%)与catpIP(0)基因的相关性较好,万古霉素耐药表型(98.4%)与vanB(73.6%)基因相关性较好,其他耐药表型与检测的基因无明显相关性。16SrDNA分析表明,62株肠球菌按同源性可分为A、B、C、D、E、F这6种类型,其中E型与致病株EU717958的同源性较近,F型与致病株EU717964的同源性较近。     

乌鲁木齐市宠物源粪肠球菌和屎肠球菌耐药性及耐药基因检测

为了解乌鲁木齐市宠物源粪肠球菌和屎肠球菌对临床常用抗菌药物的耐药性及其耐药基因携带情况,在乌鲁木齐市多家宠物医院、警犬基地、犬养殖基地采集宠物(犬和猫)直肠粪样449份进行粪肠球菌和屎肠球菌的分离鉴定,通过琼脂稀释法测定10种抗菌药物的最小抑菌浓度,利用PCR方法检测11种耐药基因。结果分离鉴定出宠物源粪肠球菌和屎肠球菌共计123株,其中粪肠球菌81株,屎肠球菌42株。宠物源粪肠球菌和屎肠球菌对四环素和庆大霉素的耐药率较高,对阿米卡星、恩诺沙星和环丙沙星呈不同程度耐药,对阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林、万古霉素以及利奈唑胺高度敏感,仅部分屎肠球菌对亚胺培南表现耐药。检出aac(6′)/aph(2″)、aph(3′)-Ⅲ、tetM、tetA和optrA耐药基因;其余被检耐药基因未检出。耐药粪肠球菌以同时携带aac(6′)/aph(2″)+aph(3′)-Ⅲ+tetM耐药基因为主;耐药屎肠球菌以携带tetM耐药基因为主。宠物源粪肠球菌与屎肠球菌对被检抗菌药物存在不同程度耐药,均对四环素类药物耐药最严重、对应耐药基因检出率也最高。建议临床治疗应根据细菌耐药性结果进行合理用药,并持续加强对宠物源肠球菌耐药性监测。     

新疆北疆地区猪源粪肠球菌的耐药性分析

为了解新疆北疆地区猪源粪肠球菌的耐药性及相关耐药基因型的分布情况,本试验采用K-B（Kirby-Baller）琼脂扩散法检测了49株猪源粪肠球菌对8种抗菌药物的敏感性,并采用PCR法对9种相关耐药基因进行检测并测序,测序结果与GenBank中的相应基因序列比对。药敏试验结果显示,分离菌对链霉素耐药率最高,其次为青霉素和红霉素,对呋喃妥因、氨苄西林高度敏感。PCR检测结果显示,β-内酰胺类耐药基因tem的检出率最高,为93.88%,其次是四环素类耐药基因tetM,为85.71%,喹诺酮类基因gyrA和parC检出率均为42.86%,氨基糖苷类耐药基因aph（3'）-Ⅲ、aac（6'）/aph2″和ant（6'）-Ⅰ的检出率分别为36.73%、16.33%和16.33%,未检出mefA和ermB基因。本试验从表型与基因型分析发现,北疆地区猪源粪肠球菌的多重耐药现象非常严重,且其耐药表型与基因型并不完全一致。     

新疆昌吉地区某规模化猪场不同日龄猪源粪肠球菌耐药性及耐药基因分析

为了解新疆昌吉地区某规模化猪场不同日龄猪粪源粪肠球菌对被检抗菌药物的耐药性和耐药基因携带情况,指导临床针对不同日龄的猪合理用药。采集不同日龄猪肛拭子样品262份进行粪肠球菌分离鉴定,采用琼脂稀释法进行11种抗菌药物最小抑菌浓度的测定,用PCR进行10种耐药基因的检测。共分离鉴定163株粪肠球菌,分离率62.2%(163/262)。不同日龄猪源粪肠球菌耐药严重程度由高到低依次为保育猪源、妊娠猪源、后备猪源、育肥猪源,对红霉素、四环素、利福平和多西环素的耐药率都高达90.0%以上。保育猪的耐药率最高,对氟苯尼考和利奈唑胺的耐药率高于其他猪源粪肠球菌;妊娠猪对恩诺沙星的耐药率高于其他猪源粪肠球菌。保育猪多药耐药在5～9耐分布,妊娠猪以7耐为主,后备猪以6耐为主,育肥猪以5耐为主。cfr与vanA基因未检出,分离株tetM、aac(6')/aph(2")、aph(3')-Ⅲ、ermB耐药基因的携带率均高于98.7%。此外,检出近年来新发现的恶唑烷酮类耐药基因optrA(13.5%)。该猪场不同日龄粪肠球菌呈现多药耐药率高、耐药谱广、耐药基因携带率高的特点,建议加强抗菌药物的规范使用,结合药敏试验结果,针对不同日龄猪只合理使用抗菌药物。     

新疆北疆地区猪源粪肠球菌的耐药性分析

为了解新疆北疆地区猪源粪肠球菌的耐药性及相关耐药基因型的分布情况,本试验采用K-B(Kirby-Baller)琼脂扩散法检测了49株猪源粪肠球菌对8种抗菌药物的敏感性,并采用PCR法对9种相关耐药基因进行检测并测序,测序结果与GenBank中的相应基因序列比对。药敏试验结果显示,分离菌对链霉素耐药率最高,其次为青霉素和红霉素,对呋喃妥因、氨苄西林高度敏感。PCR检测结果显示,β-内酰胺类耐药基因tem的检出率最高,为93.88%,其次是四环素类耐药基因tetM,为85.71%,喹诺酮类基因gyrA和parC检出率均为42.86%,氨基糖苷类耐药基因aph(3′)-Ⅲ、aac(6′)/aph2″和ant(6′)-Ⅰ的检出率分别为36.73%、16.33%和16.33%,未检出mefA和ermB基因。本试验从表型与基因型分析发现,北疆地区猪源粪肠球菌的多重耐药现象非常严重,且其耐药表型与基因型并不完全一致。     

单增李斯特菌耐药基因tetM、ermB接合转移

为探讨食品源单增李斯特菌四环素耐药基因tetM和红霉素耐药基因ermB是否能向粪肠球菌水平传播,选择2株耐受四环素(tetM)和1株耐受红霉素(ermB)的单增李斯特菌为供体,1株耐受卡那霉素的粪肠球菌为受体菌进行滤膜接合试验。对接合子tetM和ermB基因及相关的转座子Tn196、Tn197进行PCR检测。结果显示,分别获得17,23株耐四环素接合子,28株耐红霉素接合子,接合转移率分别为3.4×10~(-7),4.6×10~(-7),5.6×10~(-7)。接合子均产生了与供体菌一致的四环素和红霉素耐药表型,并且PCR扩增到相应的tetM和ermB基因,其序列与供体单增李斯特菌的耐药基因序列一致,但未扩增到相应的转座子基因;证实单增李斯特菌四环素耐药基因tetM及红霉素耐药基因ermB可以向粪肠球菌水平传播并发挥耐药作用。     

鱼源维氏气单胞菌的耐药性研究

为检测7株鱼源维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)的耐药基因和耐药表型的分布情况,试验采用PCR法检测分离株中氨基糖苷类耐药基因(aac(3)-Ⅱa、aac(6')-Ⅰb、ant(3")-Ⅰa和aph(3')-Ⅱa),磺胺类耐药基因(Sul1、Sul2和Sul3)和四环素类耐药基因(tetA、tetC和tetM),运用Kirby-Bauer纸片扩散法检测7株鱼源维氏气单胞菌分离株对22种常用抗生素的敏感性。结果表明,可检出耐药基因aac(3)-Ⅱa(71.4%)、aac(6')-Ⅰb(85.7%)、Sul2(85.7%)和tetA(28.5%);未检出ant(3")-Ⅰa、aph(3')-Ⅱa、Sul1、Sul3、tetC和tetM基因。7株维氏气单胞菌对磷霉素(100%)、多黏霉素B(100%)、痢特灵(85.7%)、奥复星(71.4%)较敏感;对氨苄西林(100%)、乙酰螺旋霉素(100%)、复方新诺明(85.7%)、磺胺异恶唑(85.7%)、四环素(85.7%)等耐药。这说明耐药基因和耐药表型之间存在一定的相关性。     

98株鸭源致病性大肠杆菌氨基糖苷类耐药基因型与耐药表型的比较

旨在调查鸭致病性大肠杆菌氨基糖苷修饰酶耐药基因(AMEs基因)的携带情况,探讨耐药基因与氨基糖苷类抗生素耐药表型的相关性。对98株鸭致病性大肠杆菌采用了K-B法,选用氨基糖苷类抗生素链霉素、新霉素、庆大霉素、阿米卡星、大观霉素和卡那霉素进行药敏试验,用建立的检测氨基糖苷类AMEs主要基因的四重PCR方法对上述菌株进行分子检测,并随机选取耐药基因ant(3″)-Ⅰa、aac(3)-Ⅱa和aph(3′)-Ⅱa各3个阳性扩增进行克隆测序,对药敏试验结果和基因检测结果进行比较分析。结果表明,98株鸭致病性大肠杆菌有67株对上述氨基糖苷类药物中的一种或多种耐药,耐药率为68.4%(67/98);有49株扩增出AMEs基因,AMEs基因的检出率为50%(49/98),其中ant(3″)-Ⅰa的检出率为30.6%(30/98),aac(3)-Ⅱa为13.3%(13/98),aph(3′)-Ⅱa为3.1%(3/98),ant(3″)-Ⅰa+aac(3)-Ⅱa为2.0%(2/98)、aac(3)-Ⅱa+aph(3′)-Ⅱa为1.0%(1/98),未检出aac(6′)-Ⅰb基因;序列分析结果表明,扩增产物与GenBank中的相应序列有很高的同源性(99%);AMEs耐药基因与耐药表型的符合率为73.1%(49/67),符合率从高到低依次为大观霉素60%(3/5)、庆大霉素55%(11/20)、链霉素33.3%(22/66)、卡那霉素19%(4/21)、新霉素12.5%(1/8)、阿米卡星0%(0/3)。另外有4株细菌检测到相关耐药基因但耐药表型为敏感,而有22株耐药表型为耐药却未检测到相关耐药基因。鸭致病性大肠杆菌氨基糖苷类耐药基因以ant(3″)-Ⅰa和aac(3)-Ⅱa两种为主,耐药性与相关耐药基因的检出率基本呈正相关。     

猪源链球菌对大环内酯类主要耐药基因的检测

为了解猪源链球菌对红霉素相关耐药基因ermB、ermA和mefA的分布,对河北省及辽宁部分地区的64株猪源链球菌分离株,用PCR方法检测51株红霉素耐药株和13株红霉素敏感株中ermB、ermA和mefA基因。结果显示,耐药菌株中ermB基因的检出率为98.04%(50/51),ermA的检出率为25.49%(13/51),没有检出mefA基因。初步表明河北省及辽宁部分地区的猪源链球菌对红霉素的耐药机制以ermB基因介导为主。20株菌的ermB基因核苷酸序列与GenBank中同源序列相似性为99%～100%。与参照序列AJ972604.1相比,20株菌的ermB氨基酸序列的突变位点较少,主要有Thr 75→Ser、Ser 100→Asn、Arg 118→His、Leu 175→Ile,以100和118位突变为主,进一步说明ermB基因是相对稳定的。