氟暴露对大鼠内分泌腺的影响

试验旨在研究氟暴露对大鼠内分泌系统的影响。选取24只健康SD大鼠随机分为2组,通过饮水添加221 mg/L氟化钠(相当于100 mg/L氟离子),建立氟暴露大鼠模型。分别在试验处理第30 d和第60 d采集血液和甲状腺,运用放射免疫法检测血清中甲状腺素、肾上腺素、去甲肾上腺素和胰岛素含量。结果表明,加氟组大鼠甲状腺指数、三碘甲状腺原氨酸(T3)、四碘甲状腺原氨酸(T4)、血清游离三碘甲腺原氨酸(FT3)和血清游离四碘甲腺原氨酸(FT4)含量显著降低(P0.05),但血清肾上腺素、去甲肾上腺素和胰岛素含量无显著变化(P0.05)。研究表明,过量的氟对大鼠血清甲状腺激素含量影响较大。     

绵羊甲状腺细胞原代培养及鉴定

试验旨在建立一套完整的绵羊甲状腺细胞的原代培养方法,为绵羊甲状腺功能的体外研究奠定基础。通过常规消化分离得到甲状腺滤泡上皮细胞,光镜下对不同培养时间的细胞进行形态学观察,并结合RT-PCR、细胞免疫荧光和ELISA,对培养的绵羊甲状腺细胞从形态,甲状腺球蛋白(TG)、甲状腺过氧化物酶(TPO)、促甲状腺激素受体(TSHR)特异基因mRNA表达,TG特异抗原蛋白表达和甲状腺激素T3、T4的分泌功能等方面进行鉴定。结果显示,绵羊甲状腺细胞在体外呈贴壁式生长,具有上皮样细胞特点;TG染色呈胞浆阳性,具有特异TPO、TG、TSHR mRNA表达及分泌T3、T4的功能,但T3、T4的分泌量随培养时间的延长呈递减趋势。本研究成功地建立了简便可行的绵羊甲状腺细胞的原代培养方法,为深入研究绵羊甲状腺的功能提供了试验平台。     

氟化钠对附睾形态结构及紧密连接相关基因表达的影响

为了研究氟对小鼠附睾结构形态及紧密连接相关基因的影响,将60只健康雄性小鼠随机分成4组,对照组饮用蒸馏水,3个氟处理组分别饮用含氟化钠（NaF） 25、50和100 mg/L的蒸馏水。染氟60 d,取小鼠股骨,采用氟离子选择电极法测其氟含量;取右侧附睾制作石蜡切片,HE染色后进行组织形态结构观察;左侧附睾提取RNA,采用实时荧光定量PCR技术（qRT-PCR）检测紧密连接相关基因的表达。结果显示,与对照组相比,氟处理组小鼠股骨氟含量随摄氟剂量的增加呈剂量依赖性,其中50、100 mg/L剂量组差异极显著（P<0.01）;氟处理组附睾尾管腔厚度极显著增厚（P<0.01）;紧密连接相关基因Claudin-2 mRNA表达量极显著下降（P<0.01）,100 mg/L剂量组ZO-1 mRNA表达量显著下降（P<0.05）。摄入过量NaF影响附睾形态及其紧密连接相关基因的表达,从而可能对血-附睾屏障造成损伤。     

氟对不同日龄雄性大鼠睾丸组织中表皮生长因子及其受体表达的影响

为探讨氟对不同日龄雄性Wistar大鼠睾丸组织中表皮生长因子（EGF）及其受体（EGFR）表达的影响,选用40日龄雄性Wistar大鼠200只,随机分为2组分别饮用含150mg/L氟化钠的去离子水和去离子水,并于50,80,100,120日龄时处死大鼠,对睾丸组织中EGF及其EGFR的表达情况进行分析。结果表明,染氟组50日龄时睾丸组织间质细胞、精原细胞和生精细胞中EGF的表达量极显著下降（P〈0.01）,精子细胞和管腔脱落物中EGF的表达量降低不明显（P〉0.05）;80,100,120日龄时虽有下降趋势,但无统计学意义（P〉0.05）。而染氟组睾丸组织中EGFR的表达量在50,80,100日龄时均降低,但50,80日龄睾丸组织精子细胞和100日龄睾丸组织曲细精管管腔脱落物中EGFR的表达量极显著下降（P〈0.01）,50日龄时生精细胞中EGFR的表达量显著降低（P〈0.05）;而120日龄时睾丸组织中EGFR的表达量均增高,且管腔脱落物中极显著增高（P〈0.01）。证明氟可降低雄性Wist-ar大鼠性成熟时EGF的表达量以影响精子的生长发育,长期抑制EGF的表达使EGFR的表达增高影响生殖功能。     

氟对鸡甲状腺摄碘功能的影响

为探讨氟对鸡甲状腺摄碘功能的影响，选用250只I日龄蛋鸡，随机分为5组，每组50只，饲喂相同的全价日粮。第I组：正常对照组,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组在日粮中添加不同水平的氟化钠，使日粮中氟的含量分别为500，1000，1500，2000mg/kg，实验期为150d，每隔30d采集血样，测定血清中氟含量、甲状腺中碘含量，观察试验鸡的临床表现，结果表明，成功地复制出了不同程度的鸡慢性氟中毒模型；实验鸡日粮含碘量正常，各中毒组甲状腺中碘含量在整个实验期内均不同程序地低于对照组，呈明显的剂量-效应和时间-效应关系，甲状腺中碘含量变化和相应时期的血清氟含量间呈显著的负相关（r=-0.814)。说明氟能明显地抑制甲状腺摄取和聚集碘的能力，干扰碘的正常代谢，进而影响整个甲状腺的结构和功能。     

氟对鸡甲状腺中碘代谢的影响

为探讨氟对鸡甲状腺中碘代谢的影响，选用250只1日龄蛋鸡，随机分为5组，每组50只，饲喂相同的全价日粮。第Ⅰ组：正常对照组，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ组在日粮中添加不同水平的氟化钠，使日粮中氟的含量分别为500，1000，1500和2000mg/kg，试验期为150d，每隔30d采集血样，测定血清中氟含量、甲状腺中碘含量，观察试验鸡的临床表现。成功地复制出不同程度的鸡慢性氟中毒模型，试验鸡日粮含碘量正常。结果表明各中毒组甲状腺中碘含量在整个试验期内均不同程度地低于对照组，呈明显的剂量－效应和时间－效应关系。甲状腺中碘含量变化和相应时期的血清氟含量间呈显著的负相关（r=-0.814)。说明氟能明显地抑制甲状腺摄取和聚集碘的能力，干扰碘的正常代谢，进而影响整个甲状腺的结构和功能。     

蓖麻蛋白对人外周血B淋巴细胞的作用及相关基因表达的研究

试验旨在研究蓖麻蛋白对人外周血B淋巴细胞（IM-9）毒性作用及对相关基因表达的影响。将提取的蓖麻蛋白按不同浓度添加到培养基培养6、12 h,研究剂量－时间效应,确定半数抑制浓度,然后以半数抑制浓度培养细胞2、6、10、12 h,在每个时间段检测免疫相关基因CD40、IL-1β、TNF-α和凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达情况。结果表明,蓖麻蛋白对IM-9细胞的毒性作用随浓度和时间的增加而增强。取接近半数抑制浓度20 ng/mL作用IM-9细胞2、6、10、12 h,免疫相关基因中,TNF-α和CD40基因在6 h试验组表达量与对照组相比显著升高（P<0.05）,10、12 h达到极显著水平（P<0.01）;IL-1β基因表达量试验组、对照组间差异不显著（P>0.05）。凋亡基因中,与对照比相比,试验组Bax基因表达量10 h极显著降低（P<0.01）,12 h显著降低（P<0.05）;Bcl-2基因表达量4个时间段均达到显著水平（P<0.05）,2、12 h达到极显著水平（P<0.01）;Caspase-3基因除6 h表达量降低外,其他时间段表达量均显著升高（P<0.05）,2 h为极显著水平（P<0.01）。表明蓖麻蛋白能显著影响IM-9细胞的基因表达,TNF-α和CD40基因是两个潜在用IM-9细胞评价蛋白毒性的检测基因。     

高氟低碘对老年大鼠肺脏细胞DNA损伤的影响

研究高氟低碘对老年大鼠肺脏细胞DNA损伤的影响。健康离乳Wistar大鼠21只,随机分为4组：对照组（5只）,饲喂大鼠标准日粮,饮自来水;高氟组（5只）,饲喂大鼠对照日粮,饮100 mg/L氟化钠（NaF）去离子水;低碘组（5只）,饲喂低碘日粮（定做）,饮去离子水;高氟低碘组（6只）,饲喂低碘日粮,饮100 mg/L氟化钠（NaF）去离子水。在大鼠20月龄时,处死采取肺脏组织,检查其DNA的损伤情况。高氟组、低碘组和高氟低碘组的老年大鼠肺细胞拖尾率比对照组显著增高（P＜0.01）,高氟低碘组大鼠肺细胞拖尾率比高氟组、低碘组高,并且均有差异显著性（分别为P＜0.01和P＜0.05）;高氟组、低碘组和高氟低碘组老年大鼠肺细胞的拖尾长度比对照组显著增长,显著性差异分别为P＜0.01、P＜0.05 和P＜0.01。高氟低碘组大鼠肺细胞的拖尾长度比高氟组及低碘组增长,与低碘组有差异显著性（P＜0.01）,但与高氟组差异不显著（P＞0.05）;高氟组和高氟低碘组老年大鼠肺细胞DNA损伤主要是Ⅲ级损伤（Ⅲ级分别为70.00%和79.31%）。低碘组的肺细胞DNA损伤进入Ⅱ级和Ⅲ级范围的比较多,并且Ⅲ级占有率较高（Ⅱ级为31.25%;Ⅲ级为40.62%）。结果表明,高氟、低碘、高氟低碘都影响了大鼠肺脏细胞的DNA损伤。     

孕酮处理对蛋鸡蛋壳钙化过程中CaBP-d28k基因表达的影响

实验旨在研究孕酮对蛋鸡CaBP-d28k基因表达的影响。对产蛋高峰期蛋鸡进行孕酮和孕酮受体拮抗剂(RU-486)处理,利用实时荧光定量PCR技术(QRT-PCR),测定在蛋壳形成过程中输卵管子宫部钙结合蛋白(CaBP-d28k)、孕酮受体(PGR)的表达量;同时对血液中钙离子和孕酮浓度变化进行测定。结果表明:孕酮处理后,血液中钙离子浓度显著降低(P<0.05),输卵管子宫部CaBP-d28k表达量也显著降低(P<0.05);孕酮受体拮抗剂处理后,血液中钙离子浓度显著升高(P<0.05),输卵管子宫部CaBP-d28k表达量极显著升高(P<0.01)。结果提示,在蛋壳钙化过程中,孕酮对CaBP-d28k表达和钙离子转运起负调控作用。     

镉及α-硫辛酸对大鼠肝脏GJIC功能的影响

为探讨镉及α-硫辛酸(α-LA)对大鼠肝细胞缝隙通讯功能(GJIC)的影响,将30只100g左右SD雌性大鼠随机均分为3组:对照组(自由饮水及超纯水灌胃)、镉组(50mg/L醋酸镉自由饮水及超纯水灌胃)、镉与α-LA共同处理组(50mg/L醋酸镉自由饮水及α-LA灌胃50mg/kg)。12周后,采用荧光染料标记传输示踪法(IL/DT)测定GJIC功能,免疫印迹检测大鼠肝脏中Cx43、p-Cx43、Cx32蛋白表达变化,荧光定量PCR法检测大鼠肝脏中Cx32、Cx26、Cx43mRNA表达量的变化。IL/DT结果显示,大鼠长时间饮用醋酸镉后,肝脏细胞间荧光黄两侧扩散距离极显著减少(P<0.01),α-LA处理后极显著提高(P<0.01)。肝脏中Cx43、p-Cx43、Cx32蛋白表达量呈显著或极显著的降低,Cx43、Cx32、Cx26mRNA转录基因表达也呈显著或极显著的降低(P<0.05或P<0.01),α-LA处理后都有显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01)。结果表明:长期饮用醋酸镉可以抑制大鼠肝细胞GJIC,可能是连接蛋白或基因表达减少,α-LA能缓解镉对GJIC的影响。     

丁酸钠通过AMPK通路调控LPS造成牛乳腺上皮细胞脂代谢紊乱的作用机制

通过向脂多糖（LPS）诱导牛乳腺上皮细胞系（MAC-T）脂代谢紊乱模型中添加不同浓度（2、8、16 μmol·L^-1）的丁酸钠,探讨其对细胞脂代谢的调控机理及炎症损伤的修复作用。分别用1 000 ng·mL^-1 LPS刺激MAC-T细胞9 h后,检测细胞脂滴面积及三酰甘油（TG）含量;用不同浓度的丁酸钠刺激MAC-T细胞12 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率;试验共分为5组：对照组、LPS处理组、2 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组、8 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组和16 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组,分别对细胞TG含量、AMPK信号通路蛋白、脂代谢关键基因以及相关炎症因子进行检测。结果显示：LPS会造成MAC-T细胞总脂滴面积显著下降（P<0.05）,TG含量极显著下降（P<0.01）;不同浓度的丁酸钠对MAC-T细胞凋亡率没有影响;与对照组相比,LPS处理组TG含量极显著下降（P<0.01）、P-AMPK表达水平显著上升（P<0.05）、脂合成代谢相关基因ACC、SCD-1以及FAS mRNA表达水平均显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）下降、脂分解代谢相关基因CPT-1、CPT-2以及ACO mRNA表达水平均显著上升（P<0.05）、炎症因子TNF-α和IL-6含量显著上升（P<0.05）;与LPS处理组相比,（2、8、16 μmol·L^-1）丁酸钠+LPS处理组TG含量有一定程度上升,P-AMPK表达水平下降,脂合成代谢相关基因表达水平上升,脂分解代谢相关基因表达水平有一定程度下降,炎症因子TNF-α和IL-6含量下降。本研究表明丁酸钠会通过AMPK通路激活脂合成代谢,调控TG的合成,并且对MAC-T细胞的炎症损伤具有一定的缓解作用。     

甘氨酰谷氨酰胺二肽对黄羽肉鸡肝脏脂肪代谢的影响及其机制的研究

选择360只1日龄优质黄羽肉鸡，随机分为4组，分别饮用凉开水配制的浓度为0、0．01、0．05和0．10mg／L的甘氨酰谷氨酰胺（Gly—Gin）二肽溶液，连续饮用41d。用甘油三酯试剂盒测定肝脏总甘油三酯的含量。采用相对定量RT—PCR的方法来检测ACC（acetyl—CoAcarboxylase）和PPAR0a（peroxisomeproliferator—activatedreceptorsa）mRNA的表达水平。试验结果表明：①Glv—Gln二肽能够呈现剂量依赖性的降低肝脏4CCmRNA的表达水平，0．10mg／LGly—Gin二肽处理组较对照组差异显著（P〈0．05）。②Glv—Gln二肽能够显著上调只附R仅基因mRNA的表达水平，其中0．05mg／LGly—Gln二肽处理组较对照组差异显著（P〈0．05）。③Gly—Gln二肽具有提高肝脏甘油三酯含量的趋势，但差异不显著（P〉0．05）。以上结果提示，Glv—Gln二肽能够通过降低肝脏甘油三酯的合成，促进代谢，从而减少脂肪沉积水平。     

Effects of Sodium Fluoride on the Morphological Structure of the Epididymis and the Expression of Tight Junction Genes

The purpose of this study was to examine the effects of fluoride on epididymal morphological structure and mRNA expression of tight junction genes.60 healthy male mice were divided into four groups randomly, including control group (distilled water) and 25,50,100 mg NaF/L groups, respectively. After 60 days, the thighbones were collected and fluoride contents were determined by fluorine ion selective electrode method. Paraffin slides of right epididymis with HE stain were produced to evaluate epididymal morphological structure under light microscope. The left epididymis were collected to isolate total RNA and detect the mRNA expression of tight junction genes by qRT-PCR. The results showed that the fluoride contents of thighbones increased in a dose-dependent manner, and were extremely significantly higher in 50 and 100 mg/L groups than those in control group (P<0.01).NaF extremely significantly increased the thickness of cauda epididymal pipe wall in fluoride groups (P<0.01) and the Claudin-2 mRNA expressions in fluoride groups were extremely significantly decreased (P<0.01) and the ZO-1 mRNA expression in 100 mg/L group was significantly decreased (P<0.05) as compared with control group. In conclusion, excessive NaF ingestion adversely affected epididymal morphological structure and mRNA expressions of Claudin-2 and>ZO-1,which might contribute to the damage of blood-epididymal barrier.     

亮氨酸对猪胎盘滋养层细胞增殖及氨基酸转运的影响

为研究亮氨酸(Leu)对猪胎盘滋养层细胞(pTr)增殖、凋亡以及氨基酸转运载体表达的影响及其机制,本试验用不同浓度Leu(0、1、10 mmol/L)分别处理pTr细胞24 h和48 h后,使用荧光定量PCR技术检测pTr细胞增殖和凋亡相关基因、氨基酸转运载体以及mTOR信号通路关键蛋白等的mRNA表达水平。结果表明:Leu处理pTr细胞24 h后,1 mmol/L试验组的SNAT1(P<0.01)、4E-BP1 (P<0.05)和eIF4G(P<0.05)的mRNA相对表达量低于对照组;Leu处理pTr细胞48 h后,1 mmol/L试验组LAT1(P<0.05)、4E-BP1(P<0.01)的mRNA相对表达量低于对照组,10 mmol/L试验组CDK4(P<0.05)、4E-BP1 (P <0.01)、SNAT1 (P <0.01)、SNAT2 (P <0.01)、LAT1 (P <0.01)以及rBAT (P <0.05)的mRNA相对表达量也低于对照组;Leu处理pTr细胞24 h和48 h后,10 mmol/L组mTORC1的mRNA相对表达量较对照组和1 mmol/L组均极显著提高(P<0.01)。可见,10 mmol/L Leu会抑制pTr细胞的增殖活力,并可能通过mTOR信号通路的介导,降低了pTr细胞氨基酸转运载体的表达。     

油酸和亚油酸对山羊乳腺细胞甘油三酯含量及乳脂合成相关基因表达的影响

为探讨外源添加油酸和亚油酸对体外培养的奶山羊乳腺上皮细胞甘油三酯(TG)含量和乳脂肪合成相关基因表达的影响,试验以奶山羊乳腺上皮细胞为研究对象,分别用0、50、100、200μmol/L油酸和0、20、40、80μmol/L的亚油酸处理细胞24h,检测细胞内TG的含量;采用实时荧光定量PCR法检测细胞内乳脂合成相关基因mRNA水平的变化。结果显示,100、200μmol/L的油酸和40、80μmol/L亚油酸均显著促进细胞内TG的合成(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果表明,添加100、200μmol/L油酸可显著上调二酰甘油酰基转移酶2(DGAT2)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)及脂肪酸合成酶(FASN)基因的表达(P<0.05),显著抑制硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)基因的表达(P<0.05),而对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因的表达无显著影响(P>0.05)。添加20μmol/L亚油酸可显著抑制ACC和FASN基因的表达(P<0.05);亚油酸浓度为40和80μmol/L时可显著上调DGAT2基因的表达(P<0.05),抑制SCD1和SREBP1基因的表达(P<0.05),对ACC、FASN和PPARγ基因表达均无显著影响(P>0.05)。综上所述,100～200μmol/L油酸和40～80μmol/L亚油酸对奶山羊乳腺上皮细胞乳脂肪合成具有较好的促进效果。     

褪黑素对脂多糖刺激的滩羊骨骼肌卫星细胞炎性因子表达的影响

试验旨在探究褪黑素（MLT）对脂多糖（LPS）诱导的滩羊骨骼肌卫星细胞炎性反应的影响。选取滩羊妊娠30日龄胎儿为研究材料,使用Ⅳ型胶原酶分离获得滩羊骨骼肌卫星细胞并进行体外培养,添加相应的诱导试剂对滩羊骨骼肌卫星细胞进行诱导分化,利用免疫荧光检测骨骼肌卫星细胞表面标记物CD29、CD44、CD73及Vimentin的表达;在无胎牛血清的培养基中添加不同浓度（0、5、8和10 μg/mL）的LPS培养骨骼肌卫星细胞,利用实时荧光定量PCR （qRT-PCR）检测白细胞介素-6（IL-6）、IL-8和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等炎性相关因子mRNA水平变化,筛选最佳的LPS处理浓度;在无胎牛血清的培养基中添加不同浓度（0.1和0.5 μmol/L） MLT与最佳浓度LPS共培养骨骼肌卫星细胞,利用实时荧光定量PCR检测IL-6、IL-8和干扰素-γ（IFN-γ）等炎性相关因子mRNA水平变化。免疫荧光结果显示,滩羊骨骼肌卫星细胞表面标志物CD29、CD44、CD73及Vimentin表达呈阳性,且具有诱导成肌、成脂和成骨分化的特性。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,不同浓度的LPS处理均可显著增加细胞炎性相关因子基因的表达（P<0.05）,并且8 μg/mL LPS处理时炎性相关因子mRNA表达最强;当MLT与LPS共培养骨骼肌卫星细胞时,与LPS单独处理相比,0.5 μmol/L MLT与LPS共同处理组中IL-6 mRNA表达水平显著降低（P<0.05）。综上表明,MLT具有缓解LPS刺激的滩羊骨骼肌卫星细胞炎性反应的作用。本试验结果为进一步开展MLT缓解LPS诱导的骨骼肌卫星细胞炎性反应的调控机制研究奠定了基础。     

精氨酸对干扰素-tau处理牛子宫内膜上皮细胞基因表达的影响

试验旨在研究精氨酸（Arg）对干扰素-tau（interferon-tau,IFNT）处理的牛子宫内膜上皮细胞的调控作用及其可能的机制。将牛子宫内膜上皮细胞接种至6孔细胞培养板中,当达到70%~80%融合度时,向细胞培养基中加入不同浓度的IFNT（0、100 ng/mL）,12 h后收集细胞检测未折叠蛋白反应（unfolded protein response,UPR）通路相关基因的表达情况;用不同浓度（0、0.05、0.1、0.2、0.5、1、2 mmol/L）Arg处理牛子宫内膜上皮细胞,24 h后用CCK8法检测其对增殖率的影响,筛选出Arg的最佳作用浓度;将子宫内膜上皮细胞随机分为Arg饥饿组、Arg饥饿+IFNT处理组、Arg添加+IFNT处理组,在Arg饥饿或添加处理6 h后加入100 ng/mL IFNT,IFNT处理12 h后检测UPR通路（BiP、PERK、CHOP、ATF6）、凋亡（BAX、Caspase9）和容受性（HOXA10）相关基因表达情况。结果显示,IFNT刺激可诱导牛子宫内膜上皮细胞UPR通路相关基因BiP、PERK、CHOP、ATF6的表达显著上调;0.5 mmol/L Arg可显著提高牛子宫内膜上皮细胞的增殖率（P<0.05）;Arg缺失可显著上调IFNT诱导下牛子宫内膜上皮细胞中BiP、PERK、CHOP、ATF6和BAX基因mRNA的表达（P<0.05）,并显著下调HOXA10基因mRNA的表达（P<0.05）,但对Caspase9基因mRNA表达无显著影响（P>0.05）。结果表明,Arg缺失可导致牛子宫内膜上皮细胞发生内质网应激,并影响子宫内膜宫受性的建立,可为进一步揭示Arg对牛子宫内膜的调控机制及制定减少妊娠早期胚胎丢失的营养调控策略提供参考。