垂穗披碱草ISSR反应体系的正交优化

以垂穗披碱草(Elymus nutans)基因组DNA为模板,对ISSR-PCR反应体系中5个因素(TaqDNA聚合酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物)进行优化试验.建立垂穗披碱草稳定的ISSR-PCR反应体系及最佳扩增程序.在25 μL反应体系中,最佳反应体系为2.5 μL 10×buffer(不含Mg2+)...     

澳洲坚果RAPD标记反应体系的建立及应用

以澳洲坚果为试材,利用单因素试验对影响RAPD标记反应体系的主要因素进行优化,建立适合澳洲坚果RAPD标记的反应体系。结果表明,澳洲坚果RAPD最优反应体系为：20 μL反应体系中,含40 mg L_-1模板DNA,0.6 μmol L_-1引物,1.0 U Taq聚合酶,2.5 mmol L_-1 Mg₂₊和0.4 mmol L_-1 dNTPs。利用该最优反应体系对不同引物和澳洲坚果种质进行验证,扩增条带具有良好的可靠性和稳定性,且分辨率较高。因此,该RAPD-PCR反应体系可用于澳洲坚果种质资源鉴定及遗传多样性分析等研究。     

杨桃SCoT标记PCR反应体系建立与验证

用单因素设计法对影响杨桃SCoT-PCR反应体系的主要因素Mg2+, dNTPs,引物, Taq DNA 聚合酶及DNA 模板浓度进行优化。结果表明，适于杨桃研究的SCoT-PCR最佳反应体系为：总体积为20μL的反应体系中，含2.5mmol/L Mg2+，0.3mmol/L dNTPs，30mg/L模板DNA，1.00μmol/L引物和0.4U Taq DNA聚合酶。用不同引物及杨桃DNA对该体系进行验证，扩增条带清晰，结果稳定可靠，证明该反应体系适用于杨桃SCoT-PCR扩增。     

航天搭载紫花苜蓿SSR-PCR反应体系的优化以及引物的筛选

航天育种的变异频率高、变异幅度大、有益变异多、稳定性强,优势明显。依据正交试验设计原理,设计了用正交试验和细调正交试验来确定航天搭载紫花苜蓿SSR-PCR反应体系中各成分的浓度,从dNTP、Taq酶、Pri mers、Mg2+4种因素对航天搭载紫花苜蓿SSR-PCR反应体系进行了优化,得到适合航天搭载紫花苜蓿SSR-PCR最佳反应体系,即25μL的反应体系中含有dNTP 0.2 mmol/L、TaqDNA聚合酶2U、引物0.7μmol/L、Mg2+2.5 mmol/L、以及10×buffer和60 ng模板DNA。在试验确定最佳反应体系基础上,对17对SSR引物进行筛选,选出6对扩增条带信号强、背景清晰的引物。     

野火球RAPD反应体系优化研究初报

为建立一个稳定的野火球RAPD反应体系,对RAPD反应条件中模板DNA用量、Taq DNA聚合酶用量、随机引物浓度、Mg2 浓度和dNTP浓度等各项参数进行筛选比较,创建其最佳反应体系为;250μl反应体系中,模板DNA51ng,Taq DNA聚合酶0.5U.引物浓度0.32μmol/L,Mg2 浓度1.2mmol/L,dNTP浓度0.20mmol/L,10×PCR Buffer 1.0μl,ddH2O19μl.     

紫花苜蓿RAPD反应条件优化

以"中苜一号"、"大西洋"、"渭南"3个苜蓿品种为材料,对RAPD反应条件中的MgCl2浓度、dNTP浓度、随机引物浓度、模板DNA用量、TaqDNA聚合酶用量以及扩增缓冲液浓度分别进行梯度试验.结果表明,该反应体系的体积为25 μL,MgCl2浓度为2.7 mmol/L,dNTP浓度为150 μmol/L,随机引物浓度为0.192 μmol/L,TaqDNA聚合酶用量为每一反应体系2 U,扩增缓冲液浓度(以KCl浓度为指标)为50 mmol/L,模板DNA用量为120 ng.通过试验建立了一套稳定的RAPD反应体系.该反应体系扩增效果好.     

马蔺ISSR-PCR反应体系的建立与优化

根据正交试验设计原理,设计探索正交试验和细调正交试验以确定马蔺(Iris lacteal Pall.var.chinensis(Fisch.)Koidz)ISSR-PCR反应体系中各成分的浓度,从dNTP、Taq酶、Pri mers、Mg²⁺4种因素对马蔺ISSR反应体系进行了优化,得到适合马蔺的ISSR-PCR最佳反应体系,即25μl的反应体系中含有dNTP 0.3 mmol/L、Taq酶1.5 U、Pri mers 0.4μmol/L、Mg²⁺2.5 mmol/L以及1×buffer和50 ng模板DNA。通过对马蔺ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火试验,得到这条引物的最佳退火温度为52℃。这一体系的建立为今后利用ISSR标记技术研究马蔺遗传多样性奠定了基础。     

紫花苜蓿RAPD反应条件优化

以"中苜一号"、"大西洋"、"渭南"3个苜蓿品种为材料,对RAPD反应条件中的MgCl₂浓度、dNTP浓度、随机引物浓度、模板DNA用量、TaqDNA聚合酶用量以及扩增缓冲液浓度分别进行梯度试验.结果表明,该反应体系的体积为25μL,MgCl₂浓度为2.7mmol/L,dNTP浓度为150μmol/L,随机引物浓度为0.192μmol/L,TaqDNA聚合酶用量为每一反应体系2U,扩增缓冲液浓度(以KCl浓度为指标)为50mmol/L,模板DNA用量为120ng.通过试验建立了一套稳定的RAPD反应体系.该反应体系扩增效果好.     

利用多重PCR技术鉴别牛早期胚胎性别研究

本研究利用一对根据牛Y-染色体特异重复序列设计的牛Y-染色体特异性引物和一对根据牛微卫星DNA设计的牛常染色体内标引物,通过对PCR反应体系中Mg^2＋浓度和PCR反应条件中退火温度的优化,建立了牛早期胚胎性别鉴定的多重PCR反应体系。     

高寒草地土壤5株真菌合成不同功能酶系间互作效应的研究

为研究筛选自高寒草地5株真菌合成不同功能酶系间的互作效应,采用单个菌株发酵粗酶液直接混合和菌株组合发酵的2种方式,分别测定了反应体系中不同功能酶活力的变化情况。结果表明:菌株310b与4个菌株23a,26B,24d及H发酵粗酶液直接混合的情况下,反应体系中漆酶、羧甲基纤维素酶、木聚糖酶的酶活力下降, 且差异显著(P<0.05);而菌株310b与4个菌株组合发酵的情况下,反应体系中漆酶的酶活力下降,且差异显著(P<0.05),在与菌株23a和H的组合中,反应体系羧甲基纤维素酶和木聚糖酶的酶活力下降,且差异显著(P<0.05),与菌株26B和24d 的组合中,反应体系中羧甲基纤维素酶和木聚糖酶的酶活力没有变化。