信阳地区中小规模猪场链球菌和副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验

为了解信阳地区中小规模猪场链球菌病和副猪嗜血杆菌病的流行情况及细菌耐药性变化,采用细菌常规分离技术,对2011年河南省信阳地区送检病例进行了链球菌和副猪嗜血杆菌的分离鉴定,并对分离出的部分菌株进行药物敏感性试验。结果表明,该地区猪链球菌病在秋季、副猪嗜血杆菌病在春季发病率较高,保育猪的发病率较高。链球菌分离株对头孢他啶、头孢噻肟的敏感度较高,副猪嗜血杆菌分离株对头孢噻呋钠、左旋氧氟沙星敏感度较高。     

仔猪副猪嗜血杆菌的分离鉴定及耐药性检测

为了了解海南藏族自治州共和县规模化猪场中仔猪副猪嗜血杆菌分离株的流行情况及对常用抗菌药的耐药情况。本试验于2022—2023年采集海南藏族自治州共和县规模化猪场中患疑似副猪嗜血杆菌病的仔猪鼻拭子、关节液、胸腔积液、肺脏等病料,共计283份。采用细菌分离鉴定、PCR方法对采集的病料进行副猪嗜血杆菌分离鉴定,采用人工感染小鼠试验验证分离株的致病性,采用纸片扩散法(Kirby-Bauer,简称K-B法)检测致病性副猪嗜血杆菌分离株对临床中常用抗菌药的耐药性。结果显示：从采集的283份病料中分离到128株副猪嗜血杆菌,通过致病试验显示,91株副猪嗜血杆菌能引起小鼠不同程度发病与死亡,为致病性菌株;分离的91株致病性副猪嗜血杆菌对磺胺间甲氧嘧啶、阿莫西林、氨苄西林等6种药物的耐药率为85.7%以上,对其他药物的耐药率为3.3%～25.3%,本研究为该地区仔猪副猪嗜血杆菌合理用药及防控提供参考。     

2012～2014年江西地区副猪嗜血杆菌分离株ERIC-PCR指纹图谱分析

在对15种副猪嗜血杆菌血清型参考株鉴定获得15种不同ERIC-PCR指纹的基础上,对2012~2014年分离自江西地区41株副猪嗜血杆菌临床分离菌株进行指纹鉴定。结果表明,41株副猪嗜血杆菌产生20种不同的指纹图谱,相同血清型的菌株表现出不同的指纹图谱,无法进行血清分型的副猪嗜血杆菌应用该方法可得到充分区分。该方法证实副猪嗜血杆菌ERIC-PCR指纹图谱存在丰富的多样性,可适用于副猪嗜血杆菌的快速基因分型及分子流行病学调查。     

苏皖地区副猪嗜血杆菌的分离鉴定与三价灭活疫苗的初步研制

近年来国内养猪场副猪嗜血杆菌病日益严峻,给相关猪场造成严重的损失。本研究主要对江苏省和安徽省部分养猪场的病死猪和健康猪进行副猪嗜血杆菌的分离鉴定,为副猪嗜血杆菌的防治提供流行病学数据。同时,本室初步研制副猪嗜血杆菌血清4型、5型和12型三价灭活疫苗,用BALB/c小鼠对其进行免疫保护力的评价。结果从病死猪中分离到8株副猪嗜血杆菌,其中5型3株、12型2株、14型1株及不可定型2株;从健康猪中分离到26株副猪嗜血杆菌(分离率为7.12%),其中12型10株、4型4株、11型3株、5型1株、13型1株及未定型菌株7株。初步研制的副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的免疫保护效果要优于商品灭活疫苗,对副猪嗜血杆菌血清4型、5型及12型具有较好的免疫保护能力。     

副猪嗜血杆菌部分16S rRNA基因的克隆及序列分析

副猪嗜血杆菌(Haenophilus parasuis,Hps)为副猪嗜血杆菌病的病原体。目前,副猪嗜血杆菌地方分离株基因背景研究国内报道不多,试验针对临床分离的2株Hps进行16S rRNA基因片段的扩增、克隆、测序及同源性比较,以期在分子水平对副猪嗜血杆菌进行鉴定。1材料与方法1.1菌种和质粒副     

镇江地区副猪嗜血杆菌分离鉴定血清型及耐药性检测

为了解镇江地区副猪嗜血杆菌血清型流行情况与耐药性情况,本试验采集患病仔猪的肺脏、肝脏、关节渗出液等病料组织85份,采用细菌分离、形态学观察、培养特征鉴定、PCR鉴定等方法对副猪嗜血杆菌进行鉴定,采用PCR法和K-B药敏纸片法分别检测副猪嗜血杆菌血清型及耐药性。结果显示,从85份病料组织中分离得到48株副猪嗜血杆菌;48株副猪嗜血杆菌具有7种血清型,其中,血清5型和12型为流行的主要优势血清型,分别占分离菌株的25.0%和31.3%; 48株副猪嗜血杆菌对磺胺间甲氧嘧啶、阿莫西林、庆大霉素等9种药物耐药率在50.0%～100.0%之间,对其他药物耐药率在12.5%～25.0%之间。说明该地区分离的副猪嗜血杆菌血清型流行情况复杂,且耐药性严重。本试验为该地区的副猪嗜血杆菌防控提供研究基础。     

川北地区副猪嗜血杆菌的分离鉴定

为了给川北地区养猪场提供副猪嗜血杆菌病的科学防控及合理的治疗用药方案,对川北地区西充、三台、绵阳等地规模化猪场保育猪发生的副猪嗜血杆菌病病原进行分离鉴定。采集副猪嗜血杆菌病疑似病死猪的肺、肝、脾、淋巴结、心包液、腹水、关节肿液等样本55例,通过细菌的分离纯化,对分离菌进行了染色镜检、V因子需要试验、致病性试验、PCR鉴定、药敏试验和同源性分析。结果表明,分离出了20株副猪嗜血杆菌,分离株革兰染色为阴性,有荚膜,分离菌株与GenBank公布的12株副猪嗜血杆菌的16S rRNA序列有高度同源性,且分离株对β-内酰胺类、四环素类、磺胺类的耐药率最高。试验结果对于川北地区养猪生产中副猪嗜血杆菌病的有效防治提供依据。     

安阳地区副猪嗜血杆菌分离株的耐药性与耐药基因检测

为了分析安阳地区副猪嗜血杆菌分离株耐药性及耐药基因携带情况,采集患病猪的肺脏、脾脏、肝脏、关节渗出液等病料组织157份,分离得到了102株副猪嗜血杆菌。采用KB药敏纸片法和PCR法分别检测副猪嗜血杆菌分离株的耐药性和耐药基因。结果显示,分离的102株副猪嗜血杆菌对青霉素、阿莫西林、庆大霉素等10种的耐药率在44.1%以上,其他药物的耐药率为9.8%～26.5%,耐11、10、9种药物菌株最多,分别占分离菌株的17.6%、21.6%、20.6%;分离的102株副猪嗜血杆菌耐药基因TetA、TetB、floR、ermA、lnu(C)检出率为41.2%～85.3%,其他耐药基因检出率11.8%～13.7%。说明从安阳地区分离的102株副猪嗜血杆菌耐药性严重,携带多种耐药基因。     

山东省副猪嗜血杆菌流行现状调查及启示

为了解山东省副猪嗜血杆菌的流行情况,采用临床剖检、细菌分离鉴定和PCR检测的方法对20家规模化猪场疑似发病猪进行检测;最终分离鉴定到7株副猪嗜血杆菌,分离率为35%。对分离的副嗜血杆菌进行药敏试验,发现该菌存在严重的耐药性。调查显示,副猪嗜血杆菌在山东省规模化猪场广泛流行,并且普遍存在与猪萎缩性鼻炎、蓝耳病混合感染的情况,应予以重视。     

副猪嗜血杆菌的药敏试验

本试验根据某养猪场发生的感染病情,疑似副猪嗜血杆菌感染猪出现厌食、呼吸困难、体温升高、振颤及共济失调,属于典型的副猪嗜血杆菌病临床症状。从疑似副猪嗜血杆菌感染猪的脾、肺等处取样,对致病菌进行分离、保存,一共获得10株疑似副猪嗜血杆菌,编号HPS-0~HPS-9。通过试验鉴定,这10株细菌均为副猪嗜血杆菌。选取其中三株副猪嗜血杆菌,编号为HPS-0,HPS-1和HPS-2,分别对18种抗感染药物进行药物敏感性试验,然后测定抑菌圈的直径判断药物对副猪嗜血杆菌的敏感度。试验结果显示,副猪嗜血杆菌对头孢菌素类抗生素最为敏感,其他大部分抗生素耐药现象比头孢菌素类严重。     

副猪嗜血杆菌病病原菌的分离与鉴定

本试验从山西省长治市疑似副猪嗜血杆菌病感染的一个大型规模化猪场采集病料,进行细菌的分离,获得1株疑似分离株。通过改良的培养和保存技术、染色镜检、卫星现象及生化试验等方法对病原菌进行了研究,结果符合副猪嗜血杆菌的生化特性。     

一起猪瘟病毒和副猪嗜血杆菌混合感染病例的诊断

四川遂宁某养猪场送检病猪2只,通过临床解剖、细菌分离鉴定、PCR、RT-PCR等方法进行实验室诊断,综合判定为猪瘟和副猪嗜血杆菌混合感染,并从发病猪体内成功分离到一株副猪嗜血杆菌.采用K-b法检测副猪嗜血杆菌分离菌株对28种常用抗菌药的敏感性,结果显示,该菌株耐药性比较严重,仅对复达欣、头孢肤肟、左旋氧氟沙星敏感.     

天津部分猪场副猪嗜血杆菌的分离鉴定

为了解天津部分地区2014年副猪嗜血杆菌病的发病情况及菌株的致病力,收集本地区45个规模化养猪场疑似副猪嗜血杆菌病猪的病料53份,通过病原分离培养、培养特性及染色特性观察、生化试验及PCR扩增等方法进行鉴定,最终分离到阳性样品15例,阳性率28.3%;挑选2株(TJ-0121A,TJ-0134A)分离于临床症状典型病猪,且生物学特性典型的分离株进行豚鼠副猪嗜血杆菌的人工感染试验,每只豚鼠腹腔注射2.0×109 CFU/mL菌液。TJ-0121A分离株接种豚鼠后,豚鼠全部死亡;TJ-0134A分离株感染7d后未出现死亡。对所有豚鼠的肝、肺、脾、淋巴结、肾、心肌进行副猪嗜血杆菌分离和PCR检测,TJ-0121A组死亡豚鼠的所有组织均可分离并检测到副猪嗜血杆菌;TJ-0134A组豚鼠仅肺脏分离检测到副猪嗜血杆菌,说明不同菌株间的致病力存在差异。     

副猪嗜血杆菌分离鉴定及药敏试验

副猪嗜血杆菌能够引起猪的多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎等,是影响猪的最重要细菌之一,目前在所有的主要养猪国家均有存在。为了弄清河南省副猪嗜血杆菌病流行情况,2012年-2015年,从河南不同地区猪场送检的疑似病料,进行副猪嗜血杆菌分离和鉴定,共分离到5株细菌,通过细菌形态观察、培养特征鉴定、生化试验、PCR检测,鉴定为副猪嗜血杆菌,分别命名为A6-fei、C3-xin、C12-xin、D2-fei和E1-fei。采用纸片扩散法,对分离5株副猪嗜血杆菌进行药敏试验,其结果表明所分离的5株副猪嗜血杆菌的药物敏感性不尽相同,各分离菌株对头孢噻肟、氟苯尼考星最敏感,对复方新诺明敏感性最差,其中菌株C3-xin对复方新诺明、庆大霉素、卡那霉素、青霉素完全耐药。表明副猪嗜血杆菌病在河南省依然存在,并且不同地区菌株对常用药物的敏感性各不相同,应当引起养猪场重视。     

副猪嗜血杆菌ERIC-PCR指纹图谱多样性研究

建立了副猪嗜血杆菌ERIC-PCR分型技术,并应用于临床分离菌株的流行病学调查。试验结果表明,47株副猪嗜血杆菌产生28种不同的指纹图谱,分离自同一猪场和相同血清型的菌株表现出不同的指纹图谱,不能进行血清分型的副猪嗜血杆菌应用该方法可得到充分区分,证实副猪嗜血杆菌ERIC指纹图谱存在丰富的多样性,ERIC-PCR方法是副猪嗜血杆菌流行病学规律分析的有效方法。     

副猪嗜血杆菌病的流行病学调查

副猪嗜血杆菌是近年来危害我国养猪业最重要的细菌传染病之一,严重影响着我国养猪业的健康发展,为了解近年来我国副猪嗜血杆菌病的流行情况,我们对山东、河南、黑龙江、江西、辽宁、广东、陕西、四川等地区送检病料进行了副猪嗜血杆菌的分离、鉴定。试验结果表明,从2006~2009年送检的194个患病猪场发病猪的关节液、肺脏、脑组织、心血、鼻腔等病料进行检测,最终分离到47株副猪嗜血杆菌,分离率为24.2%;通过采用KRG(Kieletein-Rapp-Gabriedson)琼脂扩散方法对分离菌株进行血清分型鉴定,结果血清4型13株(占27.7%)、血清5型10株(占21.3%)、血清12型8株(占17%)、血清13型7株(占14.9%),表明我国副猪嗜血杆菌主要血清型是血清4型、血清5型、血清12型和血清13型。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验

对广东15个送检的疑似猪传染性副猪嗜血杆菌病的病猪样品,用TSA培养基进行细菌的分离,并对分离菌株进行细菌的形态观察、培养特性和生化试验鉴定,以及用副猪嗜血杆菌16S rRNA基因的特异性引物进行PCR鉴定。试验结果表明,有7株分离菌株扩增出了821 bp的特异性目的条带,结合形态观察、培养特性和生化试验鉴定,结果表明成功分离到了7株副猪嗜血杆菌;药敏试验结果显示,分离菌株对氨苄西林、多粘菌素、庆大霉素等药物较敏感。     

副猪嗜血杆菌16S rRNA基因的克隆及序列分析

本研究旨在从分子水平对副猪嗜血杆菌湖南分离株进行鉴定,并用16S rRNA序列分析不同血型副猪嗜血杆菌之间的遗传关系。利用PCR扩增副猪嗜血杆菌的16S rRNA,应用ClustalX 1.81程序对序列进行比对,再用Phylip 3.67程序MP法和Mage 4.0程序NJ法绘制种系发育树,并用Puzzle 5.2程序构建最大似然树,同时利用DNAStar 5.0中的Megalign程序进行同源性分析。结果显示,所获得的16S rRNA序列长度均为783 bp,湖南分离株与已知5型副猪嗜血杆菌位于同一分枝。结果表明,湖南分离株属于5型副猪嗜血杆菌,为副猪嗜血杆菌的分子流行病学和其相关疾病的诊断奠定基础。     

副猪嗜血杆菌辽宁株的分离鉴定及药物敏感性分析

为给发病猪场合理用药控制和治疗副猪嗜血杆菌病提供依据,试验对辽宁省北部地区规模化猪场及农村散养户出现疑似副猪嗜血杆菌感染的病猪进行病理剖检、细菌分离培养、生化鉴定、PCR鉴定和药敏试验。结果表明:共分离、鉴定出4株副猪嗜血杆菌;分离株对头孢噻肟、恩诺沙星、头孢氨苄、林可霉素、氧氟沙星、环丙沙星高敏,而对链霉素、红霉素、卡那霉素、多黏菌素等耐药。     

副猪嗜血杆菌对豚鼠和小鼠的致病力研究

为了验证副猪嗜血杆菌分离株FS0307株、XX0306株和标准株HS1079株的致病力,本文以豚鼠和Balb/c小鼠作为模型动物,分别腹腔接种副猪嗜血杆菌FS0307株、XX0306株和HS1079株,观察临床症状和死亡情况,并进行Hps的再分离和血清抗体检测。结果显示,2株副猪嗜血杆菌分离株均能引起豚鼠和Balb/c小鼠100%发病,以及对豚鼠和小鼠的致死率均分别达到100%和20%;标准株HS1079株能引起豚鼠和Balb/c小鼠100%发病,并对豚鼠有80%的致死率,而不致死小鼠。可见,副猪嗜血杆菌FS0307株、XX0306株和HS1079株的致病力均较强,这为副猪嗜血杆菌病疫苗的研究提供了可靠的技术参数。