小鼠输卵管上皮细胞的原代培养及纯化方法研究

建立小鼠输卵管上皮细胞原代培养及纯化方法.小鼠输卵管上皮细胞原代培养采用组织块培养法和酶消化法.酶消化法于37℃分为4个处理组进行.处理1以2.5 g/L胰酶+0.4 g/L EDTA消化5、10、20 min;处理2以0.5 g/L胰酶+0.08 g/L EDTA消化35、50、75 min;处理3以0.3 g/L的Ⅰ型胶原酶消化60、90、240 min;处理4以2.5 g/L胰酶+0.4 g/L EDTA和0.3 g/L Ⅰ型胶原酶(1∶2)消化60 min,150 min.原代细胞纯化采用差速贴壁和反复差速贴壁法.传代采用胰酶两步消化法进一步纯化输卵管上皮细胞.组织块法原代培养成纤维细胞生长优势明显,传代纯化细胞效果不佳.用酶消化法原代培养时,处理1效果不理想;处理2采用3个消化时间时均取得比较理想的结果;处理3消化240 min时结果较好;处理4消化150 min效果较好.原代细胞纯化,反复差速贴壁得到的上皮细胞较纯,进一步传代纯化细胞取得了理想的结果.小鼠输卵管上皮细胞原代培养采用酶消化法结合反复差速贴壁分离纯化细胞,传代采用两步消化法,可以成功地进行小鼠输卵管上皮细胞的分离纯化培养.     

鸡胚小肠上皮细胞的分离及原代培养研究

<正>取18日龄的SPF鸡胚,分别采用组织块培养法、胰蛋白酶、胶原酶I和嗜热菌蛋白酶消化法分离和体外培养小肠上皮细胞。结果表明:组织块培养法所获得的上皮细胞纯度较低;胰蛋白酶消化后多为单细胞,细胞贴壁和生长能力较弱;胶原酶Ⅰ单独消化50min或嗜热菌蛋白酶单独消化110min以及胶原酶Ⅰ、嗜热菌蛋白酶联     

牦牛乳腺上皮细胞的体外分离培养及鉴定

为提高牦牛乳腺上皮细胞体外培养成功率,实现高度可重复性,试验采用2.5 g/L(含0.5 g/L EDTA)胰酶和Ⅰ型胶原酶(1 mg/mL)分段消化牦牛乳腺组织块以分离细胞,原代培养时于DMEM/F12培养体系内添加氢化可的松(1 μg/mL)、表皮生长因子(50 ng/mL)及胰岛素-转铁蛋白-硒(5 μg/mL)...     

鸡胚盲肠上皮细胞原代培养与鉴定

为研究鸡E.tenella的宿主细胞--盲肠上皮细胞体外培养技术,为E.tenella损伤机制及抗球虫药的研究提供体外模型,分别用胰蛋白酶法、胶原酶Ⅰ法、嗜热菌蛋白酶法、嗜热菌蛋白酶+胶原酶Ⅰ法和中性蛋白酶Ⅰ+胶原酶Ⅺ法分离纯化原代鸡胚盲肠上皮细胞,通过测定细胞活力、细胞团块比例、总细胞产量和细胞团块产量,筛选出鸡胚盲肠上皮细胞最佳分离方法,并进行了纯化和培养,对培养细胞进行了鉴定.结果表明:嗜热菌蛋白酶消化、低速离心去除单细胞、差速贴壁除去成纤维细胞,为最佳分离和纯化盲肠上皮细胞的方法;分离纯化的细胞接种后分别于第3-5天、第10-11天进入对数生长期,可存活14 d以上;经形态学观察、碱性磷酸酶染色、扫描电镜鉴定为盲肠上皮细胞,所分离的细胞培养至第4、7、11天时上皮细胞比例分别为81.67%、84.33%和72.00%.用该法可获得纯度较高的原代鸡胚盲肠上皮细胞.     

几种酶分离山羊小肠上皮细胞方法的比较

用不同酶消化分离山羊小肠上皮细胞,从而找到最佳的分离方法,为进一步研究IEC提供合适的细胞模型.本研究分别用胶原酶Ⅰ、嗜热菌蛋白酶、胶原酶Ⅺ/中性蛋白酶Ⅰ消化分离刚出生未进奶的山羊小肠上皮细胞,通过观察IEC生长状态、形态特征、抗原鉴定比较哪种分离效果最佳.结果表明,联合用胶原酶Ⅺ/中性蛋白酶Ⅰ 1h可分离出大量健全绒毛隐窝单位,进一步培养获得的小肠粘膜上皮(IEC),上皮细胞膜抗原均呈阳性,用胶原酶Ⅰ和嗜热菌蛋白酶分离得到的大部分是成纤维细胞.选用用胶原酶Ⅺ/中性蛋白酶Ⅰ作为分离IEC的消化酶,可获得较纯的IEC.     

几种酶分离山羊小肠上皮细胞方法的比较

用不同酶消化分离山羊小肠上皮细胞,从而找到最佳的分离方法,为进一步研究IEC提供合适的细胞模型。本研究分别用胶原酶Ⅰ、嗜热菌蛋白酶、胶原酶Ⅺ/中性蛋白酶Ⅰ消化分离刚出生未进奶的山羊小肠上皮细胞,通过观察IEC生长状态、形态特征、抗原鉴定比较哪种分离效果最佳。结果表明,联合用胶原酶Ⅺ/中性蛋白酶Ⅰ1h可分离出大量健全绒毛隐窝单位,进一步培养获得的小肠粘膜上皮(IEC),上皮细胞膜抗原均呈阳性,用胶原酶Ⅰ和嗜热菌蛋白酶分离得到的大部分是成纤维细胞。选用用胶原酶Ⅺ/中性蛋白酶Ⅰ作为分离IEC的消化酶,可获得较纯的IEC。     

猪呼吸道上皮细胞的体外原代培养研究

为探索猪呼吸道上皮细胞体外的原代培养,对胶原酶Ⅳ+胰酶消化法、胰酶消化法、胶原酶Ⅳ和胰酶消化结合组织块培养法以及组织块培养法等4种分离细胞的方法进行了比较,同时比较了不同浓度胎牛血清的培养基所培养细胞的纯度及成活率,采用差速贴壁法纯化细胞并对所得的上皮细胞进行冻存复苏研究。结果表明:组织块培养法培养获得的细胞数量和纯度极显著高于胰酶消化法(P0.01),胶原酶Ⅳ+胰酶消化法获得的细胞成活率显著高于胰酶消化法;含有5%血清的培养基培养的细胞成活率及纯度均高于用10%血清培养(P0.01),冻存1个月后的细胞复苏率为85%。     

鹅小肠上皮细胞的分离培养研究

取29～30胚龄的鹅胚为试验材料,通过组织块种植法和酶消化法进行原代鹅小肠上皮的体外培养,采用刮除法、相差消化及相差贴壁法对上皮细胞进行纯化,用0.05%Trypsin-EDTA进行消化传代,通过形态学观察及免疫细胞化学法进行鉴定.结果表明:组织块种植法得到的鹅小肠上皮细胞生长状况良好,细胞活性较强,经过纯化,得到了纯度较高的鹅小肠上皮细胞.而联合使用浓度为300 U/mL的胶原酶(Ⅺ型)和0.1 mg/mL的中性蛋白酶(Ⅰ型)、多次(短时间)消化收获细胞法虽然可获得大量的健全肠绒毛隐窝单位,但传代后其增殖能力明显下降;形态学观察及免疫细胞化学法鉴定为阳性,证明分离出的细胞为小肠上皮细胞,从而为小肠上皮细胞的进一步研究奠定了基础.     

新生犊牛皱胃平滑肌细胞的原代培养——组织块培养法和胶原酶消化法的比较研究

通过组织块培养法和胶原酶消化法分离培养犊奶牛皱胃平滑肌细胞,采用免疫细胞化学方法和免疫荧光化学方法对其进行鉴定,并将鉴定结果、细胞生长曲线进行比较。结果,两种方法培养出的细胞生长曲线基本相同,细胞纯度免疫细胞化学鉴定结果为：组织块培养法为95％以上,胶原酶消化法为90％;免疫荧光鉴定结果为：组织块培养法为96％,酶消化法为89％。组织块培养法操作简单、经济,但耗时较长;胶原酶消化法快速、获得细胞较多,但价格昂贵,故在实际操作中可将两种方法联合应用。     

牛成纤维细胞体外分离培养方法比较及细胞特征鉴定

为了获得牛成纤维细胞最佳体外分离培养方法并建立成纤维细胞特征鉴定方法,试验采集牛耳皮肤组织块,利用眼科剪修剪成大小为0.5 ～2 mm3的组织块,分别采用组织块贴壁法、胶原酶Ⅱ+组织块黏附法、双酶消化法(胰蛋白酶+胶原酶Ⅱ)+组织块黏附法进行原代牛耳成纤维细胞的分离培养,观察各方法培养的细胞生长情况,利用成纤维细胞特异...     

裕固族的草原游牧文化(Ⅳ)——裕固族的生活文化

研究裕固族的生活文化对巩固民族团结、促进中华民族和谐统一具有十分重要的意义。通过查阅资料让人们了解裕固族人的风俗习惯,是一种传统的精神力量与物质环境相互作用的自然产物,是裕固族民族传统生活文化的主要载体及传承方式,他主要外化于裕固族人的衣食住行、生丧嫁娶及岁时节日习俗中。     

草业科学类学院文化建设的思考与实践——以兰州大学草地农业科技学院学院文化为例

大学学院文化是校园文化灵魂,先进的学院文化是人才培养、科学研究、服务社会、传承文化的精神动力和智力支持,而草业科学类学院文化是农耕文明与人类文明的结晶。本研究阐述了综合性大学农学类学院文化建设的重要性和内涵,指出农学类学院文化包括精神文化、物质文化、制度文化和环境文化四个方面,并以兰州大学草地农业科技学院为例,剖析了草业科学类学院文化建设沉淀过程,提出了建议,以便为草业科学类学院的文化建设提供借鉴和参考。     

企业文化差异性对企业并购的影响

随着时代迈入21世纪，企业并购频频发生，并且其规模有着越来越大的趋势。然而并购前大量一致被看好的案例，在并购发生后，结果都差强人意。其根本原因在于人们习惯于从企业硬件方面来看问题，而忽略了企业文化（软件）的差异性。本文通过分析企业文化差异性对企业并购的影响，最后提出规避企业文化差异性对并购不利影响的几点建议。     

大学生自主文化生活的现状调查与教育引导

通过对西南大学部分学生在网络、流行文化、道德文化三方面认知情况的调查，分析大学校园文化氛围、学生文化意识，指出其中的问题所在，并提出相关建议。     

悬浮培养技术在生物制药中的应用和展望

综述了国内外细胞悬浮培养产业化发展现状及其关键技术。细胞悬浮培养是利用生物反应器大规模培养动物细胞生产生物制品的核心技术,结合筛选驯化的高表达细胞株和个性化细胞培养基,控制细胞培养过程,实现提高生产效率及产品质量、降低生产成本的目的,是当前国际上生物制品生产的主流模式。但该技术目前在国内尚未得到广泛应用,生物制品生产仍主要采用病毒产率低、生产成本高、劳动强度大的转瓶细胞培养方式。随着现代生物技术发展,利用细胞悬浮培养技术进行生物制品生产是生物制药行业发展的必然趋势。     

饲料企业制度层文化与精神层文化的兼容性研究

企业制度层文化和精神层文化是饲料企业文化的重要组成部分,两者对饲料企业行为层文化和物质层文化具有决定性作用。兼容性是企业制度层文化与精神层文化关系研究中首先要解决的关键问题。文中在对这个问题分析的基础上,进一步使用系统论的方法研究了饲料企业精神层文化与企业制度层文化在兼容情况下与不兼容情况下的关系,并针对处于企业制度层文化和企业精神层文化不兼容状态中的饲料企业,提出了相应的对策建议。     

草原文化是华夏文化的活泼元素

游牧是草原文化的基本元素。保存草原文化,就要给游牧以适当的地位。游牧是人类最早的仿生学,其合理内核可为农业现代化作贡献,不可一概视为落后而废除。草原文化从徒步游牧到骑马游牧,是一大进步,对人类文化的沟通交融作出了的重大贡献。一旦草原文化与农耕文化融合,发生系统耦合效应,将产生生态的、经济的巨大变革,从而导致文化的飞跃。我们不妨称为‘文化造山运动’。草原文化在华夏文化发展史中始终是活泼元素。人类文明将离不开草原文化的支撑。     

做好草原文化大文章

中共中央《关于深化文化体制改革、推动社会主义文化大发展大繁荣若干重大问题的决定》提出了建设社会主义文化强国的目标,为中华文明中三大主源之一的草原文化创造了战略机遇。草原是草原文化的摇篮,草原文化对中华文化做出了重要历史贡献,提升草原文化功能,向社会主义草原文化强国迈进。     

对草文化的一些思考

草作为人类社会实践活动的基本对象之一,在人类从事各种社会生产实践活动中创立了丰富多彩的草文化。草文化在创立、形成与发展过程中,也为促进其他文化类型的形成与发展起到了积极的推动作用,构成了中国文化和世界文化苑的重要部分。文章从什么是草文化,学习研究草文化的意义,草文化的基本特征,草文化研究方法,草文化的精神和草文化的类型划分,草文化的边界,草文化的发展历程和形成环境,草文化基本的内容和草文化的创新等多方面进行了论述。