盘羊脐带间充质干细胞的分离培养及诱导分化

试验旨在研究野生盘羊脐带间充质干细胞（umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs）的分离、培养及体外多向分化潜能等生物学特性。取盘羊分娩后的新生雄性胎儿脐带,采用组织块培养法分离盘羊UC-MSCs后进行体外培养,并对UC-MSCs进行成骨、成软骨和成脂诱导分化,检测其多向分化潜能。结果显示,应用组织块培养法获得的盘羊UC-MSCs具有UC-MSCs特有的呈簇、成纤维状的特性,细胞呈"S"型曲线生长,细胞的倍增时间平均为33.50 h,且可以向成骨细胞、成软骨细胞和成脂细胞分化。诱导分化特异性染色结果表明,野生盘羊UC-MSCs经诱导后的成骨细胞经茜素红S染色呈现典型的橙红色钙沉积物聚集,成软骨细胞经阿利新蓝染色呈现蓝色的软骨基质,成脂细胞经油红O染色呈现深红色的脂滴。实时荧光定量PCR检测结果发现,随着诱导时间的延长,成骨分化的细胞中骨内γ-羧基谷氨酸蛋白（BGLAP）、骨桥蛋白基因（OPN）、Runt相关转录因子2（RUNX2）基因的相对表达量极显著升高（P<0.01）;成软骨分化的细胞中光蛋白聚糖（LUM）基因的表达量明显增加,而双糖链蛋白多糖（BGN）和Y染色体性别决定区基因盒9（SOX9）基因表达量极显著提高（P<0.01）;成脂分化的细胞中脂蛋白酶（LPL）和过氧化物酶体增殖因子活化受体γ（PPAR-γ）基因的相对表达量极显著上升（P<0.01）。试验结果表明,用盘羊胎盘附带的脐带组织可以分离到盘羊UC-MSCs,且分离到的UC-MSCs具有分化为成骨细胞、成软骨细胞及成脂细胞等多向分化潜能。     

干扰核心蛋白聚糖对牛骨骼肌卫星细胞增殖分化的影响

为探究肌肉生长抑制素（MSTN）对牛骨骼肌生长发育的作用机制,本研究以前期MSTN^+/-蒙古牛与野生蒙古牛腿臀肌肌肉组织定量蛋白质组学与磷酸化蛋白质组学筛选获得的表达差异倍数较大的核心蛋白聚糖（DCN）为靶标,以实验室前期分离培养的牛骨骼肌卫星细胞及建立的体外诱导成肌分化模型为对象,通过对设计合成的3个DCN siRNA干扰效果的筛选,将干扰效果最显著的si-DCN-2（si-DCN）转染牛骨骼肌卫星细胞。采用实时荧光定量PCR和Western blotting方法检测增殖期（GM）牛骨骼肌卫星细胞中增殖标志因子Pax7和MyoD的mRNA水平及蛋白水平的表达变化,以及使用EdU染色的方法检测干扰DCN对细胞增殖的影响。对转染DCN siRNA的牛骨骼肌卫星细胞进行体外成肌诱导分化,通过显微镜观察牛骨骼肌卫星细胞分化第3天（DM3）的肌管形成状态,同时采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测分化标志因子MyoG和MyHC的mRNA水平及蛋白水平的表达变化,并对DM3期肌管MyHC进行免疫荧光染色,以研究干扰DCN对细胞分化的影响。结果显示,干扰DCN表达后,增殖期牛骨骼肌卫星细胞中Pax7和MyoD的mRNA水平及蛋白水平都显著或极显著上调（P<0.05;P<0.01）,且EdU阳性细胞率显著增加（P<0.05）,表明干扰DCN表达显著促进了牛骨骼肌卫星细胞的增殖。干扰DCN表达后,牛骨骼肌卫星细胞分化第3天诱导形成的肌管直径呈现增大趋势,检测成肌分化标志因子MyoG在mRNA和蛋白水平的表达分别极显著和显著高于对照组（P<0.01;P<0.05）,MyHC在mRNA水平显著降低（P<0.05）,但在蛋白水平上极显著升高（P<0.01）,免疫荧光结果显示,下调DCN后肌管融合指数显著高于对照组（P<0.05）,说明干扰DCN表达能够促进牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化过程。本研究结果表明,干扰DCN可以显著促进牛骨骼肌卫星细胞的增殖和成肌分化过程。研究结果为进一步开展MSTN对牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的调控机制研究奠定了基础。     

饥饿诱发成脂分化C2C12细胞中脂滴形态重塑

试验旨在探究短期饥饿处理对成脂分化C2C12细胞中脂滴生长发育的影响,为阐释及利用补偿生长机制奠定基础。通过胰岛素等激素混合物诱导C2C12细胞成脂分化,将成脂分化12 d的C2C12细胞分为两组：对照组（Control）,高糖培养24 h;饥饿处理组（FAST）,无血清低糖培养24 h。通过BODIPY染色和甘油三酯测定观察脂滴形态变化,并使用Western blotting方法测定脂滴表面结构蛋白perilipin1-5表达量的变化。结果显示,C2C12细胞成脂诱导12 d,可以使细胞达到较好的充脂状态。通过无血清低糖饥饿处理后,成脂分化C2C12细胞中甘油三酯含量极显著下降（P<0.01）;脂滴平均尺寸极显著减小（P<0.01）,脂滴平均数量极显著增多（P<0.01）;脂滴表面结构蛋白出现变化,perilipin2、perilipin5表达极显著上调（P<0.01）、perilipin3表达显著上调（P<0.05）。综上,无血清低糖处理可以诱发脂滴形态重塑,改变脂滴表面结构蛋白的表达。     

HOTAIR与山羊皮肤黑色素沉积的关系及体外表达规律的研究

旨在探讨山羊HOX转录反义RNA（HOTAIR）及其部分家族基因与山羊皮肤黑色素沉积的关系以及它们在黑色素细胞中的表达规律。本研究采用qRT-PCR检测HOTAIR和HOXD10、HOXC11、HOXC12基因在健康成年雌性酉州乌羊（（19.16±1.44）kg）、板角山羊（（23.27±3.24）kg）皮肤组织中的mRNA水平，及其在小鼠皮肤黑色素瘤细胞（B16-F10）增殖、分化过程中（培养1、3、5和7 d）的表达模式，并分析HOTAIR与其他3个基因表达的相关性。结果显示，在皮肤组织中，酉州乌羊HOTAIR和HOXC12的相对表达量极显著高于板角山羊（P<0.01），酉州乌羊HOXD10的相对表达量显著低于板角山羊（P<0.05）；HOTAIR与HOXC12表达显著正相关（P<0.05），与HOXD10表达显著负相关（P<0.05）。在B16-F10细胞增殖阶段，HOTAIR在各阶段表达差异不显著（P>0.05），HOXC11、HOXC12和HOXD10呈"高-低-高"的表达模式，且均在培养1 d的相对表达量极显著高于3和5 d（P<0.01）；HOTAIR与HOXC11表达呈极显著正相关（P<0.01）。在B16-F10细胞分化阶段，HOTAIR表达持续上升，HOXD10表达持续下降，HOXC11在各阶段的相对表达差异不显著（P>0.05），HOXC12在培养1和5 d的相对表达量极显著高于3和7 d（P<0.01）；HOTAIR与HOXD10表达极显著负相关（P<0.01）。HOTAIR在乌皮山羊皮肤中高表达，在B16-F10细胞分化阶段的表达随着培养时间的延长而增加，HOTAIR对HOXD10存在负向调控作用。HOTAIR与HOXD10互作可能调控山羊皮肤黑色素细胞的分化与黑色素生成。     

C-型利钠肽调控鸡肌内脂肪细胞脂肪沉积的作用机制研究

本研究旨在探讨C型利钠肽（CNP）对鸡胸肌组织肌内前脂肪细胞的增殖、分化和分解的调控作用及机制，为进一步阐明肌内脂肪沉积的分子机制奠定基础。以黄羽肉鸡胸肌组织的肌内前脂肪细胞作为体外研究模型，利用10^-7 mol/L CNP激素外源诱导前脂肪细胞，采用CCK8、Edu染色法观察肌内前脂肪细胞增殖的变化，油红O染色和异丙醇萃取法观察脂肪分化和沉积的变化；利用试剂盒检测细胞内cGMP及甘油浓度变化；实时荧光定量PCR检测利钠肽受体A、B、C（NPRA、NPRB和NPRC）的表达变化。结果显示，与对照组相比，CNP诱导前脂肪细胞1和3 d后，细胞的增殖能力显著升高（P<0.05）；CNP诱导3和6 d后，诱导组脂肪细胞的分化和脂滴沉积能力极显著降低（P<0.01），释放到培养基的甘油浓度及细胞中的cGMP的浓度极显著升高（P<0.01）。NPRB和NPRC基因mRNA的表达极显著和显著高于对照组（P<0.01；P<0.05），NPRA基因mRNA的表达无显著变化（P>0.05）。本试验结果表明，CNP通过NPRB/NPRC-cGMP通路调控肉鸡肌内脂肪细胞的脂代谢过程。     

干扰HNRNPAB对牛骨骼肌卫星细胞增殖与分化的作用研究

为了研究核不均一核糖核蛋白AB （heterogeneous nuclear ribonucleoprotein AB,HNRNPAB）对牛骨骼肌卫星细胞增殖与分化的影响。本研究以体外分离培养的鲁西黄牛胎牛原代骨骼肌卫星细胞为试验材料,体外诱导成肌分化,分别收取分化前和分化后第1、2、3天的细胞,提取RNA （每组设置4个重复）或蛋白质（每组设置3个重复）,通过qRT-PCR、Western blot检测HNRNPAB在成肌分化前后的表达情况。随后合成HNRNPAB的干扰RNA,并转染牛骨骼肌卫星细胞干扰HNRNPAB的表达,设置阴性对照组;在试验组和对照组中,分别利用EdU试验检测细胞增殖情况,qRT-PCR技术、Western blot技术检测HNRNPAB、增殖标志因子Pax7、Cyclin D1及分化标志因子MyoG、MyHC的mRNA表达水平及蛋白表达水平。结果显示,HNRNPAB在牛骨骼肌卫星细胞成肌分化过程中的mRNA表达呈现先升后降的趋势,在分化第1天表达量最高,分化前后蛋白表达水平也具有显著差异。干扰HNRNPAB后,EdU细胞阳性率极显著上升（P<0.01）,增殖标志因子Pax7、Cyclin D1的mRNA水平与对照组相比极显著下降（P<0.01）,Pax7蛋白表达水平极显著上升（P<0.01）;与对照组相比,分化标志因子MyoG、MyHC的mRNA表达水平极显著升高（P<0.01）,蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。本研究结果表明,干扰HNRNPAB后降低了牛骨骼肌卫星细胞增殖标志因子的转录水平,提高了Pax7的蛋白表达水平,并促进牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化过程。     

西门塔尔牛胰腺间充质干细胞原代培养及其多向分化潜能研究

旨在对西门塔尔牛胰腺间充质干细胞（pancreatic mesenchymal stem cells,PMSCs）进行原代培养并研究其体外分化潜能,为细胞疗法和组织工程学方面提供新的种子细胞。本研究从3月龄的西门塔尔牛胚胎中无菌分离胰腺组织,分别采用胶原酶消化法和组织块贴壁法分离PMSCs,进行原代培养;绘制第3代、第9代、第15代细胞生长曲线并测定群体倍增时间及克隆形成能力,采用免疫荧光检测干细胞表面标志物（CD29、CD44、CD73、CD90、CD34和CD45）,RT-PCR检测干细胞细胞表面标志物（CD29、CD44、CD73、CD90、CD106、CD166、CD34和CD45）;染色体核型分析检测其基因稳定性,通过向成脂、成骨、成软骨和成肝样细胞诱导分化,检测其多向分化潜能。结果表明,两种方法都可成功分离出PMSCs,细胞贴壁后形态均为长梭形,漩涡状生长,生长趋势呈典型的S形;第9代细胞群体倍增时间显著低于第15代而高于第3代（P<0.01）;第9代PMSCs克隆形成率显著低于第3代而显著高于第15代（P<0.05）;免疫荧光结果表明,PMSCs特异性表达CD29、CD44、CD73和CD90,RT-PCR结果显示PMSCs特异性表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD106和CD166,未表达造血细胞表面标志物CD34和CD45,与国际细胞治疗学会组织干细胞委员会指定的MSCs表面标记物相对应;核型分析表明,PMSCs为正常二倍体（2n=60,XY）,染色体基因组未发生变异;特异性染色和RT-PCR结果表明,从西门塔尔牛体内获得的PMSCs可分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞和肝样细胞。本试验证实两种方法均可成功建立西门塔尔牛PMSCs体外分离培养体系,PMSCs具有活性好、增殖速度快的特点,与MSCs有相似的生物学特性和多项分化的潜能。可为组织工程学提供新的种子细胞。     

鞘磷脂对小鼠肌卫星细胞C2C12成肌分化的影响

研究通过检测鞘磷脂对小鼠肌卫星细胞C2C12成肌分化的影响,旨在为阐明鞘磷脂对解偶联蛋白1（UCP1）基因敲入猪骨骼肌生长的影响提供理论依据。用ELISA法检测野生型猪和UCP1敲入猪背部肌肉及血清中总鞘磷脂含量;利用CCK8法检测不同浓度（0、5、20、50和100 μg/mL）鞘磷脂对C2C12细胞增殖和毒性的影响,并通过形态学观察和分化前后细胞成肌分化标记基因生肌因子5（Myf5）、生肌决定因子（MyoD）、肌细胞生成素（Myogenin）、生肌调节因子4（MRF4）的表达检测,建立C2C12成肌分化体系;在成肌分化培养基中添加上述不同浓度的鞘磷脂,诱导分化6 d后,通过形态学和Myogenin免疫荧光染色观察肌管的形成及成肌分化标记基因的mRNA表达水平检测,确定鞘磷脂的最佳添加浓度。用筛选出的最佳鞘磷脂添加浓度诱导细胞成肌分化,在2、4和6 d收集细胞,利用实时荧光定量PCR检测周期蛋白相关基因CyclinD1、CyclinE、CDK2和CDK4的表达水平,CCK8法检测诱导2 d细胞的活力。结果发现,与野生型猪相比,UCP1-KI猪背部肌肉组织中总鞘磷脂含量显著增加（P<0.05）;血清鞘磷脂含量差异不显著（P>0.05）;不同浓度鞘磷脂对未分化C2C12细胞的增殖无显著影响（P>0.05）;成肌分化6 d后,C2C12细胞形成明显的肌管,成肌分化标记基因Myf5、MyoD、Myogenin、MRF4的mRNA和蛋白水平均极显著上调（P<0.01）;与未添加鞘磷脂的对照组相比,20 μg/mL鞘磷脂组有更多肌管形成,Myogenin阳性信号和肌管融合指数均显著增加（P<0.05）,Myogenin、MRF4基因的表达量显著提高（P<0.05）。利用20 μg/mL鞘磷脂诱导细胞分化,在分化2 d时,处理组CyclinE、CDK4基因表达量显著高于对照组（P<0.05）,细胞活力也显著高于对照组（P<0.05）;分化6 d后,处理组CyclinD1、CyclinE、CDK2、CDK4基因表达量均显著低于对照组（P<0.05）。本研究结果表明,20 μg/mL鞘磷脂能够提高小鼠肌卫星细胞C2C12分化早期细胞活力和成肌分化效率,可为研究鞘磷脂对骨骼肌生长的影响提供一定的参考。     

DDR1对奶牛乳腺上皮细胞增殖与凋亡的调控作用

旨在通过干扰或过表达盘状蛋白结构域受体1（DDR1）基因,探讨其对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡及周期的影响。本研究将DDR1基因小干扰RNA片段和过表达载体pcDNA3.1-DDR1转染奶牛乳腺上皮细胞,采用qRT-PCR和Western blot检测细胞中DDR1的干扰和过表达效果;利用CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡（早凋、晚凋）的变化;利用qRT-PCR检测增殖与凋亡相关基因的表达情况。结果,在奶牛乳腺上皮细胞中干扰DDR1基因后,其mRNA和蛋白表达分别下调94%和30%,而过表达DDR1基因后,其mRNA和蛋白表达分别上调68.24和1.38倍;干扰DDR1极显著抑制细胞的增殖（P<0.01）,细胞早凋与晚凋比例极显著上升（P<0.01）;干扰组G1期细胞比例极显著上升（P<0.01）,S期细胞比例极显著下降（P<0.01）,G2期细胞比例显著下降（P<0.05）,提示细胞阻滞在G0/G1期。相反,过表达DDR1能显著促进细胞增殖（P<0.05）,显著抑制细胞晚期凋亡（P<0.05）,G1期细胞比例极显著下降（P<0.01）,S期细胞比例极显著上升（P<0.01）,促进细胞由G1期向S期的转换。qRT-PCR检测结果显示,干扰DDR1后显著上调BAX、Caspase9基因的表达（P<0.05）,极显著上调P53、FAS基因的表达（P<0.01）,且显著下调PCNA、CyclinB1基因的表达（P<0.05）;过表达DDR1后,分别显著和极显著下调Cytc与BAX基因的表达（P<0.05,P<0.01）,并极显著上调CyclinB1基因的表达（P<0.01）。综上可见,DDR1能够调控奶牛乳腺上皮细胞的增殖、凋亡和周期,可为阐明DDR1参与奶牛乳腺上皮细胞生长发育的分子机制提供参考。     

雌激素调控奶牛乳腺上皮细胞凋亡及生长周期作用机制的研究

试验旨在研究雌激素对奶牛乳腺上皮细胞（BMECs）凋亡及生长周期的影响。通过添加MAPK/ERK信号通路阻断剂探索雌激素调控BMECs凋亡及生长周期具体的作用机制,采用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的变化情况,实时荧光定量PCR检测Bcl-2、Caspase3及CyclinD1基因mRNA的表达丰度。结果显示,对照组BMECs凋亡率极显著低于BMECs+PD98059、BMECs+E₂+PD98059组（P<0.01）,Bcl-2 mRNA表达丰度极显著高于BMECs+PD98059组（P<0.01）,Caspase3 mRNA表达丰度显著低于BMECs+PD98059组（P<0.05）;对照组细胞比例在G1期显著高于BMECs+E₂组（P<0.05）,极显著低于BMECs+E₂+PD98059组（P<0.01）,S期细胞比例极显著高于BMECs+PD98059、BMECs+E₂+PD98059组（P<0.01）,G2期细胞比例极显著低于BMECs+PD98059、BMECs+E₂+PD98059组（P<0.01）;对照组CyclinD1 mRNA的表达丰度极显著高于BMECs+PD98059组（P<0.01）;BMECs+E₂+PD98059组的Bcl-2 mRNA的表达量极显著高于BMECs+PD98059组（P<0.01）,Caspase3 mRNA的表达量显著低于BMECs+PD98059组（P<0.05）。结果表明,MAPK/ERK信号通路参与BMECs的增殖及细胞生长周期调节的过程,且雌激素可通过MAPK/ERK信号通路抑制BMECs的凋亡,MAPK/ERK信号通路可能参与由雌激素调控的细胞生长周期的进程。     

移植脐带间充质干细胞对荷斯坦公犊日增重及血清生长因子水平的影响

本试验旨在研究移植脐带间充质干细胞对荷斯坦公犊日增重及血清生长因子水平的影响.选取1月龄体重相近的荷斯坦公犊28头,随机分为对照组和试验组,采集健康的荷斯坦新生胎牛的脐带组织,通过胰酶消化筛选法体外分离、纯化及培养牛脐带间充质干细胞(UC-MSCs),试验组按公犊体重(3×10⁵个/kg干细胞)稀释至8 mL颈静脉注射至体内,对照组注射等量生理盐水.试验期154 d.结果表明,注射UC-MSCs后,试验组公犊平均体重在4、5、6月龄时显著高于对照组(P< 0.05);试验组公犊平均日增重在3、4月龄时显著高于对照组(P< 0.05),而在6月龄时极显著高于对照组(P< 0.01).试验组血清中类胰岛素样生长因子(IGF-1)水平在4月龄时显著高于对照组(P< 0.05);试验组血清中血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子(TGF-α)水平在3月龄时显著高于对照组(P< 0.05);试验组血清中VEGF、成纤维细胞生长因子(bFGF)、TGF-α水平在6月龄时显著或极显著高于对照组(P< 0.05;P< 0.01);2、3、4、6月龄时,试验组血清中骨形态发生蛋白(BMP-7)水平显著低于对照组(P< 0.05).综上所述,移植UC-MSCs能显著提高公犊的平均日增重及血清中IGF-1、VEGF、TGF-α、bFGF水平,血清中这些生长因子与公犊的生长发育密切相关,进而影响其生长性能.     

DHA对高脂饲粮诱导肝脏脂肪积累的预防作用

[目的] 探索二十二碳六烯酸（DHA）对高脂饲粮诱导肝脏脂肪积累的预防机制。[方法] 将32只雄性SPF级C57BL/6小鼠均分为4组,对照组（Con）饲喂普通饲粮,模型组（Model）饲喂高脂饲粮,DHA组分别在高脂饲粮中添加0.2 g DHA（DHAL）和1.0 g DHA（DHAH）,饲喂周期为20周。饲喂期间每天称量体重及食物重量,计算摄食量;饲喂结束,采集肝脏和血液,ELISA法检测肝脏脂联素和血清甘油三酯（TG）的含量,实时荧光定量PCR检测新生脂肪合成关键酶（SREBP-1c、FAS）、脂肪酸氧化关键基因（PPARα、PPARγ、CPT-1A和ACOX）、线粒体基因（PGC-1α）、褐色脂肪化基因（Prdm16、UCP1）的表达,Western blotting法检测肝脏磷酸化ACC、AMPK和AKT蛋白的表达。[结果] 与Con组相比,Model组终体重、体脂重量和TG含量均显著增加（P<0.05）,肝脏脂联素浓度显著降低（P<0.05）。与Model组相比,DHAL和DHAH组终体重、体脂重量和TG含量均显著降低（P<0.05）,肝脏脂联素水平显著增加（P<0.05）。实时荧光定量PCR结果表明,与Con组相比,Model组SREBP-1c和FAS mRNA表达量均显著增加（P<0.05）,PPARα、CPT-1A、ACOX、PGC-1α和UCP1 mRNA表达均显著降低（P<0.05）;与Model组相比,DHAL和DHAH组SREBP-1c和FAS mRNA表达量均显著降低（P<0.05）,且DHAH组表达量均显著低于DHAL组（P<0.05）,DHAL和DHAH组PPARα、CPT-1A、ACOX、PGC-1α、Prdm16和UCP1 mRNA表达量均显著增加（P<0.05）,DHAH组CPT-1A和ACOX mRNA表达量显著低于DHAL组（P<0.05）,PPARγ的mRNA表达量在4组中没有显著差异（P>0.05）。Western blotting结果表明,Model组p-ACC显著高于Con和DHAH组,但显著低于DHAL组;Model组p-AMPK/AMPK和pAKT/AKT比值均显著低于Con组（P<0.05）,DHAH组p-AMPK/AMPK和pAKT/AKT比值均显著高于Model和DHAL组（P<0.05）。[结论] DHA可降低高脂饲粮导致的C57BL/6小鼠终体重、体脂和TG含量的升高,增加肝脏脂联素的水平,促进脂肪酸氧化和白色脂肪细胞褐色化,从而预防肝脏的脂肪积累。     

Effect of Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells and Bovine Mammary Gland Epithelial Cells Co-culture under the Serum-free Condition on Expression of IGF-Ⅰ

The study was aimed to explore the effect of umbilical cord mesenchymal stem cells(UC-MSCs) and bovine mammary gland epithelial cells (BMECs) under the serum-free co-culturing condition on expression of IGF-Ⅰ. UC-MSCs and BMECs were co-cultured directly at the concentration ratios of 1:2,in control groups, UC-MSCs and BMECs were cultured alone.Using ELISA method to detect the IGF-Ⅰlevels in each group supernatant at 48 h, and two kinds of cells were separated by Transwell Chambers, the IGF-Ⅰ and IGF-ⅠR mRNA expression values of each group were estimated with Real-time PCR. The results showed that the IGF-Ⅰ concentration of UC-MSCs and BMECs mixed co-culture was significantly higher than the UC-MSCs group (P < 0.05),and extremely significantly higher than the BMECs group (P < 0.01); The IGF-Ⅰ mRNA expression of UC-MSCs/BMECs and BMECs/UC-MSCs groups were extremely significantly higher than the control group (P < 0.01),and the IGF-Ⅰ mRNA expression of BMECs/UC-MSCs group was significantly higher than the UC-MSCs/BMECs group (P < 0.05); The IGF-ⅠR mRNA expression of UC-MSCs/BMECs and BMECs/UC-MSCs groups were higher than the control group (P < 0.05;P < 0.01), BMECs/UC-MSCs group had significant difference compared with UC-MSCs/BMECs group (P < 0.05). Conclusively, the co-culture of UC-MSCs and BMECs was able to improve the IGF-ⅠR and IGF-Ⅰ mRNA expression under the serum-free condition in vitro,and the IGF-Ⅰ concentration level was correspondence with the IGF-ⅠR mRNA expression, IGF-Ⅰmainly existed in UC-MSCs.     

白藜芦醇对体外培养的水牛卵丘细胞增殖活力及其相关基因mRNA表达的影响

[目的] 研究白藜芦醇（resveratrol,RES）对水牛卵丘细胞体外培养过程中细胞增殖活力、激素分泌、卵丘扩展及抗凋亡和抗氧化能力的影响。[方法] 用不同浓度（0（对照组）、1、10、20、30、40、50和60 μmol/L）RES培养卵丘细胞,用CCK-8试剂盒测定细胞增殖活力,筛选最佳RES处理浓度及时间用于后续试验。用ELISA法测定培养液中卵丘细胞分泌的雌二醇（estradiol,E₂）和孕酮（progesterone,P₄）的含量,实时荧光定量PCR法测定卵丘细胞扩展、凋亡和抗氧化相关基因的相对表达量。[结果] 与对照组相比,在体外培养24~36 h内,1、10和20 μmol/L RES组水牛卵丘细胞的增殖活力均有升高趋势,10 μmol/L RES处理36 h细胞活力最强,因此用于后续试验中细胞的处理。体外培养36 h时,10 μmol/L RES组细胞增殖能力和E₂、P₄的分泌显著增加（P<0.05）;10 μmol/L RES组卵丘细胞扩展相关基因穿透素3（PTX3）、前列腺素内过氧化物合酶2（PTGS2）、抗凋亡基因B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和超氧化物歧化酶1（SOD1）基因mRNA相对表达量显著或极显著增加（P<0.05;P<0.01）,而促凋亡基因Bcl-2相关蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）和p21的表达量显著或极显著降低（P<0.05;P<0.01）,透明质酸合酶2（HAS2）和过氧化氢酶（CAT）的表达量无显著差异（P>0.05）。[结论] 培养液中添加10 μmol/L RES能够提高水牛卵丘细胞体外培养的增殖活力,促进卵丘细胞激素分泌和卵丘细胞扩展,并增强卵丘细胞抗氧化能力并减少细胞凋亡。     

无血清条件下UC-MSCs和BMECs共培养对IGF-Ⅰ表达的影响

试验旨在探讨无血清条件下脐带间充质干细胞（UC-MSCs）和奶牛乳腺上皮细胞（BMECs）共培养对类胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）表达的影响,将UC-MSCs和BMECs按1：2直接共培养,对比单纯培养的两种细胞,48 h时利用ELISA法检测各组上清IGF-Ⅰ浓度水平,再利用Transwell小室将两种细胞分离培养,实时荧光定量 PCR检测各组细胞IGF-ⅠR、IGF-Ⅰ mRNA的表达。结果显示,共培养中IGF-Ⅰ浓度显著高于UC-MSCs组（P < 0.05）,极显著高于BMECs组（P < 0.01）;UC-MSCs/BMECs、BMECs/UC-MSCs组IGF-Ⅰ mRNA表达值均极显著高于单纯培养组（P < 0.01）,BMECs/UC-MSCs组显著高于UC-MSCs/BMECs组（P < 0.05）;UC-MSCs/BMECs、BMECs/UC-MSCs组IGF-ⅠR mRNA表达值显著或极显著高于单纯培养组（P < 0.05;P < 0.01）,BMECs/UC-MSCs组较UC-MSCs/BMECs组差异显著（P < 0.05）。综上,体外无血清培养条件下,UC-MSCs和BMECs共培养可显著提高IGF-ⅠR及IGF-Ⅰ mRNA表达,IGF-Ⅰ浓度水平和IGF-ⅠR mRNA的表达具有一致性,IGF-Ⅰ主要存在于UC-MSCs中。     

复合植物提取物对育肥期苏姜猪胴体性状、肌肉品质及血清指标的影响

[目的] 试验旨在探讨复合植物提取物对育肥期苏姜猪胴体性状、肌肉品质及血清指标的影响。[方法] 将200头120日龄、体重55 kg的健康苏姜猪阉公猪随机分为5组,每组4个重复,每个重复10头。对照组饲喂玉米-豆粕型基础饲粮,试验A、B、C、D组分别在基础饲粮中添加100、200、300、400 mg/kg植物提取物（由杜仲、女贞子、五味子按4：3：1混合提取,提取物的主要活性成分为绿原酸、齐墩果酸和木脂素等）。试验预试期7 d,正试期45 d。试验结束后采血并屠宰,测定胴体性状、肌肉成分、肉品质、血清生化指标、抗氧化指标及免疫指标。[结果] B和C组平均背膘厚显著低于对照组（P<0.05）,B组眼肌面积显著高于对照组和A组（P<0.05）。各组间粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分等常规肌肉成分均无显著差异（P>0.05）。试验B组大理石纹评分显著高于对照组、A和C组（P<0.05）。B和D组肉色评分显著高于对照组（P<0.05）。B组肌肉红度显著高于对照组和A组（P<0.05）。B组血清总蛋白含量显著高于对照组（P<0.05）。D组血清白蛋白含量显著高于对照组（P<0.05）。A和D组血清MDA含量显著低于对照组（P<0.05）。B组IgA含量显著高于对照组与A组（P<0.05）。其他指标各组间差异均不显著（P>0.05）。[结论] 在苏姜猪育肥期基础饲粮中添加200 mg/kg复合植物提取物有利于改善胴体性状、肌肉品质及血清生化指标,可在苏姜猪的生产中加以应用。     

地菍粗多糖对高脂饮食诱导肥胖小鼠脂代谢的影响

[目的] 研究地菍粗多糖对高脂饮食诱导肥胖小鼠脂代谢的影响。[方法] 将小鼠随机分为6组：空白组、模型组、阳性组（0.025 mg/g奥利司他）及高、中、低剂量地菍粗多糖（1.2、0.6和0.3 mg/g）处理组,每组12只。空白组小鼠喂食普通维持饲料,其余各组小鼠喂食高脂饲料,空白组、模型组给予生理盐水,阳性组给予0.025 mg/g奥利司他,高、中、低剂量地菍粗多糖组分别给予1.2、0.6和0.3 mg/g地菍粗多糖,每天灌胃1次,连续给药30 d。给药结束,称量小鼠体重、附睾及肾脏周围脂肪和肝脏组织的重量;HE染色法观察脂肪和肝脏病理变化;生化法检测血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）含量及肝脏TC、TG含量;实时荧光定量PCR法测定肝脏中乙酰辅酶A羧化酶1（ACC1）基因相对表达量。[结果] 与模型组相比,高、中剂量地菍粗多糖组小鼠体重、Lee's指数、摄食量、肝脏及附睾和肾脏周围脂肪的重量均显著降低（P<0.05）,低剂量地菍粗多糖组小鼠体重、脂肪重量均无显著变化（P>0.05）,阳性组小鼠摄食量、肝脏重量均无显著变化（P>0.05）;阳性组、高剂量地菍粗多糖组小鼠的脂肪指数均显著降低（P<0.05）;阳性组、高剂量地菍粗多糖组小鼠血清TC、TG、LDL-C及肝脏TC、TG含量均显著降低（P<0.05）,血清HDL-C含量差异不显著（P>0.05）;中剂量地菍粗多糖组小鼠血清TC、TG及肝脏TC含量均显著降低（P<0.05）。阳性组及高、中、低剂量地菍粗多糖组小鼠脂肪细胞均不同程度变小,肝细胞内脂滴小空泡明显减少,且ACC1基因的相对表达量均显著下调（P<0.05）,分别降低了20%、42%、15%和11%。[结论] 地菍粗多糖可通过调节高脂饮食诱导肥胖小鼠的脂代谢水平,从而干预肥胖的发生。     

Isolation and Differentiation of Mesenchymal Stem Cells From Bovine Umbilical Cord Blood

Currently, mesenchymal stem cells (MSCs) are used in veterinary clinical applications. Bone marrow and adipose tissue are the most common sources of stem cells derived from adult animals. However, cord blood which is collected non‐invasively is an alternative source of stem cells other than bone marrow and adipose tissue. Moreover, high availability and lower immunogenicity of umbilical cord blood (UCB) haematopoietic stem cells compared to other sources of stem cell therapy such as bone marrow have made them a considerable source for cell therapy, but MSCs is not highly available in cord blood and their immunogenicity is poorly understood. In this study, the cells with spindle morphology from 7 of 9 bovine UCB samples were isolated and cultured. These mesenchymal stromal cells were successfully differentiated to osteocytes, chondrocytes and adipocytes. In addition, Oct‐4 and SH3 were determined by RT‐PCR assay. It is the first report of isolation, culture, characterization and differentiation of bovine umbilical stem cells.     

妊娠母羊饲粮添加叶酸对不同出生类型新生羔羊脐带血管生成相关基因表达的影响

试验旨在研究妊娠母羊饲粮添加叶酸对不同出生类型新生羔羊脐带血管生成相关基因表达的影响。选用体重相近、年龄一致的经产湖羊母羊120只,人工授精后随机分为3组,分别单栏饲喂补充0、16和32 mg/kg DM叶酸的全混合日粮。母羊分娩时,每组随机采集出生类型为双羔和三羔的胎盘与脐带样品各3个,共18个样品用于测定胎盘相关指标,胎儿脐带样品利用实时荧光定量PCR法检测血管生成相关基因——血管内皮生长因子A(VEGFA)、转换生长因子-β3(TGF-β3)、血管生成素-1(ANGPT-1)、血管内皮生长因子受体-1(FLT-1)和血管内皮生长因子受体-2(KDR)基因的相对表达水平。结果表明:妊娠母羊饲粮添加叶酸对胎盘重、子叶数、胎盘效率无显著影响(P>0.05),对新生羔羊脐带TGF-β3、ANGPT-1、FLT-1、KDR基因的相对表达水平无显著影响(P>0.05),但能显著提高VEGFA基因的相对表达水平(P<0.05)。而出生类型对胎盘重、子叶数、胎盘效率和新生羔羊脐带VEGFA、TGF-β3、FLT-1、KDR基因的相对表达水平无显著影响(P>0.05),但是三羔脐带ANGPT-1基因的相对表达水平显著高于双羔(P<0.05)。由此可见,妊娠母羊饲粮添加叶酸对胎盘发育没有显著影响,但是显著提高了新生羔羊脐带VEGFA基因的相对表达水平,有利于新生羔羊脐带血管生成。同时,新生羔羊三羔脐带ANGPT-1基因的相对表达水平显著高于双羔,有利于多羔脐带血管生成。