四川规模化鸡场鸡致病性E.coli血清型、耐药性和质粒图谱的研究

从四川10个规模化鸡场分离的经生化鉴定、动物回归试验获得46株鸡致病性E.coli。对46株鸡致病性E.coli进行了耐药性、血清型鉴定和质粒DNA分析的研究。试验结果表明：鸡致病性大杆菌易产生耐药性，且多为多重耐药；鉴定出36株大肠杆菌的O血清型共16种，占鉴定菌株的78.3%；流行的主要血清为O89、O141、O119、O127和O131，共22株，占定型菌株的61.6%，鸡致病性大肠杆菌血清型多，各地血清型各类差异大；质粒得率为100％，来源相同的菌株有相同或相似的质粒图谱和酶切图谱，来源不同的菌株质粒图谱一般不同，同一血清型可以有不同的质粒图谱。     

天津4种特色引进家禽大肠埃希菌的分离鉴定及药敏试验

为了解天津几种引进的特色家禽致病性大肠埃希菌的流行情况,对引进的矮脚鸡、苏秦绿壳蛋鸡、大围山微型鸡和泰和乌骨鸡4个品种患腹泻病鸡的病料进行细菌学检验和药敏试验,经分离培养、染色镜检、生化试验、毒力基因ChuA鉴定、血清学试验和动物试验,共分离出9株鸡大肠埃希菌,其中从5株中能够检出ChuA毒力基因,这5株菌分别为O2、O78和O88,有3种血清型。动物试验结果表明,携带ChuA基因的5株菌均具有致病性,且毒力不同,其中从矮脚鸡分离的毒株毒力最强,致死率为100%。药敏试验结果表明,5株致病性大肠埃希菌对链霉素、阿莫西林/克拉维酸敏感,对磷霉素和环丙沙星均存在不同程度的耐药现象,其中对庆大霉素、头孢唑啉和氨苄西林严重耐药,研究结果为鸡大肠杆菌病防控提供了参考。     

鸡源致病性大肠杆菌的耐药基因PCR检测

鸡大肠杆菌病是由大肠埃希氏杆菌(Escherichiacoli,E.coli)某些血清型菌株所引起的一类疾病的总称,是危害养鸡业主要细菌性疾病。大肠杆菌血清型众多,且易产生耐药性。鸡致病性大肠杆菌的耐药性与本身携带的耐药基因具有一定的相关性。本实验临床分离5株鸡致病性大肠杆菌,用PCR方法对其四环素类药物的耐药基因tetA和tetB分布进行了检测,结果显示,临床分离5株鸡致病性大肠杆菌均携带检四环素类药物的耐药基因tetA和tetB检出率均为100%,因此,证实了说明临床分离5株鸡致病性大肠杆菌对四环素类药物存在很强的耐药性。     

鸡致病性E.coli地方株血清型的鉴定、毒力基因及致病性检测

为了研究河北秦皇岛地区鸡致病性大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)地方流行株的优势血清型、毒力基因和致病性,本研究采用常规鉴定方法和16SrRNA PCR方法,从采集自河北秦皇岛地区不同养鸡场的83份病鸡组织中分离鉴定出56株E.coli。人工感染1日龄雏鸡试验表明,46株分离株为致病性E.coli。采用玻片凝集试验、PCR方法分别测定致病性E.coli分离株的血清型分布和16种毒力基因携带情况。结果显示,定型的42株致病性E.coli分离株包括11种血清型,以O7 8、O89、O142及O1为优势血清型;46株致病性E.coli分离株中以irp2、fuyA、ompT、Iss a、iutA、iroN和hlyF毒力基因检出率较高,在89.1%~100.0%,其他毒力基因检出率为22.0%~72.0%。选择优势血清型代表株QH1(O78)、QH1(O89)、QH1(O142)和QH1(O1)人工感染1日龄雏鸡,计算半数致死量(LD50),确定其致病性。结果表明,QH1(O78)株致病性最强,对1日龄雏鸡的LD50为3.16×106 CFU/mL;对14,49日龄雏鸡的LD50分别为1.07×107,5×108 CFU/mL。本研究为河北秦皇岛地区鸡致病性E.coli地方流行株防控提供试验依据。     

台湾基因Ⅰ型鸡传染性支气管炎病毒SCTW株的分离鉴定及致病性研究

为分离鉴定鸡传染性支气管炎病毒(IBV)及其致病性,本研究通过病料鸡胚接种和鸡胚尿囊液的RT-PCR检测,从四川某养鸡场的发病鸡群中分离出一株IBV.其S1基因测序分析表明,该病毒分离株属于台湾基因Ⅰ型(TWⅠ)IBV,命名为SCTW株,这是中国大陆地区首次分离的TWⅠ型IBV.将该分离株与禽源致病性大肠杆菌(E.coli)分别或混合感染15日龄白羽肉鸡以鉴定其致病性,结果显示:SCTW分离株具有较强的致病性;而且E.coli的混合感染可明显增加SCTW的发病率和病死率,使其组织病理变化更加严重.因此,加强IBV的流行病学调查,做好E.coli的防治,对鸡传染性支气管炎(IB)的防制有重要的意义.     

内蒙古呼和浩特地区牛源致病性大肠杆菌的血清型、毒力基因检测及耐药性分析

为鉴定内蒙古呼和浩特地区奶牛肠道致病性大肠杆菌(E.coli)分离株的血清型、毒力基因和耐药性,本研究分别采用接种小鼠试验、玻片凝集试验、PCR方法及药敏纸片法测定E.coli分离株的致病性、血清型分布、8种毒力基因及对20种抗生素的敏感性。结果表明,从内蒙古奶牛场采集的100份粪便样品中鉴定出50株致病性E.coli(50%)。定型的24株致病性E.coli的血清型共10种,以O18、O146和O152为优势血清型,共14株,占定型菌株的58.3%。50株致病性E.coli中,毒力基因irp2、eae A、stx1、stx2和hly A的检出率分别为100%、50%、14%、10%和8%。另外,所有血清型菌株对受试的抗菌药物呈多重耐药性,并且均耐受青霉素、四环素、多西环素、利福平、复方新诺明和阿莫西林6种抗生素,而且全部含有毒力基因irp2。本研究结果为牛源致病性E.coli病的防控和临床用药提供了实验依据。     

fimC基因与鸡源大肠杆菌致病性的相关

将20株鸡大肠杆菌分别腹腔接种1日龄健康雏鸡,检测其致病性。同时以该20株菌的基因组DNA为模板,应用PCR技术分别进行fimC基因的扩增,结果95％高致病力菌为fimC^ ,而其它非致病性或致病力极低的菌株均为fimC^-。结合相关资料表明,fimC基因几乎只存在于高致病力鸡大肠杆菌中,可以作为高致病力鸡大肠杆菌鉴定的标志基因。将O2菌株PCR扩增产物克隆到pMD18-T载体上,并对其进行酶切鉴定和测序分析,测序结果与参考序列经同源性比较,核苷酸序列同源性为97．9％,氨基酸序列同源性为96．0％,证明所扩增基因是fimC基因。     

iss基因与鸡大肠杆菌毒力相关性的分析

对20株鸡源大肠杆菌的致病性进行测定。并对不同致病性鸡大肠杆菌的iss基因进行了扩增。结果表明：鸡E．coli O1、O2、北京1、北京3、贵州1、新大、田大、E10、E11、E27对1日龄雏鸡具有较强的毒力;O78、E5、E21的致病性较弱;而E．coli E1、E4、E7、E8、E9、E14、E18接种雏鸡均无死亡。iss基因在致病性鸡E．coli O1、O2、O78、北京1、北京3、贵州1、新大、田大、E5、E21、E10、E11、E27中的扩增频率为92．31％;在毒力较强的致病性鸡Ecoli O1、O2、北京1、北京3、贵州1、新大、田大、E10、E11、E27中的扩增频率为100％;在无致病性(或低毒力)的鸡Ecoli E1、E4、E7、E8、E9、E14、E18中的扩增频率为14．29％。结果表明：iss基因在致病力强的菌株中的扩增频率明显高于其它菌株,iss基因的存在与鸡大肠杆菌的毒力问有一定的相关性。     

鸡源致病性大肠杆菌血清型鉴定及耐药性分析

为了了解山东、河北和河南等省部分地区养殖场鸡源致病性大肠杆菌的血清型及耐药性,试验采用细菌分离和生化鉴定方法对鸡大肠杆菌进行分离和鉴定,通过动物试验确定分离大肠杆菌的致病性,应用血清学方法和药敏试验对致病性大肠杆菌的血清型及耐药性进行研究。结果表明:分离鉴定的119株大肠杆菌中致病性菌株有110株,其中92株致病性菌株能够定型,分别属于15个血清型,有5株出现交叉凝集,O14、O35、O1、O2、O78、O88为优势血清型;分离鉴定的致病性大肠杆菌对环丙沙星、头孢噻肟、头孢哌酮等最敏感,对林可霉素、头孢克肟、卡那霉素、庆大霉素、红霉素的耐药率达60%以上。说明分离的致病性大肠杆菌血清型存在复杂性,对大部分临床常用药物产生了不同程度的耐药。     

四川规模化猪场仔猪黄、白痢的分子流行病学研究

在系统鉴定、药敏试验和血甭型鉴定的基础上,对52株致病性大肠杆菌和4株标准血清型大肠杆菌进行了质粒DNA分析,结果表明,菌株的质粒得率为100%,来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱,来源不同的菌株具有不同的质粒图谱,质粒DNA分析为四川规模化猪场致病性E.coli的分子流行病学调查提供了科学依据。质粒图谱与血清型及耐药谱之间无明显关系。     

辽西地区鸡大肠杆菌分离鉴定、药敏及IHA诊断液制备

本试验从辽西地区部分养鸡场采集具有典型临诊特征的鸡大肠杆菌病的病、死鸡病料,进行细菌分离培养和鉴定,分离到89株鸡大肠杆菌。通过血清型鉴定,鉴定出血清型的82株,血清型9种,分别为O₁、O₂、O₈、O₁₅、O₁₈、O₃₅、O₇₈、O₁₁₄、O₁₄₁,其中O₁₈、O₃₅型鸡大肠杆菌为辽西地区优势流行血清型。将分离纯化的O₃₅型鸡大肠杆菌超声裂解后,加入致敏双醛化处理过的红细胞,制备O₃₅型鸡大肠杆菌间接血凝诊断液,验证其特异性、敏感性和稳定性,完成诊断液的标准化。同时采用Kirby-Bauer纸片法,选择12种标准药敏片对此89株分离菌株进行药敏试验。结果表明,间接血凝诊断液特异性和敏感性好,质量稳定。而药敏试验结果显示,各地区均有耐药菌株的出现,仅对氟苯尼考、头孢噻呋、左旋氧氟沙星、盐酸沙拉沙星这4种药物敏感性较高。     

Reciprocal competitive exclusion of salmonella and Escherichia coli by native intestinal microflora of the chicken and turkey

Both the native intestinal microflora of chickens that protected chicks against salmonellae and Escherichia coli and native turkey intestinal microflora were evaluated for their reciprocal protective capacity in both species against Salmonella typhimurium and a pathogenic strain of E. coli. Nalidixic-acid-resistant forms of the S. typhimurium and E. coli strains were used in seeder-bird and individual-bird challenge tests. Reciprocal protection was provided by native chicken and turkey intestinal microflora in chicks and poults against S. typhimurium and the pathogenic strain of E. coli. The chicken and turkey microflora appeared to be equally effective in protecting the two species from S. typhimurium, but protection against E. coli was somewhat greater in the chicken than in the turkey.     

河北省鸡病原性大肠杆菌的分离与鉴定

从河北省不同地区的发病鸡场分离培养出91株大肠杆菌，经致病力试验鉴定为病原性大肠杆菌，血清学鉴定，除有23株未能定型外，其余68株共鉴定出13个血清型，其中以O78、O2、O111、和O35等5个血清型检出率较高，分别占定型菌株的33．80％、26．50％、11．80％、5．88％和5．88％，而O78，O2和O111仅3个血清型却拥有49个分离株，占定型菌株的72．10％。     

鸡舍空气致病菌分离鉴定及其对消毒剂的敏感性观察

本试验研究金黄色葡萄球菌与大肠杆菌对河北省某地区规模化鸡舍空气的污染情况及其对消毒剂的敏感性。根据细菌分离培养特性、形态学、生化试验、动物试验和玻板凝集试验分离出7株金黄色葡萄球菌、6株致病性大肠杆菌（血清型为O15、O26、O93、O78）。经统计,金黄色葡萄球菌、大肠杆菌在规模化鸡舍空气中的检出率分别为63.6%、27.27%。应用滤纸片法测定其对消毒剂的敏感性,2种致病菌对消毒剂的敏感性差异较大,这表明规模化鸡舍空气受致病菌的污染程度不同,并且致病菌对消毒剂的敏感性有差异。     

Virulence factors associated with Escherichia coli present in a commercially produced competitive exclusion product

In this study, we assessed the pathogenic potential of Escherichia coli associated with a commercial competitive exclusion (CE) product by examining the phenotypic characteristics associated with E. coli virulent for humans and domestic animals. Most E. coli isolates were capable of proliferating in iron-deplete chicken sera. Interestingly, none of the E. coli isolates from the commercial CE product contained the bacterial adhesin Tsh characteristic of avian pathogenic E. coli associated with airsacculitis and colisepticemia. In terms of virulence potential for humans, most E. coli isolates (78%) were sensitive to killing by 12.5% human sera. Because of their sensitivity to human sera, the E. coli in the CE product are not likely to cause a serious systemic infection in humans and, therefore, do not present a risk of causing septicemia in humans. Because these isolates also lack the gene tsh, they are also less likely to cause systemic disease or airsacculitis in poultry than pathogenic strains commonly isolated from diseased birds.     

应用DNA芯片技术筛选禽致病性大肠杆菌和尿道致病性大肠杆菌的差异表达基因

为研究禽致病性大肠杆菌强毒株E058的毒力相关基因在鸡体内、体外表达情况以及E058和尿道致病性大肠杆菌HEC4在LB和尿液中培养的表达情况,本研究分别提取E058株在SPF鸡体内及E058株和HEC4株在LB和尿液中静置培养的总RNA,与构建的DNA芯片杂交,检测和分析RNA的差异表达情况。芯片的检测结果表明:E058株在鸡体内和LB中培养差异表达基因共有9个,上调基因为5个,分别为neuC、iutA、cvaC、aes-15和iucCD;下调基因为4个,分别为aes-8、gyrB、aec-30和mdh。另外,芯片检测结果也显示E058株和HEC4株在LB和尿液中静置培养,具有相似的基因表达情况。     

鸡源大肠埃希氏菌部分生物学特性研究

对从天津地区分离到的71株鸡大肠杆菌的部分生物学特性包括致病性、血清型、耐药特性和免疫原性等进行了研究。结果表明其中60株为致病性菌株,占分离菌株的84.5%;60个致病性菌株共定型出45个菌株,分属O1、O2、O5、O6、O20、O45、O53、O74、O75、O78、O88、O89、O92、O107、O111、O145等16个血清型,其中O78、O88、O2、O45、O53和O145为优势血清型,占定型菌株的73.4%;试验菌株具有广泛的耐药性,60个致病性菌株均为多重耐药。免疫原性测定试验结果表明,O2、O78、O88血清型菌株均可对相同血清型菌株提供很好的保护,但3个血清型菌株之间缺乏有效的保护。     

Vacuolating cytotoxin produced by avian pathogenic Escherichia coli

The purpose of this study was to determine whether avian pathogenic Escherichia coli produced cytotoxic activity. Culture supernatants of 20 E. coli strains isolated from cellulitis lesions in chickens, five E. coli strains from avian septicemia, five from swollen head syndrome, and five from the feces of healthy chickens were incubated with primary chicken embryo fibroblast (CEF) cells, primary chicken kidney (PCK) cells, a quail fibroblast cell line (QT-35), and four mammalian cell lines (human epithelioid cervical carcinoma, African green monkey kidney, Chinese hamster ovary, and human larynx epidermoid carcinoma). Cytotoxicity was observed with supernatants from the 30 avian pathogenic strains on the two primary chicken cells (CEF and PCK). The highest dilution of culture supenatant that induced cytotoxic changes in 50% of the cells was 1/64. Supernatants from the five strains from normal feces were noncytotoxic, and none of the supernatants was cytotoxic for the QT-35 or the four mammalian cell lines. The cytotoxic effect, which was observed as early as 2 hr after exposure of the cells, was maximal at 6 hr and was evident as vacuolation, morphologically indistinguishable from that previously reported for culture supernatants of Helicobacter pylori. Like the activity in H. pylori, the cytotoxicity of the avian pathogenic strains was destroyed by heating at 70 C for 30 min and by exposure to proteolytic enzymes and was retained by filtration with a 100,000 molecular weight cut-off ultrafilter. Supernatants of two vacuolating cytotoxin-positive cultures of H. pylori failed to induce vacuolation of the CEF and PCK cells but caused the characteristic vacuolation in HeLa and Vero cells. The observations suggest that avian pathogenic E. coli produce a cytotoxin that is similar to the cytotoxin of H. pylori but may be specific for avian cells.     

鸡新城疫与大肠杆菌病混合感染的诊治

鸡新城疫是由鸡新城疫病毒引起的一种急性、高度接触性传染病,致死率较高。目前,我国普遍采用以新城疫疫苗接种为主的综合防控措施,能够在很大程度上控制该病的大规模流行。鸡大肠杆菌病是由大肠埃希菌感染引起的传染病,多个血清型的大肠埃希菌是多种动物肠道内的常驻菌,因此其分布极为广泛,致病率也较高,并且多与其他疫病混合感染。通过开展病死鸡的病理变化检查、实验室检验以及分离菌株的药物敏感性试验,对临床接诊的鸡新城疫及大肠杆菌混合感染病例进行诊断并提出综合防控措施,以期为兽医临床2种疾病的防控提供有益参考。     

规模化肉鸡场大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

对驻马店地区规模化肉鸡场所发疾病进行调查,根据临床症状、病理变化及病原分离鉴定结果,确诊为大肠杆菌病。选择10株分离菌进行药敏试验,结果表明,多数菌对利高霉素、头孢曲松、丁胺卡那霉素、新霉素、氧氟沙星敏感,敏感率分别为80%、60%、60%、60%、50%;对多黏菌素、氟苯尼考的敏感率分别为10%、20%;分离的10株菌对甲砜霉素、强力霉素、恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、链霉素、阿莫西林、氨苄青霉素、土霉素全部耐药。